耐受性樹(shù)突狀細(xì)胞在銀屑病免疫反應(yīng)中的作用①

王亞卓 王 燕 齊 聰 李 萍

（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京市中醫(yī)研究所，銀屑病中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100010）

銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，影響全球大約1.25億人，是由免疫系統(tǒng)、炎癥介質(zhì)、銀屑病相關(guān)易感基因、自身抗原和多種環(huán)境因素相互作用所介導(dǎo)的自身免疫性疾病，典型臨床表現(xiàn)是鱗屑性紅斑或斑塊，皮損局限或廣泛分布［1-2］。固有免疫和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的紊亂是銀屑病發(fā)展和維持的原因［3］，IL-23/IL-17軸在銀屑病發(fā)病機(jī)制中占主導(dǎo)地位，而樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）作為IL-23的主要來(lái)源，不僅參與銀屑病炎癥的啟動(dòng)，在維持銀屑病的炎癥中也發(fā)揮重要作用［4］。在早期，多種因素可引起角質(zhì)形成細(xì)胞（keratinocyte，KC）損傷，受損的KC釋放抗菌肽LL-37和自身核苷酸，漿細(xì)胞樣DCs（plasmacytoid DCs，pDCs）可通過(guò)Toll樣受體（Tolllike receptor，TLR）7和TLR 9被LL-37-自身核苷酸復(fù)合物激活，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的IFN-α促進(jìn)經(jīng)典DCs（conventional/classical DCs，cDCs）成 熟，分 泌TNF-α、IL-12和IL-23可誘導(dǎo)Th1、Th22、γδT和Th17的成熟和分化，繼而產(chǎn)生大量的IL-17、IL-22、IFN-γ、TNF-α，從而導(dǎo)致銀屑病的發(fā)生發(fā)展［3-4］。目前研究發(fā)現(xiàn)了多種自身抗原，包括LL37、ADAMTSL5、PLA2G4D以及最新發(fā)現(xiàn)的表皮細(xì)胞代謝物多胺（Polyamines）［5-8］。在沒(méi)有外來(lái)抗原的情況下，克隆性T細(xì)胞擴(kuò)增提示炎癥性疾病具有自身免疫特性，而在銀屑病皮損中存在寡克隆性T細(xì)胞的增殖，被認(rèn)為是抗原特異性免疫反應(yīng)的指標(biāo)［9］。以上研究揭示了銀屑病具有很強(qiáng)的自身免疫特性，深入探究如何避免自身抗原引起的免疫反應(yīng)、如何使紊亂的免疫系統(tǒng)恢復(fù)正常穩(wěn)態(tài)從而抑制慢性炎癥反應(yīng)可能會(huì)有助于更好地認(rèn)識(shí)銀屑病、為銀屑病的治療提供新的思路。

DCs作為功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞（antigenpresenting cell，APC），連接固有免疫和適應(yīng)性免疫，在激活免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)免疫穩(wěn)態(tài)和免疫耐受中發(fā)揮重要作用，其通過(guò)病原體相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs）或損傷相關(guān)分子模式（damage associated molecular patterns，DAMPs）與專門的模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors，PRRs）結(jié)合，識(shí)別來(lái)自入侵微生物和受損宿主細(xì)胞的“危險(xiǎn)信號(hào)”，吞噬處理和呈遞抗原，增加共刺激分子的表達(dá)和細(xì)胞因子的產(chǎn)生，最終啟動(dòng)幼稚T細(xì)胞以激活適應(yīng)性免疫，發(fā)揮免疫性作用。

1 DCs的分類

DCs主要分為cDCs、pDCs、單核細(xì)胞來(lái)源的DCs（monocyte-derived DCs，moDCs）和朗格漢斯細(xì)胞（Langerhans cells，LCs）［10］。其中，根據(jù)表型標(biāo)志物和活化CD8+和CD4+T細(xì)胞能力的不同，cDCs分為cDC1和cDC2兩個(gè)亞群，cDC1通過(guò)MHCⅠ類分子加工和交叉表達(dá)抗原，激活CD8+T細(xì)胞和Th1細(xì)胞，相反cDC2在很大程度上與各種CD4+T細(xì)胞應(yīng)答有關(guān)［11］；由于發(fā)育途徑及T-bet和RORγt轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的不同，cDC2分為cDC2A和cDC2B，其中cDC2A表現(xiàn)為抗炎癥反應(yīng)，而cDC2B表現(xiàn)為促炎癥反應(yīng)［12］。pDCs可識(shí)別病毒或自身核酸，產(chǎn)生大量的Ⅰ型干擾素。moDCs與cDCs在表型上相似，除表達(dá)MHCⅡ、CD11b和CD11c外還表達(dá)CD64，表明其前身是單核細(xì)胞，經(jīng)典的moDCs在炎癥過(guò)程中產(chǎn)生TNF-α和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）［13］。LCs是 正 常 情 況 下 唯 一 存 在 于 表 皮 的DCs，然而轉(zhuǎn)錄組分析顯示LCs是介于DCs和巨噬細(xì)胞之間的APC［14］。

除了上述分類方法，DCs按功能可分為兩個(gè)亞群：免疫原性DCs（immunogenic dendritic cells，im-DCs）和 耐 受 性DCs（tolerogenic dendritic cells，tolDCs）［15］。imDCs具有分泌促炎細(xì)胞因子、激活幼稚T淋巴細(xì)胞、啟動(dòng)免疫反應(yīng)的功能，而tolDCs通過(guò)誘導(dǎo)抗炎反應(yīng)、抑制細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和促進(jìn)Treg細(xì)胞生成擴(kuò)增來(lái)誘導(dǎo)免疫耐受［16］。近年來(lái)，tolDCs在自身免疫性疾病、器官移植等領(lǐng)域中備受關(guān)注，研究發(fā)現(xiàn)許多藥物分子可誘導(dǎo)生成tolDCs發(fā)揮治療疾病的作用。

2 tolDCs的特性

2.1 tolDCs的表面分子標(biāo)志tolDCs的概念源于觀察到未成熟DCs能夠與T細(xì)胞相互作用并調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能，imDCs可以促進(jìn)效應(yīng)T細(xì)胞的分化，而tolDCs抑制效應(yīng)T細(xì)胞和自身反應(yīng)性T細(xì)胞，誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的發(fā)育［17］。細(xì)胞表面的共信號(hào)分子可以正向或負(fù)向調(diào)節(jié)T細(xì)胞的激活和功能，tolDCs下調(diào)表達(dá)T細(xì)胞激活分子，如MHCⅠ、Ⅱ類分子、CD40、CD80、CD86，導(dǎo)致無(wú)法啟動(dòng)和激活T細(xì)胞［18］；免疫檢查點(diǎn)分子，如程序性死亡配體（programmed death-ligands，PD-Ls）、B和T淋巴細(xì)胞衰減劑（B and T lymphocyte attenuator，BTLA）和 誘 導(dǎo) 性T細(xì) 胞 共 刺 激 配 體（inducible T-cell co-stimulator ligand，ICOSL）在tolDC上的豐富表達(dá)使這些細(xì)胞能夠抑制效應(yīng)T細(xì)胞并誘導(dǎo)Treg細(xì)胞［17-19］。此外，tolDCs高表達(dá)抑制性受體Ig樣 轉(zhuǎn) 錄 本（inhibitory receptors Ig-like transcripts，ILTs）如ILT2、ILT3和ILT4，影響細(xì)胞因子和趨化因子的分泌，并能抑制Fc受體信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)［20］。

2.2 tolDCs產(chǎn)生的細(xì)胞因子 與tolDCs相關(guān)的細(xì)胞因子包括IL-10、TGF-β等，這些細(xì)胞因子具有影響DCs成熟、抑制T細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)Treg細(xì)胞等多種免疫調(diào)節(jié)功能。IL-10可以體外誘導(dǎo)產(chǎn)生tolDCs，通 過(guò)誘導(dǎo)STAT3反應(yīng) 基因和/或 調(diào)節(jié)NF-κB和MAPK活性，直接和間接地抑制髓系細(xì)胞中的促炎細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄，以及MHCⅡ類分子和共刺激分子的表達(dá)［21］。TGF-β不僅影響CD4+和CD8+T細(xì)胞的分化、活化和增殖，還可促進(jìn)Treg細(xì)胞的擴(kuò)增［22］。此外，在tolDCs中促炎細(xì)胞因子IL-6、TNFα、IL-12、IL-23表達(dá)減少［23］。

2.3 tolDCs的代謝特點(diǎn) 細(xì)胞代謝是決定DCs免疫原性或耐受性細(xì)胞命運(yùn)的關(guān)鍵［24］，DCs的耐受性受糖酵解、脂肪酸氧化、氧化磷酸化、氨基酸分解代謝以及Vit A和Vit D代謝的控制。研究發(fā)現(xiàn)tolDCs的脂肪酸氧化、氧化磷酸化水平升高，血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）、吲哚胺2，3-雙加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO）、乙醛脫氫酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）等表達(dá)增加［16］。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶標(biāo)（mammalian target of rapamycin，mTOR）是免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵代謝調(diào)節(jié)因子，調(diào)節(jié)糖酵解和合成代謝，雷帕霉素可以誘導(dǎo)分解代謝和tolDCs的產(chǎn)生［24］。轉(zhuǎn)錄因子激活、基因和蛋白質(zhì)表達(dá)、細(xì)胞器穩(wěn)態(tài)、危險(xiǎn)感知和應(yīng)激反應(yīng)等基本細(xì)胞過(guò)程都受代謝途徑或其代謝產(chǎn)物的調(diào)節(jié)，因此研究tolDCs的代謝特點(diǎn)從而操控細(xì)胞的功能可改變炎癥和免疫反應(yīng)發(fā)揮治療作用［25］。

2.4 tolDCs與免疫耐受tolDCs的功能是誘導(dǎo)和維持免疫耐受，耐受是一個(gè)動(dòng)態(tài)的、主動(dòng)的過(guò)程，固有免疫細(xì)胞和適應(yīng)性免疫細(xì)胞通過(guò)這個(gè)過(guò)程限制免疫系統(tǒng)的激活和組織損傷，耐受性的打破可導(dǎo)致自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病和移植排斥反應(yīng)等。免疫耐受可以區(qū)分自身和非自身抗原、抑制過(guò)敏和炎癥反應(yīng)、防止母體免疫系統(tǒng)攻擊胎兒組織等，包括中樞免疫耐受和外周免疫耐受。中樞耐受發(fā)生在胸腺和骨髓，是抵御自身免疫的第一道防線，主要機(jī)制是胸腺中自身反應(yīng)性T細(xì)胞的缺失，DCs在中樞免疫耐受中的作用有限，僅限于促進(jìn)對(duì)一小部分自身抗原的耐受［26］；外周免疫耐受發(fā)生在淋巴細(xì)胞成熟后的組織和淋巴結(jié)中［15］，tolDCs、自身反應(yīng)性T細(xì)胞和Treg細(xì)胞之間相互作用，延長(zhǎng)免疫穩(wěn)態(tài)的維持并阻斷自身免疫反應(yīng)［27］。

tolDCs維持免疫耐受包括接觸依賴機(jī)制和非接觸機(jī)制，接觸依賴機(jī)制包括PD-L1、Fas配體（Fas ligand，F(xiàn)asL）、ICOSL、ILT2、ILT3、ILT4等分子；非接觸機(jī)制與免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-10、TGF-β和營(yíng)養(yǎng)剝奪有關(guān)的酶如IDO、HO-1、iNOS和精氨酸酶1（arginase 1，Arg1）有關(guān)［22］。

3 銀屑病與tolDCs

鑒于tolDCs誘導(dǎo)和維持免疫耐受的功能，在銀屑病中，通過(guò)誘導(dǎo)tolDCs的產(chǎn)生，從而避免自身抗原引起的免疫反應(yīng)、恢復(fù)免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)、抑制慢性炎癥反應(yīng)是銀屑病治療的新思路。大量動(dòng)物模型和臨床前數(shù)據(jù)表明，tolDCs通過(guò)改變免疫反應(yīng)和恢復(fù)免疫耐受發(fā)揮治療銀屑病的作用。局部應(yīng)用Vit D類似物鈣泊三醇是治療銀屑病皮損有效的標(biāo)準(zhǔn)療法，Vit D抑制人moDCs的分化和成熟，誘導(dǎo)產(chǎn)生tolDCs，從而誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的生成［28］，而且KARTHAUS等［29］發(fā)現(xiàn)Vit D能有效抑制小鼠和人pDCs誘導(dǎo)T細(xì)胞活化的能力，發(fā)揮治療銀屑病的作用；α-黑素細(xì)胞刺激素（α-melanocyte-stimulating hormone，α-MSH）在體內(nèi)外可以誘導(dǎo)tolDCs產(chǎn)生，表現(xiàn)為CD80、CD86表達(dá)減少，CD205、IL-10表達(dá)增加，擴(kuò)增CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞，將α-MSH誘導(dǎo)產(chǎn)生的tolDCs皮下注射可以改善銀屑病樣小鼠皮損，并可顯著抑制銀屑病患者Th17細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌，被認(rèn)為是一種銀屑病的潛在治療選擇［30］；KdPT是一種結(jié)構(gòu)上與α-MSH的C端氨基酸結(jié)構(gòu)相關(guān)的抗炎三肽，研究發(fā)現(xiàn)KdPT直接誘導(dǎo)生成了tolDCs繼而產(chǎn)生大量Treg細(xì)胞，能夠改善咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型和異種移植銀屑病小鼠模型的皮損［31］；IL-37是一種有效的天然免疫抑制劑，可以降低DCs MCHⅡ分子和CD40、CD86，誘導(dǎo)產(chǎn)生tolDCs，從而調(diào)節(jié)T細(xì)胞應(yīng)答，在體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)性銀屑病模型的發(fā)病機(jī)制中都起到了很強(qiáng)的免疫抑制作用［32-33］；此外銀屑病患者體內(nèi)存在Th17/Treg細(xì)胞的失衡，而BAFF沉默可產(chǎn)生tolDCs，誘導(dǎo)Foxp3+Treg細(xì)胞從而抑制Th17細(xì)胞，可以調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞平衡［34-35］；芳烴受體（aryl hydrocarbon receptor，AHR）調(diào)節(jié)Th17/22細(xì)胞平衡和Treg細(xì)胞，在銀屑病中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)AHR可以誘導(dǎo)IDO1同時(shí)AHR的內(nèi)源性配體ITE可以抑制IL-6和IL-12的分泌，增加IL-10和TGF-β的表達(dá)，誘導(dǎo)tolDCs的產(chǎn)生，這可能是AHR激動(dòng)劑治療銀屑病的機(jī)制［36-37］。

盡管上述報(bào)道多為實(shí)驗(yàn)研究，但大量臨床試驗(yàn)證實(shí)了tolDCs治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、Ⅰ型糖尿病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩病等自身免疫性疾病的安全有效性。而且靜脈注射、腹腔注射以及皮內(nèi)注射已被證實(shí)在臨床試驗(yàn)中是安全的且耐受性良好［38-40］。2020年發(fā)表在《Lancet Diabetes & Endocrinology》的文章報(bào)道將負(fù)載胰島素原肽的tolDCs皮下注射給9位平均病史長(zhǎng)達(dá)12年的Ⅰ型糖尿病患者，在為期6個(gè)月的觀察中，胰島素β-細(xì)胞持續(xù)保持穩(wěn)定功能且未出現(xiàn)免疫抑制現(xiàn)象［41］，這進(jìn)一步表明了基于tolDCs治療自身免疫性疾病的廣泛前景。

已有研究發(fā)現(xiàn)Vit D及其類似物、地塞米松、NFκB抑制劑、免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子（IL-10、TGF-β）、生長(zhǎng)因子（GM-CSF、M-CSF）、組蛋白脫乙酰化酶（histone deacetylase，HDAC）、白藜蘆醇（resveratrol，Res）、丙酮酸乙酯（ethyl pyruvate，EP）等可通過(guò)不同方式誘導(dǎo)產(chǎn)生tolDCs［42］，這些都是治療銀屑病的可能方法。

4 展望

DCs表型和功能的異質(zhì)性表明其具有極大的可塑性和功能的多樣性，且很容易受到組織定位和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。銀屑病等自身免疫性疾病治療的理想標(biāo)準(zhǔn)是免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)的再平衡，而不只是應(yīng)用免疫抑制劑，通過(guò)體外誘導(dǎo)產(chǎn)生具有穩(wěn)定表型的tolDCs，然后過(guò)繼轉(zhuǎn)移是治療銀屑病等自身免疫性疾病的新免疫療法。然而tolDCs誘導(dǎo)免疫耐受的具體機(jī)制、如何誘導(dǎo)產(chǎn)生具有穩(wěn)定表型和免疫調(diào)節(jié)功能的tolDCs、tolDCs治療的最佳劑量和給藥頻率以及是否需要負(fù)載疾病特定抗原等問(wèn)題仍需要深入地探究。在銀屑病的研究中，如何將tolDCs在動(dòng)物模型上的治療結(jié)果轉(zhuǎn)化為人體的治療效果，可能需要我們將免疫學(xué)參數(shù)與臨床療效充分結(jié)合以更好地評(píng)估tolDCs治療銀屑病的有效性和可行性。