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    微小RNA調(diào)控牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)向分化的研究進(jìn)展

    2021-03-27 02:53:20胡榮榮王玉良
    關(guān)鍵詞:微小RNA

    胡榮榮 王玉良

    【關(guān)鍵詞】 牙髓干細(xì)胞 微小RNA 成牙本質(zhì)向分化

    [Key words] Dental pulp stem cells microRNA Odontogenic differentiation

    First-author’s address: School of Stomatology, Binzhou Medical University, Yantai 264000, China

    doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2021.26.045

    作為嚴(yán)重威脅人們口腔健康的疾病之一,齲病可繼發(fā)牙髓炎、根尖周炎,甚至各種頜骨炎癥,最終造成牙體缺損、甚至牙體缺失。與其他組織(如骨組織)相比,受損后具有自我修復(fù)和重塑的能力,牙體組織則不容易完全再生且修復(fù)程度有限[1]。目前,缺損的牙體組織主要依賴(lài)口腔充填材料修復(fù),且無(wú)法完全恢復(fù)牙齒的生物學(xué)性能。所以,牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells,DPSCs)在組織再生領(lǐng)域的相關(guān)研究受到越來(lái)越多患者及科學(xué)家的普遍關(guān)注。

    DPSCs是一類(lèi)來(lái)源于牙髓組織的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs),可在活髓組織中分離和培養(yǎng),有較強(qiáng)的增殖、自我更新能力以及分化為多種細(xì)胞的潛能,且容易獲得、來(lái)源較為豐富、對(duì)供體損傷不大、不涉及倫理問(wèn)題,在組織工程和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用十分廣闊[2]。微小RNA(microRNA,miRNA)作為內(nèi)源性RNA,大量存在于生物體內(nèi),同時(shí),在轉(zhuǎn)錄后相關(guān)基因的調(diào)控中具有不可替代作用,參與諸多生物發(fā)生過(guò)程,如細(xì)胞發(fā)育、分化、增殖和凋亡等[3]。已有文獻(xiàn)報(bào)道,miRNA參與牙齒的發(fā)育和再生[4]。

    1 DPSCs

    人牙髓干細(xì)胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)是外胚層來(lái)源的成體干細(xì)胞,源于遷移的神經(jīng)嵴細(xì)胞[5]。2000年,由Gronthos等[6]首次分離、鑒定及命名。在體內(nèi)和體外適宜培養(yǎng)條件下,DPSCs可分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞[7],其中牙向分化能力在口腔相關(guān)研究中非常重要。成骨誘導(dǎo)可顯著增強(qiáng)DPSCs的礦化能力,同時(shí)以HA/TCP為載體與DPSCs結(jié)合,可在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生牙本質(zhì)/牙髓樣復(fù)合物[6,8],以此證明了DPSCs良好的組織再生能力。

    2 miRNA

    只有1%~2%的RNA分子可翻譯成蛋白質(zhì),稱(chēng)為編碼RNA,大多數(shù)是非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)[9]。作為一類(lèi)重要的ncRNA,miRNA由19~25個(gè)核苷酸組成,長(zhǎng)度為18~22 nt。最早發(fā)現(xiàn)的2個(gè)miRNA分別是lin-4和let-7[10-11],且都存在于線蟲(chóng)體內(nèi)。miRNA不僅可以降解mRNA的翻譯,還能抑制mRNA的翻譯,負(fù)性調(diào)節(jié)基因的表達(dá)[11]。核酸酶Dicer在miRNA形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用,文獻(xiàn)[12]研究報(bào)道,條件性敲除小鼠的Dicer1會(huì)導(dǎo)致牙齒原有的大小和形狀發(fā)生改變,這表明牙齒的發(fā)育受到miRNA的嚴(yán)格調(diào)控。

    3 DPSCs和miRNA

    3.1 miRNA在DPSCs成牙本質(zhì)向分化中的作用 miRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)信使RNA(mRNA)向蛋白質(zhì)翻譯,在所有生物活動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[13]。miRNA具有明顯的特異性,即不僅在不同物種、組織及細(xì)胞間會(huì)有不同的表達(dá);而且在相同物種、組織及細(xì)胞發(fā)育的不同時(shí)期,其表達(dá)也不盡相同[14]。呂紅兵等[15]指出,與非DPSCs對(duì)比,DPSCs中表達(dá)超過(guò)2倍的miRNA有14個(gè),其中有11個(gè)上調(diào)和3個(gè)下調(diào);同時(shí)推測(cè),表達(dá)譜的差異可能與細(xì)胞干性有關(guān)。有研究利用PCR對(duì)104種已知miRNA分析發(fā)現(xiàn),與BM-MSCs相比,DPSCs中差異表達(dá)的miRNA共有48個(gè),其中上調(diào)的19個(gè),下調(diào)的29個(gè)[16]。Gong等[3]使用微陣列分析來(lái)篩選和比較hDPCs牙源性分化過(guò)程中miRNA譜的變化,發(fā)現(xiàn)有22個(gè)miRNA差異表達(dá),其中12個(gè)上調(diào),10個(gè)下調(diào)。

    miRNA對(duì)于DPSCs成牙本質(zhì)向分化的調(diào)控具有雙向作用,它不僅可以促進(jìn)成牙本質(zhì)向分化,還可以抑制此過(guò)程[9]。研究發(fā)現(xiàn),miR-720在明顯降低其增殖能力的同時(shí),可促進(jìn)DPC成牙本質(zhì)向分化;同時(shí)指出,miR-720將成為DPC分化過(guò)程中的新型miRNA[17]。研究利用miR-210模擬物和抑制物調(diào)節(jié)DPSCs中miR-210的表達(dá),發(fā)現(xiàn)上調(diào)miR-210可促進(jìn)DSPP、DMP1 mRNA及蛋白的表達(dá);抑制其表達(dá),則結(jié)果相反。從而提示miR-210在DPSCs成牙本質(zhì)向分化過(guò)程中起正向調(diào)節(jié)作用,不過(guò),其中作用機(jī)制需進(jìn)一步研究[18]。邱在玲等[19]通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染hDPSCs過(guò)表達(dá)miR-146a-5p,結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)組中成牙分化標(biāo)志物(Dspp、Dmp1)表達(dá)顯著上調(diào),由此證明miR-146a-5p正向調(diào)控hDPSCs牙向分化。Chang等[4]發(fā)現(xiàn)miR-218在DPSCs中表達(dá)下調(diào),且miR-218模擬物可顯著降低DPSCs的增殖和分化能力。吳韞慧等[20]發(fā)現(xiàn),miR-431在DPSCs成牙分化過(guò)程中表達(dá)下調(diào),同時(shí),成牙分化標(biāo)志物表達(dá)顯著上調(diào),推測(cè)miR-431負(fù)向調(diào)控成牙本質(zhì)向分化。另外,還有較多miRNA正向調(diào)節(jié)DPSCs牙向分化,如miR-21、miR-223、miR-27a-5p、miR-125a-3p、miR-135b[3,21-24];而miR-143、miR-145、miR-488則可負(fù)向調(diào)節(jié)這一過(guò)程[25-26]。

    Liu等[25]利用微陣列分析小鼠DPSCs中miRNA的表達(dá),其中,miR-143和miR-145下調(diào)最明顯,可與KLF4形成調(diào)節(jié)反饋環(huán)抑制Dspp和Dmp1 mRNA及蛋白的表達(dá),從而負(fù)向調(diào)控牙向分化。成牙本質(zhì)向分化過(guò)程中,這是首個(gè)涉及miRNA的反饋環(huán)調(diào)控報(bào)道。Quaking(QKI)是STAR家族的成員之一,作為RNA結(jié)合蛋白直接與RNA結(jié)合,存在于各種細(xì)胞類(lèi)型中,影響RNA代謝和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。隨后的文獻(xiàn)[27]研究中發(fā)現(xiàn),QKI不僅可以作為KLF4的競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)源RNA(competent endogenous RNA,ceRNA),通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)其共有的miRNA(miR-124-3p、miR-128-3p、miR-145-5p、miR-429)上調(diào)KLF4來(lái)促進(jìn)hDPSCs成牙本質(zhì)向分化,還可作為DSPP mRNA的結(jié)合蛋白來(lái)促進(jìn)hDPSCs的成牙本質(zhì)向分化。

    每個(gè)miRNA可以靶向調(diào)控多個(gè)mRNA;同時(shí),每個(gè)mRNA也可以由多個(gè)miRNA靶向調(diào)控。一方面,miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平抑制或降解mRNA翻譯;另一方面,miRNA似乎還具有后續(xù)作用,可能通過(guò)相應(yīng)反調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)揮其他mRNA水平及蛋白質(zhì)相互作用[16]。

    3.2 miRNA調(diào)控DPSCs成牙本質(zhì)向分化中相關(guān)的信號(hào)通路 DPSCs成牙本質(zhì)向分化過(guò)程中受多種因素(如miRNA、信號(hào)通路等)調(diào)控。包括細(xì)胞分化在內(nèi)的諸多生物發(fā)生過(guò)程都離不開(kāi)miRNA的參與。已有研究證明,miRNA通過(guò)相關(guān)信號(hào)途徑在DPSCs成牙本質(zhì)向分化中發(fā)揮重要作用。

    3.2.1 Notch信號(hào)通路 邱在玲等[28]發(fā)現(xiàn),上調(diào)miR-146a-5p表達(dá)后,DPSCs增殖能力下降,然而可顯著促進(jìn)DPSCs分化;反之,則結(jié)果相反。利用siRNA-Notch1轉(zhuǎn)染DPSCs來(lái)干擾Notch信號(hào),可促進(jìn)DPSCs分化而抑制其增殖,Notch1作為miR-146a-5p的直接靶點(diǎn),由此證明,miR-146a-5p可通過(guò)Notch1參與調(diào)控Notch信號(hào)通路,在促進(jìn)DPSCs分化中發(fā)揮重要作用。

    3.2.2 NF-κB信號(hào)通路 Wang等[23]指出miR-125a-3p可能與齲齒的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān),在齲齒中,侵入髓腔的病原體通過(guò)釋放各種炎癥因子導(dǎo)致DPSCs中miR-125a-3p表達(dá)增加,致使Fyn上調(diào)。Fyn與NRP1相互作用形成NRP1-Fyn復(fù)合物來(lái)激活NF-κB信號(hào)通路。結(jié)果顯示,DPSCs的成牙本質(zhì)向分化能力降低,炎癥反應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大,最終破壞了正常的牙齒組織致使齲齒更加嚴(yán)重。

    3.2.3 MAPK信號(hào)通路 絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)可識(shí)別各種胞外部信號(hào),并被激活,在信號(hào)向細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)過(guò)程中具有重要作用[29]。MAPK可分為4個(gè)亞族:ERK、p38、JNK和ERK5。有文獻(xiàn)證明,生長(zhǎng)因子,細(xì)胞因子和機(jī)械刺激通常通過(guò)激活MAPK(特別是通過(guò)ERK1/2途徑)誘導(dǎo)細(xì)胞分化和礦化變化。

    研究發(fā)現(xiàn)miR-135b的潛在靶基因有APC、MEF2C和COL5A1,于是推測(cè)表達(dá)下調(diào)的miR-135b通過(guò)它們來(lái)調(diào)控MAPK和Wnt信號(hào)通路,從而促進(jìn)hDPCs牙源性分化[3]。Chang等[4]指出miR-218通過(guò)ERK1/2途徑負(fù)向調(diào)節(jié)DPSCs牙本質(zhì)生成。研究證明,過(guò)度表達(dá)的miR-143-5p可以通過(guò)降低p38 MAPK通路相關(guān)基因(MAPK14、Ras和MKK3/6)和成牙本質(zhì)向分化標(biāo)志物(ALP、DSPP、OCN)的表達(dá)來(lái)負(fù)向調(diào)控這一過(guò)程[30];同時(shí),文獻(xiàn)[26]報(bào)道稱(chēng),miR-488的下調(diào)可通過(guò)MAPK1激活p38 MAPK信號(hào)通路,同時(shí)增加DSPP、ALP和OCN的表達(dá),從而證明miR-488在hDPSCs成牙本質(zhì)向分化過(guò)程中起負(fù)向調(diào)控作用。另外,也可利用OPG/RANKL信號(hào)通路調(diào)控Runx2表達(dá)來(lái)負(fù)向調(diào)控這一過(guò)程[31]。

    除以上幾種信號(hào)通路,此外與DPSCs成牙本質(zhì)向分化相關(guān)的信號(hào)通路還有Wnt、TGF-β1/smads、LPS/TLR-4、OPG/RANKL等信號(hào)通路[3,21,32-33]。miRNA與這些信號(hào)通路及其他相關(guān)因子形成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)來(lái)調(diào)控DPSCs成牙本質(zhì)向分化。

    4 小結(jié)與展望

    目前,miRNA調(diào)控DPSCs成牙本質(zhì)向分化的具體機(jī)制尚不清楚,其中涉及復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。DPSCs成牙本質(zhì)向分化過(guò)程中涉及較多的信號(hào)通路,目前有關(guān)MAPK途徑的報(bào)道較多;已發(fā)現(xiàn)較多數(shù)量的特定miRNA,還有更多miRNA等待發(fā)現(xiàn);它們對(duì)牙向分化具有雙向作用;現(xiàn)相關(guān)研究?jī)H處于分子水平,接下來(lái)還需可靠的臨床前動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。因此,人們還需不斷研究和探索,為實(shí)現(xiàn)牙本質(zhì)再生及牙再生提供理論基礎(chǔ)。

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    (收稿日期:2020-12-02) (本文編輯:張爽)

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