甲殼質(zhì)酶蛋白-40 在腎結(jié)核和腎腫瘤患者中的表達(dá)差異及臨床意義

李秀君 安海霞 楊家鑫 陳懷安

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院泌尿外科，河北張家口 075000

腎結(jié)核在泌尿系統(tǒng)疾病中較為常見，男性發(fā)病率略高于女性。據(jù)一項(xiàng)統(tǒng)計(jì)學(xué)研究顯示[1]，我國(guó)75%的腎結(jié)核患者疾病高發(fā)年齡為20～40 歲。腎結(jié)核患者發(fā)病后可出現(xiàn)膀胱刺激征、血尿、膿尿以及腰痛等臨床表現(xiàn)，其中膀胱刺激征最早出現(xiàn)[2]。由于其臨床表現(xiàn)會(huì)因病變范圍、損傷程度而有所不同，在疾病早期由于病變局限在腎臟某一部位，因此臨床表現(xiàn)不典型；隨著病變程度不斷加重，當(dāng)出現(xiàn)血尿時(shí)，才會(huì)引起患者重視，因此一定程度上增加臨床治療難度[3]。腎臟腫瘤在男性生殖系統(tǒng)腫瘤中較為常見，并且腎腫瘤大多為惡性腫瘤，其中包含腎癌、腎盂癌、腎母細(xì)胞瘤等[4]。腎臟惡性腫瘤中腎癌占85.00%[5]。腎腫瘤患者疾病早期臨床癥狀大多不明顯，僅有乏力、體重下降、貧血等臨床表現(xiàn)，因此患者極易忽視，當(dāng)其出現(xiàn)顯著臨床表現(xiàn)時(shí)疾病通常已經(jīng)發(fā)展至中晚期，錯(cuò)失疾病治療最佳時(shí)期。因此，探尋早期診斷腎結(jié)核以及腎腫瘤的指標(biāo)已成為臨床研究重點(diǎn)。甲殼質(zhì)酶蛋白-40（YKL-40）可存在于多種組織和肝臟組織內(nèi)，屬于組織纖維化標(biāo)志物[6]。目前，在慢性肝炎、腫瘤疾病研究中通常進(jìn)行YKL-40水平檢測(cè)，但是在腎臟疾病中研究較少。為了解其在腎結(jié)核以及腎腫瘤中的表達(dá)情況，本研究對(duì)100 例腎結(jié)核患者、50 例腎腫瘤患者以及100 名健康體檢者分別進(jìn)行尿液、血清YKL-40 水平檢查，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016 年5 月—2019 年5 月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）接收的100 例腎結(jié)核以及50 例腎腫瘤患者為研究樣本，將腎結(jié)核患者作為腎結(jié)核組，將腎腫瘤患者作為腎腫瘤組，另選擇同期在我院實(shí)施健康體檢的100 名體檢者為參照組。回顧性分析全部樣本臨床資料，腎結(jié)核組中，男70 例，女30 例；年齡20～68 歲，平均（42.38±3.57）歲；雙側(cè)腎結(jié)核者25 例，單側(cè)腎結(jié)核者75 例。腎腫瘤組中，男38 例，女12 例；年齡22～65 歲，平均（41.57±3.36）歲；雙側(cè)腎腫瘤者7 例，單側(cè)腎腫瘤者43 例。參照組中，男66 名，女34 名；年齡25～70 歲，平均（42.26±3.40）歲。三組在性別、年齡方面資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），腎結(jié)核組與腎腫瘤組在性別、年齡以及病變部位方面資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）腎結(jié)核組全部患者經(jīng)臨床診斷均符合腎結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)：①患者出現(xiàn)無誘因膀胱刺激征，同時(shí)伴有納差、乏力以及低熱等臨床表現(xiàn)；②尿液檢查提示存在結(jié)核分枝桿菌；③尿路平片檢查提示腎體積增大或出現(xiàn)分葉狀改變；④腎盂造影檢查提示腎乳頭以及腎小盞邊緣粗糙，呈不規(guī)則改變，當(dāng)病變較嚴(yán)重時(shí)可觀察到腎臟空洞，并形成膿腫，當(dāng)腎功能喪失時(shí)，患側(cè)腎臟無法顯影；⑤膀胱鏡檢查可存在結(jié)核性膀胱炎癥狀，同時(shí)還可鉗取部分組織進(jìn)行病理檢查[7]；（2）腎腫瘤組患者經(jīng)術(shù)后病理檢查均診斷為腎癌[8]：①胸部X 線、腹部CT 以及腹部核磁共振檢查提示腎臟內(nèi)存在腫瘤細(xì)胞；②腎穿刺活檢病理檢查提示存在腫瘤細(xì)胞。排除標(biāo)準(zhǔn)[9]：①哺乳期或妊娠期女性；②肝功能有明顯異常；③伴有心腦血管疾?。虎軝C(jī)體存在嚴(yán)重的感染性疾?。虎萁? 個(gè)月內(nèi)服用過損害腎功能藥物；⑥患者存在嚴(yán)重的精神障礙，無法正常進(jìn)行言語(yǔ)交流；⑦不配合研究。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并同意。

1.2 方法及觀察指標(biāo)

1.2.1 血清以及尿液樣本中YKL-40 水平檢測(cè) 采集患者空腹上臂靜脈血3 mL，3000 r/min 離心15 min，離心機(jī)半徑15 cm，收集上層血清，將血清樣本放置在-80℃的冰箱中保存。采集晨起首次中段尿液10 mL，離心方法與血標(biāo)本相同，收集上清液5 mL，置入無菌試管中，儲(chǔ)存條件與血清標(biāo)本相同。檢測(cè)前需從冰箱中取出待測(cè)樣本，放置在室溫下48 h，待其復(fù)溶后，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)每組患者血清標(biāo)本、尿液標(biāo)本中YKL-40 水平，YKL-40 試劑盒采購(gòu)至上海廣銳生物科技有限公司，全部操作均嚴(yán)格依據(jù)試劑盒使用說明進(jìn)行。參照組體檢者標(biāo)本采集方法和處理方法與腎結(jié)核組和腎腫瘤組患者相同。

1.2.2 腎結(jié)核以及腎癌病理組織、病變部位周圍正常組織檢測(cè) 分別采集腎結(jié)核、腎癌手術(shù)后病理組織和病變部位周圍正常組織標(biāo)本，病變組織采集時(shí)需避開壞死、脂肪成分多的部位，盡可能選擇質(zhì)地較韌組織；周圍正常組織標(biāo)本采集時(shí)需有一定深度，大小以1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm 為宜，鉗取組織時(shí)需避免擠壓，以防組織變形而影響診斷效果，將其制成石蠟標(biāo)本，并切成5 μm 切片，利用免疫組化SP 法分別檢測(cè)每組患者標(biāo)本組織中YKL-40 水平，YKL-40 多克隆抗體采購(gòu)至上海斯信生物科技有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：3010173），SP檢測(cè)試劑盒采購(gòu)至上海瑞番生物科技有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：SP0011）。選擇我院兩名臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行閱片。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，符合正態(tài)分布的，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，多組間進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清以及尿液標(biāo)本中YKL-40 水平比較

腎結(jié)核組、腎腫瘤組血清以及尿液標(biāo)本中YKL-40 水平均高于參照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腎結(jié)核組與腎腫瘤組血清、尿液中YKL-40 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 三組血清以及尿液標(biāo)本中YKL-40 水平比較（）

表1 三組血清以及尿液標(biāo)本中YKL-40 水平比較（）

注：與參照組比較，*P ＜0.05。YKL-40：甲殼質(zhì)酶蛋白-40

2.2 腎結(jié)核組以及腎腫瘤組病變組織、周圍正常組織中YKL-40 水平比較

腎結(jié)核組、腎腫瘤組中病變組織的YKL-40 水平均高于周圍正常組織（P＜0.05）。腎結(jié)核組與腎腫瘤組病變組織及周圍正常組織中YKL-40 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 腎結(jié)核患者以及腎腫瘤患者病變組織、周圍正常組織中YKL-40 水平（ng/mL，）

表2 腎結(jié)核患者以及腎腫瘤患者病變組織、周圍正常組織中YKL-40 水平（ng/mL，）

注：YKL-40：甲殼質(zhì)酶蛋白-40

3 討論

結(jié)核病主要是因結(jié)核分枝桿菌感染而引起的一種慢性傳染性疾病，結(jié)核分枝桿菌可侵入患者機(jī)體各器官，在泌尿系統(tǒng)中，腎結(jié)核發(fā)病率最高[13]。腎腫瘤主要包含原發(fā)性腫瘤以及繼發(fā)性腫瘤，臨床常見肺癌腎轉(zhuǎn)移。若在疾病早期未實(shí)施相應(yīng)治療，伴隨結(jié)核分枝桿菌以及腫瘤細(xì)胞的不斷發(fā)展，會(huì)影響患者泌尿系統(tǒng)功能，最終導(dǎo)致腎臟功能完全喪失，部分疾病嚴(yán)重者甚至需實(shí)施手術(shù)治療，切除病變腎臟組織，對(duì)患者機(jī)體以及心理均造成不利影響[14-15]。因此，在疾病早期采取有效方式進(jìn)行診斷，同時(shí)實(shí)施相應(yīng)措施改善患者腎臟功能，對(duì)提升疾病預(yù)后具有積極意義。

YKL-40 包含383 個(gè)氨基酸，其N 末端主要是由亮氨酸、賴氨酸以及酪氨酸組成，由于其分子量是40 kD，因此臨床將其稱為YKL-40[16-17]。在候永強(qiáng)等[18]的研究中，其分別對(duì)62 名肝硬化患者以及62 例健康人進(jìn)行血清YKL-40 水平、肝纖維化以及肝功能檢查。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者血清YKL-40 水平明顯高于健康人群，并且肝硬化患者機(jī)體白蛋白、血清膽固醇以及膽堿酯酶水平均低于健康人。并且其還分析肝纖維化程度與患者機(jī)體YKL-40 水平之間關(guān)系，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化程度越嚴(yán)重，患者機(jī)體YKL-40 水平越高。因此患者認(rèn)為通過了解機(jī)體YKL-40 水平可對(duì)肝硬化程度進(jìn)行判斷。而本研究中參照組體檢者尿液YKL-40 水平以及血清YKL-40 水平腎結(jié)核組、腎腫瘤組血清以及尿液標(biāo)本中YKL-40 水平均高于參照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腎結(jié)核組與腎腫瘤組血清以及尿液中YKL-40 水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。分析原因可知，YKL-40 水平會(huì)隨炎癥發(fā)展而逐漸升高，由于其對(duì)巨噬細(xì)胞具有趨化作用，同時(shí)激活機(jī)體抗炎反應(yīng)，進(jìn)而促進(jìn)炎癥細(xì)胞聚集以及激活，從而提升其水平。YKL-40 屬于軟骨自分泌細(xì)胞因子，當(dāng)機(jī)體受到腫瘤細(xì)胞刺激時(shí)，會(huì)導(dǎo)致YKL-40 大量形成，并且其還可刺激免疫細(xì)胞大量分泌白細(xì)胞介素-6，從而增強(qiáng)腎臟腫瘤部位炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)展[19-21]。因此，在腎結(jié)核以及腎腫瘤患者尿液和血清中YKL-40 水平顯著高于普通人群。在陳懷安等[22]的研究中，其分別對(duì)46 例腎結(jié)核患者以及46 名健康體檢者進(jìn)行YKL-40 水平檢測(cè)，在其研究中，病變組織中YKL-40 水平是（31.52±6.87）ng/mL，正常組織中YKL-40 水平是（26.15±5.59）ng/mL，從結(jié)果可以看出正常組織中YKL-40 水平低于病變組織。本研究中，腎結(jié)核患者以及腎腫瘤患者病變組織中YKL-40 水平明顯高于周圍正常組織（P＜0.05）。分析原因可能與YKL-40 參與腎結(jié)核以及腎腫瘤發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。臨床有研究顯示[23-25]，炎癥細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及炎癥因子等均參與上皮源腫瘤的形成以及轉(zhuǎn)移，而YKL-40 蛋白可作為血管生成因子、細(xì)胞增殖因子、炎癥因子等，在組織重建中發(fā)揮一定作用，因此其在惡性腫瘤中水平較高。

綜上，腎結(jié)核患者以及腎腫瘤患者尿液和血清中YKL-40 水平相較于正常人而言有顯著升高，通過了解患者機(jī)體內(nèi)YKL-40 水平可對(duì)腎結(jié)核以及腎腫瘤進(jìn)行初步診斷。但本研究同樣存在一些不足，未對(duì)疾病治療前后YKL-40 水平進(jìn)行研究，加之樣本量較小，研究時(shí)間較短，因此還需增加樣本人數(shù)、延長(zhǎng)研究時(shí)間來進(jìn)一步研究。