酒精性肝病患者腸道菌群變化與T淋巴細胞的相關(guān)性研究

溫建軍

【摘要】 目的：研究酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）患者腸道菌群變化與T淋巴細胞的相關(guān)性。方法：將2018年10月-2020年10月本院收治的ALD患者105例作為觀察組，另選取同期到本院體格檢查的健康者100例作為對照組。入選者均接受腸道菌群、淋巴細胞亞群檢測。觀察兩組腸道菌群、淋巴細胞亞群水平，并分析腸道菌群變化與淋巴細胞亞群的相關(guān)性。結(jié)果：觀察組大腸埃希桿菌（7.48±1.20）lgCFU/g、糞腸球菌（8.81±1.49）lgCFU/g、乳酸桿菌（7.08±1.26）lgCFU/g，均高于對照組（6.91±1.65）、（7.38±1.43）、（6.12±1.08）lgCFU/g，雙歧桿菌水平（7.06±1.25）lgCFU/g低于對照組（8.92±1.14）lgCFU/g，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。觀察組CD3+（69.85±12.95）%、CD4+（38.61±10.27）%、CD8+（23.87±9.34）%、NK細胞水平（11.73±5.29）%，均低于對照組（75.74±8.53）%、（47.24±7.92）%、（26.65±8.45）%、（20.87±6.34）%，B細胞水平（15.93±10.14）%高于對照組（11.15±3.76）%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌與B細胞均呈正相關(guān)（P<0.05），大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈負相關(guān)（P<0.05），雙歧桿菌與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈正相關(guān)（P<0.05），雙歧桿菌與B細胞呈負相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：ALD患者存在腸道菌群失調(diào)、免疫功能紊亂現(xiàn)象，且兩者具有一定的相關(guān)性，可為ALD診治、預(yù)后評估提供參考。

【關(guān)鍵詞】 酒精性肝病 腸道菌群變化 T淋巴細胞 相關(guān)性

[Abstract] Objective： To study the relationship between changes in intestinal flora and T lymphocytes in patients with alcoholic liver disease. Method： A total of 105 patients with ALD who were treated in the hospital from October 2018 to October 2020 were enrolled in the observation group， another 100 healthy subjects who had taken physical examinations in the hospital for the same period were selected as the control group. All selected subjects were tested for intestinal flora and lymphocyte subsets. The levels of intestinal flora and lymphocyte subsets in the two groups were observed， the correlation between changes in intestinal flora and lymphocyte subsets was analyzed. Result： The levels of Escherichia coli， Enterococcus faecalis， and Lactobacillus in the observation group were respectively （7.48±1.20）， （8.81±1.49）， （7.08±1.26） lgCFU/g， higher than （6.91±1.65）， （7.38±1.43）， （6.12±1.08） lgCFU/g in the control group， the Bifidobacteria level was （7.06±1.25） lgCFU/g in the observation group， lower than （8.92±1.14） lgCFU/g in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of CD3+， CD4+， CD8+ and NK cells in the observation group were （69.85±12.95）%， （38.61±10.27）%， （23.87±9.34）% and （11.73±5.29）% respectively， lower than （75.74±8.53）% （47.24±7.92）%， （26.65±8.45）% and （20.87±6.34）% in the control group， the B cells level was （15.93±10.14）% in the observation group， higher than （11.15±3.76）% in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Pearson correlation test showed that， Escherichia coli， Enterococcus faecalis and Lactobacillus were positively correlated with the level of B cells （P<0.05）， and Escherichia coli， Enterococcus faecalis， Lactobacillus were negatively correlated with CD3+ CD4+， CD8+ and NK cells （P<0.05）， and Bifidobacteria was positively correlated with CD3+， CD4+， CD8+ and NK cells （P<0.05）， Bifidobacteria was negatively correlated with B cells （P<0.05）. Conclusion： ALD patients are with imbalanced intestinal flora and immune dysfunction， and there is certain correlation between them， which can provide reference for ALD diagnosis， treatment and prognosis evaluation.

[Key words] Alcoholic liver disease Intestinal flora changes T lymphocytes Correlation

First-authors address： Ganzhou Peoples Hospital， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.002

酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）是指長期大量飲酒所致的肝臟疾病，多數(shù)患者患病早期無典型癥狀，隨著病情的進展，將逐漸發(fā)展為肝硬化、酒精性肝炎，更為嚴重將出現(xiàn)廣泛肝細胞壞死、肝功能衰竭，危及患者生命安全[1-2]。目前乙醇已成為導(dǎo)致肝損傷的重要原因，乙醇在直接損害肝臟外，還可導(dǎo)致腸道菌群紊亂，而經(jīng)諸多研究證實，腸道菌群失調(diào)參與ALD發(fā)生、發(fā)展，若患者腸道菌群紊亂、免疫功能低下可促使腸道細菌移位，誘發(fā)嚴重并發(fā)癥[3-5]。鑒于此，本研究將觀察腸道菌群變化與ALD患者T淋巴細胞的相關(guān)性。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2018年10月-2020年10月本院收治的ALD患者105例作為觀察組，另選取同期到本院體檢中心進行體格檢查的健康人群100例作為對照組。觀察組納入標準：（1）ALD診斷符合文獻[6]中相關(guān)標準，經(jīng)肝臟B超、CT、臨床癥狀表現(xiàn)檢查確診;（2）入選者近期內(nèi)未接受抗生素、益生菌制劑治療;（3）均無嗜肝病毒感染者。排除標準：（1）合并肝細胞癌者;（2）伴有中毒、藥物性肝損傷者;（3）自身免疫性肝病者;（4）無法積極參與本次研究相關(guān)檢查者。對照組納入標準：經(jīng)相關(guān)體檢健康人。排除標準：依從性差。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會批準，研究對象均知情同意。

1.2 方法 （1）入選者腸道菌群培養(yǎng)、檢測具體方法如下：通過無菌便盒收集大便，并采取系列稀釋法稀釋糞便標本，其中乳酸桿菌培養(yǎng)利用MRS瓊脂培養(yǎng)基（由上海廣銳生物科技有限公司提供），雙歧桿菌培養(yǎng)利用BS培養(yǎng)基250（由青島高科園海博生物技術(shù)有限公司提供），糞腸球菌培養(yǎng)利用MERCK腸球菌培養(yǎng)基（由上海市默克微生物培養(yǎng)基廠家提供），大腸埃希桿菌培養(yǎng)利用麥康凱瓊脂板（由鄭州安圖綠科生物工程有限公司提供），針對乳酸桿菌、雙歧桿菌的培養(yǎng)需置于37 ℃環(huán)境中孵箱，并于厭氧環(huán)境中培養(yǎng)3 d，大腸埃希桿菌、糞腸球菌則于37 ℃環(huán)境中孵箱，于需氧條件下培養(yǎng)，并采用梅里埃ATB半自動微生物鑒定系統(tǒng)完成細菌鑒定。（2）淋巴細胞亞群檢測具體方法如下：采集入選者空腹靜脈血5 mL，采用美國FACS Calibur流式細胞儀（由BD公司提供）對淋巴細胞亞群（CD3+、CD4+、CD8+、B細胞、NK細胞）進行測定。

1.3 觀察指標 觀察兩組腸道菌群、淋巴細胞亞群水平，并分析腸道菌群變化與淋巴細胞亞群的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料以百分數(shù)和例數(shù)表示，比較采用字2檢驗;計量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗;計量資料間雙變量相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料對比 觀察組：女36例，男69例;年齡29～76歲，平均（52.64±3.74）歲;體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）16～26 kg/m2，平均（22.59±1.10）kg/m2;血糖4.02～6.85 mmol/L，平均（5.26±1.01）mmol/L。對照組：女33例，男67例;年齡26～78歲，平均（52.59±3.76）歲;BMI 16～27 kg/m2，平均（22.62±1.07）kg/m2;血糖3.86～6.79 mmol/L，平均（5.23±0.97）mmol/L。兩組基本資料相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組腸道菌群指標對比 與對照組相比，觀察組大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌水平均較高，雙歧桿菌水平較低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 兩組T淋巴細胞水平對比 與對照組相比，觀察組CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞水平均較低，B細胞水平較高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 腸道菌群指標與T淋巴細胞相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌與B細胞均呈正相關(guān)（P<0.05），大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈負相關(guān)（P<0.05），雙歧桿菌與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈正相關(guān)（P<0.05），雙歧桿菌與B細胞呈負相關(guān)（P<0.05）。見表3。

3 討論

近年來由于我國飲酒人數(shù)、飲酒量的不斷上升，促使臨床上ALD患者占比逐漸增大[7-9]。目前ALD的發(fā)病機制仍未完全明晰，但長期大量攝入乙醇已成為誘發(fā)ALD的重要因素。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，酒精可導(dǎo)致腸道菌群紊亂，而腸道菌群比例失調(diào)將增加ALD發(fā)生風(fēng)險，在正常情況下，人體每克糞便微生物約有1011個，而所有菌譜中常駐菌占了90%左右，各菌群間將依據(jù)特定比例組合，利于達到相互制約與生存的作用，進而從質(zhì)與量上達到生態(tài)平衡，在機體吸收、消化中發(fā)揮了重要作用[10-12]。

酒精將損傷人體腸道屏障功能，進而破壞腸道黏膜屏障，提高腸道通透性，促使腸道菌群移位[13-15]。大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌作為常見的腸道菌群，本研究中針對健康者、ALD患者腸道菌群進行了分析，結(jié)果得出，與對照組相比，觀察組大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌水平均較高，雙歧桿菌水平較低（P<0.05），由此可見，酒精可促使腸道菌群失調(diào)，并以有害菌增加、益生菌減少為主要表現(xiàn)。高祀龍等[16]研究實證，較健康者相比，ALD患者機體內(nèi)雙歧桿菌水平將顯著下降，與本研究結(jié)果較為相似，同時也進一步證實ALD患者伴有腸道菌群紊亂現(xiàn)象。近年來有研究指出，免疫介導(dǎo)的機制在ALD發(fā)生、轉(zhuǎn)歸間起到了一定的作用[17]。ALD患者長期飲酒，而酒精與其代謝產(chǎn)物乙醛加合物具有免疫原性，可啟動免疫反應(yīng)，進而打破機體免疫平衡，同時酒精與其代謝產(chǎn)物將誘導(dǎo)形成新抗原，而這將進一步激發(fā)免疫反應(yīng)，造成肝臟損傷[18]。經(jīng)諸多研究發(fā)現(xiàn)，肝臟內(nèi)出現(xiàn)T淋巴細胞則反映存在免疫機制介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，而樹突狀細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞等肝臟先天免疫系統(tǒng)的過激反應(yīng)將加重ALD的發(fā)展，加速肝臟損傷[19-20]。肝損傷時T細胞將向肝臟遷移，同時酒精將激活不同免疫表型T淋巴細胞，促使趨化因子、促炎性因子表達，由于T淋巴細胞浸潤肝臟而破壞其功能，同時除T淋巴細胞外，永久性自然殺傷細胞也參與免疫應(yīng)答，引起肝臟損傷。王大剛等[21]研究中觀察了非嗜肝病毒感染所致的肝損傷患者病因及免疫功能變化情況，結(jié)果得出，非嗜肝病毒感染所致的肝損傷患者伴有淋巴細胞形態(tài)變化外，還存在免疫功能紊亂現(xiàn)象，而這也為誘發(fā)該類患者肝損傷的主要原因。本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，觀察組CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞水平均較低，B細胞水平較高（P<0.05），由此可見，相對于健康人群而言，ALD患者伴有免疫功能紊亂現(xiàn)象，故通過測定外周血淋巴細胞亞群，可對ALD免疫功能變化進行評估，有助于為ALD的診斷、治療及預(yù)后提供幫助。此外，經(jīng)Pearson相關(guān)性檢驗結(jié)果顯示，大腸埃希桿菌、糞腸球菌、乳酸桿菌與B細胞均呈正相關(guān)，與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈負相關(guān)（P<0.05），雙歧桿菌與CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞均呈正相關(guān)，與B細胞呈負相關(guān)（P<0.05），提示腸道菌群與淋巴細胞亞群具有一定的相關(guān)性，進而可通過調(diào)控菌群來干預(yù)患者免疫功能變化，同時基于腸道菌群、免疫功能紊亂在ALD發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中起到的重要作用，可將其用于評估ALD的診治效果。

綜上所述，ALD患者存在腸道菌群失調(diào)、免疫功能紊亂現(xiàn)象，且兩者具有一定的相關(guān)性，利于為ALD診治、預(yù)后評估提供參考。

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（收稿日期：2021-07-29） （本文編輯：張爽）