血清DCP、CHI3L1聯(lián)合AFP檢測在肝細(xì)胞癌早期診斷中的意義研究

呂桂芳 張春 林建源 林楓 張代場

【關(guān)鍵詞】 脫-γ-羧基凝血酶原 殼多糖酶3樣蛋白1 甲胎蛋白 肝細(xì)胞癌

[Abstract] Objective： To investigate the significance of the combined detection of serum dec-γ-carboxylic prothrombin （DCP）， chitosan enzyme 3-like protein 1 （CHI3L1） and alpha-fetoprotein （AFP） on improving the early diagnosis of hepatocellular carcinoma. Method： A total of 30 patients with early hepatocellular carcinoma admitted to our hospital from June 2014 to May 2016 were selected as hepatocellular carcinoma group， and 30 patients with hepatitis B cirrhosis were selected as cirrhosis group. During the same period， 30 healthy subjects who came to our hospital for physical examination were selected as healthy control group. AFP content was detected by electrochemiluminescence assay， DCP and CHI3L1 content were detected by enzyme linked immunosorbent assay， the above indicators among three groups were compared. Result： Serum DCP， CHI3L1 and AFP levels in hepatocellular carcinoma group were significantly higher than those in cirrhosis group and healthy control group， the differences were statistically significant （P<0.01）. The positive rates of along and three combined tests of serum DCP， CHI3L1 and AFP in hepatocellular carcinoma group were higher than those in cirrhosis group and healthy control group （P<0.01）. The positive rate of the three combined tests was the highest in hepatocellular carcinoma group. Conclusion： Combined detection of DCP， CHI3L1 and AFP can be used as an important indicator for the diagnosis of early hepatocellular carcinoma， and provide a basis for the discovery and treatment of early hepatocellular carcinoma.

[Key words] Dec-γ-carboxylic prothrombin Chitosan enzyme 3-like protein 1 Alpha-fetoprotein Hepatocellular carcinoma

First-author’s address： Mindong Hospital Affiliated to Fujian Medical University， Fu’an 350000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.18.038

肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma， HCC）是全世界第六位常見的癌癥，同時也是癌癥死亡的第二大常見原因[1]。大約每年有50萬新增診斷的肝細(xì)胞癌患者，其中超過50%在中國。大部分患者由于其早期無明顯癥狀，往往到醫(yī)院就診時已經(jīng)處于肝細(xì)胞癌中晚期，失去進(jìn)一步手術(shù)機(jī)會，其5年生存率不足5%。數(shù)據(jù)顯示，早期肝癌的病人在應(yīng)用外科手術(shù)、肝移植或射頻消融等綜合治療后，5年生存率可達(dá)70%，而進(jìn)展的肝細(xì)胞癌患者，中位生存率少于1年[2]。如何早期發(fā)現(xiàn)和診斷肝細(xì)胞癌是提高患者療效和延長生存率的重要研究課題。血清生物標(biāo)志物由于其采樣及檢查簡便，被認(rèn)為是理想的早期診斷指標(biāo)[3]。迄今為止，AFP仍然是診斷HCC最主要的標(biāo)志物，其在診斷、判斷療效、估計預(yù)后、預(yù)防復(fù)發(fā)中有一定的作用。但是單靠AFP不能診斷所有的HCC，易造成假陰性和假陽性。這就給醫(yī)務(wù)工作者提出了更高的要求，需要將現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物更加合理地運(yùn)用于肝細(xì)胞癌的早期診斷，或是探究更高靈敏度、特異性、實用性的檢驗手段來提高HCC的早期診斷率，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年6月-2016年5月在本院住院的早期肝細(xì)胞癌患者30例為肝細(xì)胞癌組，納入標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg均為陽性，初次檢查發(fā)現(xiàn)肝腫瘤、腫瘤直徑<3 cm，入組前未進(jìn)行任何治療（包括外科手術(shù)、介入治療及其他綜合治療）;均符合2009年我國《原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治的專家共識》診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：基礎(chǔ)情況較差，合并心腦肺疾病，無法耐受手術(shù)治療。選取同期在本院治療的30例乙肝肝硬化患者為肝硬化組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：酒精性肝硬化或其他病因?qū)е碌母斡不Ｍ谶x擇來本院體檢的30名健康者為健康對照組。該項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，并取得患者及家屬知情同意。

1.2 方法 三組患者檢測均采集清晨空腹靜脈血5 mL，室溫放置1 h，3 500 r/min離心10 min，分離后的血清于-70 ℃冰箱保存待測，所有檢測標(biāo)本無溶血現(xiàn)象。AFP檢測采用貝克曼DXI800化學(xué)發(fā)光儀及配套試劑，記錄測定值，并與參考值比較;DCP、CHI3L1檢測均采用ELISA法，往預(yù)先包被人DCP、CHI3L1捕獲抗體的包被微孔中，一次加入標(biāo)本，標(biāo)準(zhǔn)品，HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫浴并徹底洗滌，用底物TMB顯示，TMB在過氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化為最終黃色，顏色深淺和樣品中的DCP、CHI3L1正相關(guān)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。對待檢測受試者血清進(jìn)行檢測，記錄測定值，并與參考值比較：分別以AFP>20 ng/mL、DCP>40 mAU/mL、CHI3L1>79 pg/mL為陽性結(jié)果;當(dāng)三者同時檢測，若其中出現(xiàn)一項陽性時就被認(rèn)為聯(lián)合檢測陽性。ELISA試劑盒均購買于上海生工生物工程有限公司，所有操作均按說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組血清DCP、CHI3L1、AFP含量;觀察單項標(biāo)志物檢測及三項聯(lián)合檢測在各組中的陽性檢出率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組的一般資料比較 肝細(xì)胞癌組男19例，女11例;年齡31～72歲，平均（53.4±6.2）歲。肝硬化組男20例，女10例;28～69歲，平均（52.6±5.8）歲。健康對照組男18名，女12名;年齡21～74歲，平均（51.5±6.1）歲。三組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血清中DCP、CHI3L1、AFP含量檢測結(jié)果比較 肝細(xì)胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP水平均明顯高于肝硬化組和對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表1。

2.3 單項標(biāo)志物檢測及三項聯(lián)合檢測在各組中的陽性檢出率比較 肝細(xì)胞癌組患者血清DCP、CHI3L1、AFP單項檢測陽性率及三項聯(lián)合檢測陽性率均高于肝硬化組和健康對照組（P<0.01）。肝細(xì)胞癌組中三項聯(lián)合檢測陽性檢出率最高。見表2。

3 討論

在肝硬化患者中肝細(xì)胞癌是其主要的死亡原因，肝細(xì)胞癌是我國常見腫瘤之一，也是世界上第三大主要和癌癥相關(guān)死亡原因[5-6]，其具有發(fā)病率高、腫瘤惡性程度高、侵襲力強(qiáng)、早期無明顯癥狀，發(fā)現(xiàn)困難等特點(diǎn)，多數(shù)患者被診斷出時已處于中晚期，預(yù)后不佳，嚴(yán)重影響我國人民健康和生命[7]。目前，臨床工作中以篩查HCC主要使用血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP），但發(fā)現(xiàn)AFP在診斷HCC時敏感性和特異性不足，郝銳等[8]報道顯示，AFP敏感度和特異度分別為56.9%和 83.3%;易造成假陰性和假陽性，需結(jié)合超聲、CT、MRI等影像技術(shù)才可以達(dá)到早期診斷。因此對HCC進(jìn)行準(zhǔn)確、靈敏的早期診斷是提高患者遠(yuǎn)期療效及存活率的關(guān)鍵。脫-γ-異常凝血酶原（Des-gamma-carboxyprothrombin，DCP），又稱為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導(dǎo)的蛋白（PIVKA Ⅱ），是一種異常的凝血酶原，多種腫瘤中，特別是在 HCC 的惡性增殖過程中起著重要作用[9]。它在肝細(xì)胞癌患者的血清中明顯升高，在早期肝癌中也有一定升高，而在健康受試者的血清中幾乎檢測不到[10]。一項Ⅱ期臨床研究顯示，在肝炎、肝硬化和HCC人群中，診斷HCC的敏感性和特異性分別為89%和95%，可作為AFP的診斷補(bǔ)充。在該項研究中發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌組患者血清中DCP的陽性率達(dá)86.7%，明顯高于肝硬化組26.7%及健康對照組0[11]。

殼多糖酶3樣蛋白1（chitinase 3-like 1，CHI3L1），又名幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1，編碼 CHI3L1的基因位于小鼠和人類的1號染色體上[12]。CHI3L1 是最近發(fā)現(xiàn)的一種由中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等分泌。既往研究表明，CHI3L1蛋白水平與肝癌、肺癌、胃癌和乳腺癌等多種腫瘤相關(guān)[13]。至今為止，CHI3L1參與HCC的腫瘤惡性生物學(xué)行為的詳細(xì)機(jī)制尚未完全闡明[14]。有研究報道CHI3L1在HCC患者腫瘤組織中異常增高[15]，并且與腫瘤組織中血管內(nèi)皮生成正相關(guān)[16]，并與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)，尤其同HCC預(yù)后評估有關(guān)。

目前對選擇兩種或兩種以上腫瘤標(biāo)志物同步進(jìn)行聯(lián)合檢測是提高相關(guān)腫瘤診斷的方法，特別是對于肝細(xì)胞癌診斷陽性率有著重要意義[17-18]。本研究選擇通過AFP聯(lián)合DCP、CHI3L1三個標(biāo)志物進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，肝細(xì)胞癌組各項檢測指標(biāo)均高于肝硬化組及健康對照組，與各標(biāo)記物單獨(dú)檢測比較，AFP聯(lián)合CHI3L1及DCP三項標(biāo)志物進(jìn)行檢測可以明顯提高肝細(xì)胞癌的診斷陽性率，有效降低了早期肝細(xì)胞癌漏診的可能。

綜上所述，DCP、CHI3L1及AFP三項聯(lián)合檢測，具有靈敏度高、特異性好，同時由于它采血量少，操作簡便，便于廣大基層醫(yī)院展開檢測，有利于肝細(xì)胞癌的早期篩查。因此，DCP、CHI3L1及AFP三項聯(lián)合檢測，對提高肝細(xì)胞癌早期診斷率具有重要意義，但要最終確診肝癌，仍需要結(jié)合影像學(xué)及病理學(xué)檢查等相關(guān)資料，避免誤診。

參考文獻(xiàn)

[1] Chow P，Pin C S，Ng D，et al.National Cancer Centre Singapore Consensus Guidelines for Hepatocellular Carcinoma[J].Liver Cancer，2016，5（2）：97-106.

[2] Rich N，Singal A G.Hepatocellular carcinoma tumour markers： Current role and expectations[J].Best Pract Res Clin Gastroenterol，2014，28（5）：843-853.

[3] European Association for the Study of the Liver，European Organisation for Research and Treatment of Cancer.Erratum to： “EASL–EORTC Clinical Practice Guidelines： Management of hepatocellular carcinoma”[J].Journal of Hepatology，2012，56：1430.

[4]葉勝龍，秦叔逵，吳孟超，等.原發(fā)性肝癌規(guī)范化診治的專家共識[J].腫瘤，2009，25（4）：295-304.

[5] Rich N，Singal A G.Hepatocellular carcinoma tumour markers： Current role and expectations[J].Best Pract Res Clin Gastroenterol，2014，28（5）：843-853.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生和計劃生育委員會醫(yī)政醫(yī)管局.原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2017年版）[J].中華肝臟病雜志，2017，25（12）：886-895.

[7] Bray F，F(xiàn)erlay J，Soerjomataram I，et al.Global cancer statistics 2018： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries[J].CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.

[8]郝銳，鄭雪松，張蓮蓮，等.5種血清標(biāo)志物在肝癌診斷中的應(yīng)用價值[J].中國地方病防治雜志，2018，33（2）：125-127.

[9]沈建宇，甘紹舉，胡黎黎，等.生物標(biāo)志物在肝細(xì)胞肝癌診斷中的應(yīng)用[J].醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，2015，12（1）：50-53.

[10]濮玨彪，王學(xué)鋒，彭奕冰，等.血清異常凝血酶原檢測在原發(fā)性肝癌臨床診斷中的應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2014，29（3）：270-273.

[11]胡仁智，趙世巧，申波，等.血清甲胎蛋白及其異質(zhì)體和異常凝血酶原對原發(fā)性肝癌的診斷價值[J].中華肝臟病雜志，2019，27（8）：634-637.

[12] Hakala B E，White C，Recklies A D.Human cartilage gp-39， a major secretory product of articular chondrocytes and synovial cells， is a mammalian member of a chitinase protein family[J].J Biol Chem，1993，268（34）：25803-25810.

[13] Schleiss M R.Congenital cytomegalovirus infection： Update on management strategies[J].Curr Treat Options Neurol，2008，10（3）：186-192.

[14]李洪，嚴(yán)桐，朱珍，等.血清殼多糖酶3樣蛋白1在慢性肝病顯著纖維化和肝硬化中的診斷價值[J].中華肝臟病雜志，2018，26（5）：337-341.

[15] Xiao X Q，Hassanein T，Li Q F，et al.YKL-40 expression in human hepatocellular carcinoma： a potential biomarker？[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2011，10（6）：605-610.

[16] Rusak A，Jablonska K，Piotrowska A，et al.Correlation of expression of CHI3L1 and Nogo-A and their role in angiogenesis in invasive ductal breast carcinoma[J].Anticancer Res，2019，39（5）：2341-2350.

[17]黃述婧，姜菲菲，王穎，等.AFP與PIVKA-Ⅱ聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（10）：1134-1138.

[18]盧凌鵬，黃艷芳.血清中AFP，GPC3，DCP和VEGF4種腫瘤標(biāo)志物對原發(fā)性肝癌的早期診斷價值[J].實用癌癥雜志，2016，31（9）：1399-1401.

（收稿日期：2020-09-03） （本文編輯：姬思雨）