微囊型脂肪粉中粗脂肪的快速測定

殷秋妙，王 勇，強(qiáng) 莉，王威利，黃曉梅，孫麗華

（1廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測技術(shù)研究所，廣州510640；2農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（廣州），廣州510640；3廣州市優(yōu)百特飼料科技有限公司，廣州510550；4山東省飼料質(zhì)量檢驗(yàn)所，濟(jì)南250022)

0 引言

油脂是動(dòng)物全價(jià)飼料的重要原料之一，在降低動(dòng)物熱應(yīng)激、滿足特殊生理期能量需要、為動(dòng)物提供必須脂肪酸、提高免疫力等方面具有重要生理作用[1-3]。飼料用油中，傳統(tǒng)的原料油在脂肪酸組成上不平衡，較難被動(dòng)物消化吸收，且容易氧化酸敗進(jìn)而帶來了養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)[4-6]。針對這些問題，近十多年來，國內(nèi)外企業(yè)利用微囊化技術(shù)[7]創(chuàng)造了新型飼料原料——微囊型脂肪粉。微囊型脂肪粉是以油脂為芯材，以天然碳水化合物和（或）蛋白質(zhì)等高分子生物可降解物質(zhì)為壁材，經(jīng)物理化學(xué)工藝（目前主要是噴霧干燥法）處理而成為“水包油”型微小脂肪粉[8-9]，粒徑為5～500μm，脂肪含量多在50%以上。微囊型脂肪粉已在仔豬、繁育母豬等動(dòng)物的養(yǎng)殖業(yè)中得到了較廣泛的應(yīng)用。

目前，食品和飼料中粗脂肪測定主要有索氏抽提法[10-12]、堿水解法[10-13]、氯仿-甲醇法[14-15]和酸水解法[10-12]。由于油脂被包裹，索氏抽提法測定結(jié)果偏低[14]；氯仿-甲醇超聲破解法可用，但氯仿試劑毒性較大，不適宜標(biāo)準(zhǔn)化；堿水解法在乳制品中應(yīng)用較多，但不適于水解微囊型脂肪粉的壁材大分子物質(zhì)；酸水解法理論上可行，但現(xiàn)有的2個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)[10-11]中酸水解方法對微囊型脂肪粉不適合，測定結(jié)果均偏低，偏低原因主要是微囊型脂肪粉粗脂肪含量高而水相轉(zhuǎn)移造成損失過大[10]，和水解溫度偏低造成水解不完全引起[11]，并且GB/T6433—2006[10]的方法步驟非常繁瑣、耗時(shí)。國外也尚未公開這類產(chǎn)品的測定方法，因而這將影響該產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和產(chǎn)品貿(mào)易。

基于此，本研究按照試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)的編寫規(guī)則[16]要求，以在全國范圍內(nèi)廣泛收集的微囊性脂肪粉代表性樣品（標(biāo)準(zhǔn)化的對象）為材料，根據(jù)酸水解原理，通過篩選合適的酸水解條件及萃取方法，首次建立了微囊型脂肪粉中的粗脂肪含量的快速測定方法，并依據(jù)GB/T 6379.2—2004測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度（正確度和精密度）[17]的要求，組織了實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，確定了該方法的性能指標(biāo)，為該方法的標(biāo)準(zhǔn)化確定了適用范圍和主要技術(shù)步驟及指標(biāo)等規(guī)范性技術(shù)要素。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

FOSS SoxtexTM8000脂肪儀（瑞典）；DHG-9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華）；Eppendorf 5804R臺式高速離心機(jī)。

1.2 試劑與材料

鹽酸、石油醚、95%乙醇均為分析純（廣州化學(xué)試劑廠）；代表性樣品由廣州市優(yōu)百特飼料科技有限公司收集提供，是從國內(nèi)大型生產(chǎn)廠家收集到的，覆蓋了國內(nèi)該類產(chǎn)品生產(chǎn)廠家的80%，共5份微囊型脂肪粉樣品和4份載體脂肪粉樣品。FA-6樣品是某大型企業(yè)檢驗(yàn)新方法的試驗(yàn)樣品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

樣品稱取1～2 g（精確到0.1 mg），放入50 mL離心管中，加入鹽酸溶液20 mL，在水浴鍋中水解一定時(shí)間，取出置室溫稍冷，加石油醚20 mL振蕩2 min，5000 r/min離心5 min，吸取上層液（石油醚層）于已經(jīng)恒重鋁筒（103℃±2℃，0.5 h，干燥器中冷卻）中，重復(fù)萃取，石油醚萃取液用脂肪儀去溶劑后，在103℃烘箱干燥15 min后，取出置干燥器中冷卻后稱重，殘?jiān)丶礊榇种镜馁|(zhì)量。鹽酸濃度、水浴溫度、水解時(shí)長、萃取次數(shù)等重要技術(shù)參數(shù)通過篩選確定。

試樣中(粗)脂肪含量的計(jì)算見公式(1)。

式中：W—試樣中(粗)脂肪的含量，%；A—樣品的質(zhì)量，g；B—鋁筒的質(zhì)量，g；C—鋁筒和(粗)脂肪的質(zhì)量，g。

表面油的測定：按照GB/T 6433中A類樣品方法測定。

包埋率的計(jì)算見公式(2)[13,15]。

1.4 方法驗(yàn)證

添加回收試驗(yàn)：以編號為FA-6的微囊型脂肪粉為試材，稱取4份樣品，每份1 g，添加2個(gè)梯度，添加量分別為0.2 g和0.4 g大豆油，依據(jù)所建方法測定粗脂肪；計(jì)算方法的重復(fù)性（以標(biāo)準(zhǔn)差表示）和回收率。

實(shí)驗(yàn)室間比對[17]：委托3家實(shí)驗(yàn)室對5個(gè)包埋率水平不同的微囊型脂肪粉樣品，每個(gè)樣品重復(fù)測定6次，依據(jù)測量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度標(biāo)準(zhǔn)，對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行柯克倫(Cochran)檢驗(yàn)，以評價(jià)該方法在實(shí)驗(yàn)室間精密度的一致性；用格拉布斯(Grubbs)檢驗(yàn)判定實(shí)驗(yàn)室間平均值的一致性，若一致則判定結(jié)果準(zhǔn)確；根據(jù)再現(xiàn)性方差=重復(fù)性方差+室間方差，即：SR2=Sr2+SL2，計(jì)算再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)差，通常把2.8倍作為方法允許誤差系數(shù)，即LSr=2.8*Sr，LSR=2.8*SR，并依此推算確定方法的重復(fù)性和再現(xiàn)性允許差。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的建立

2.1.1 試驗(yàn)樣品包埋率測定 為使建立的粗脂肪測定方法具有良好的適用性，宜選用包埋率較高和較低兩端位的微囊型脂肪粉作為試驗(yàn)材料。為此，用GB/T 6433—2006[10]中索氏抽提方法對收集到的微囊性脂肪粉樣品的表面油含量進(jìn)行了測定，而總油含量以企業(yè)給出的產(chǎn)品標(biāo)示值計(jì)，進(jìn)而了解樣品油脂包埋率情況（表1）。從表1可以看出，5份樣品的脂肪包埋率分布寬泛，差異較為懸殊，代表性較好；樣品FA-4的脂肪包埋率最高，達(dá)83.40%，樣品FA-5的脂肪包埋率最低，為18.83%。本研究選擇脂肪包埋率最高的FA-4樣品和脂肪包埋率最低的FA-5樣品作為試驗(yàn)材料進(jìn)行方法的建立研究。

表1 5種微囊型脂肪粉包埋率的測定

2.1.2 酸水解條件篩選 酸水解的設(shè)計(jì)涵蓋現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)[10-11]中酸水解的條件并擴(kuò)大了試驗(yàn)范圍，在水解時(shí)間為60 min時(shí)，研究了4種鹽酸濃度（3 mol/L、4 mol/L、5 mol/L和6 mol/L）和4種水解溫度（70℃、80℃、90℃和100℃）對包埋率最高的FA-4樣品和包埋率最低的FA-5樣品中粗脂肪含量測定的影響?？紤]到微囊型脂肪粉的壁材特點(diǎn)，如蛋白類壁材多用乳清蛋白，而乳清蛋白的熱凝膠變性的溫度在75℃左右[18]，以及多糖類壁材比蛋白類更容易水解，因此水解試驗(yàn)溫度以70℃為起點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，由于微囊粉的親水性不強(qiáng)，容易漂浮在酸溶液表面，水解酸度的增加雖然能夠加快水解反應(yīng)，但同時(shí)帶來了加速美拉德褐變和使脂肪氧化的風(fēng)險(xiǎn)。6 mol/L鹽酸濃度的水解條件均可將2種實(shí)驗(yàn)樣品的微囊壁完全地水解，但溶液完全褐變；此外，試驗(yàn)操作過程中因酸度過高也有一定的安全風(fēng)險(xiǎn)，因而不宜選用。

其他組合條件下測定結(jié)果見圖1和圖2，可以發(fā)現(xiàn)，水解溫度80℃和90℃的兩個(gè)處理組因酸度引起的2個(gè)樣品中的粗脂肪含量測定結(jié)果變異較小，均十分接近真實(shí)值；70℃和100℃處理組酸度變化引起的測定結(jié)果變異較大，且100℃時(shí)包埋率高的樣品可能存在未加抗氧化劑因氧化作用引起的整體偏高特點(diǎn)。在80℃和90℃的水解溫度條件下，3 mol/L和4 mol/L鹽酸水解時(shí)粗脂肪的測定結(jié)果一致性更好。鑒于飼料市場中目前及未來可能有包埋率更高的微囊型脂肪粉產(chǎn)品，以及出于水解充分和減少褐變的考慮，選擇用4 mol/L鹽酸85℃±5℃水解1 h作為微囊型脂肪粉的酸水解條件。

圖1 不同水解條件對微囊型脂肪粉FA-4樣品中粗脂肪含量測定的影響

圖2 不同水解條件對微囊型脂肪粉FA-5樣品中粗脂肪含量測定的影響

水解時(shí)間能否縮短以建立更加快速的測定技術(shù)呢？筆者以包埋率最高的FA-4樣品為材料，設(shè)計(jì)了水解時(shí)間為30 min到1 h內(nèi)的處理進(jìn)行了研究，以該溫度下樣品溶液出現(xiàn)褐變?yōu)樵摐囟鹊乃饨K止點(diǎn)，具體為 70℃水解 60min、80℃水解 40 min和 90℃水解30 min。從結(jié)果（圖3）可以看出，在70℃水解60 min條件下，不同鹽酸濃度處理的粗脂肪測定結(jié)果基本一致，相對比較接近真實(shí)值；在80℃水解40 min和90℃水解30 min條件下，隨著鹽酸濃度由低到高，粗脂肪的測定結(jié)果均呈現(xiàn)出逐漸增大的規(guī)律，但測定結(jié)果仍然偏低，只有在鹽酸濃度為6mol/L時(shí)測定結(jié)果才比較接近產(chǎn)品的真實(shí)值。這說明，在鹽酸濃度從3mol/L增加到5mol/L的情況下，即使水解溫度提高，水解時(shí)間從60 min縮短到40 min乃至30 min造成了微囊壁的水解不完全，進(jìn)而造成了測定結(jié)果偏低。因此，水解時(shí)間還是以60 min為好。

圖3 不同水解條件對包埋率較高的FA-4樣品粗脂肪含量測定的影響

2.1.3 萃取方法的選擇 在食品脂肪測定[11]方法里，采用無水乙醚或石油醚作為酸水解后萃取劑。邱清蓮等[19]比較了乙醚和石油醚萃取對酸水解含糖樣品中的粗脂肪測定的影響，發(fā)現(xiàn)用石油醚測定脂肪的準(zhǔn)確度高，而用乙醚萃取的粗脂肪測定值偏高，準(zhǔn)確度下降。這是由于乙醚具有一定極性，能夠萃取部分碳水化合物，而石油醚不能[20]。鑒于多糖類是部分復(fù)合微囊壁材的重要成份之一，為了避免糖類對方法準(zhǔn)確性的影響，采用石油醚作為萃取劑。

萃取時(shí)溶劑乳化和粘附在石油醚層容器壁上殘?jiān)矊⒂绊憸y量結(jié)果的準(zhǔn)確性。這些殘?jiān)菐в蟹菢O性氨基酸的球蛋白殘片，通過加入乙醇，使乙醇的親油端與殘片結(jié)合使其迅即沉入下層酸水溶液中，進(jìn)而去除；此外，乙醇還具有降低乳化作用，再輔助以離心很好地解決了乳化和殘?jiān)绊憽?/p>

以FA-5樣品為試材，稱樣2 g，加3 mol/L和4 mol/L鹽酸溶液20 mL，85℃水浴1 h，期間每20 min渦旋15 s，冷卻至室溫，用20 mL石油醚萃取，加入95%乙醇5 mL消除黏附在石油醚層器壁上的殘?jiān)腿ト榛麴s除去溶劑（可用脂肪儀去溶劑）后，于103℃烘干；重復(fù)用20 mL石油醚萃取，分析各次萃取脂肪的比率，從而確定萃取次數(shù)。從結(jié)果（表2）可以看出，在2種濃度的鹽酸水解處理中，第1次石油醚的萃取率均高于90%，2次石油醚的萃取率已高于99.7%，經(jīng)過3次萃取后萃取率均達(dá)100%。

表2 石油醚萃取次數(shù)對微囊型脂肪粉FA-5中粗脂肪含量測定的影響

從FA-5樣品的萃取試驗(yàn)的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，40 mL石油醚至少可以萃取2.2 g脂肪。本研究中所用實(shí)際樣品粗脂肪含量在50%～60%，文獻(xiàn)報(bào)道有含量為64%[21]。對于本方法建議的稱樣量1～2 g，2 g的稱樣量，即使粗脂肪含量100%，也即為2 g，40 mL石油醚的萃取依然是充足的。

綜上所述，著眼于綠色環(huán)保和滿足分析精度要求的理念，萃取方法選擇石油醚萃取2次，每次20 mL。此外，還對去溶劑后粗脂肪殘?jiān)暮娓蓵r(shí)間進(jìn)行了研究。烘干的目的是完全去除粗脂肪中的有機(jī)溶劑，確保粗脂肪的測定值準(zhǔn)確。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，15 min烘干和30 min烘干后粗脂肪的重量一樣（結(jié)果未示），這說明烘干15min就可以將粗脂肪中的有機(jī)溶劑全部蒸發(fā)出去，這一結(jié)果同GB/T6433—2006[10]中的烘干時(shí)間一致。

2.2 方法性能考察

2.2.1 室內(nèi)重復(fù)性和正確度 添加回收試驗(yàn)結(jié)果詳見表3，F(xiàn)A-6樣品粗脂肪平均含量為52.72%，RSD為0.08%，大豆油的平均回收率為100.0%，RSD為1.1%。對照GB/T 27404—2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范[22]中對測定結(jié)果的精密度和回收率的要求（含量在10%～100%時(shí)，室內(nèi)精密度要求1.3%≤RSD≤2.0%，回收率要求為95%～105%[22]），結(jié)果表明本研究的測定結(jié)果符合GB/T 27404—2008的要求。

表3 所建方法的添加回收試驗(yàn)

2.2.2 實(shí)驗(yàn)室間比對和方法精密度確定 3家實(shí)驗(yàn)室測定平均值和室內(nèi)平均標(biāo)準(zhǔn)差見表4，各實(shí)驗(yàn)室測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差經(jīng)過柯克倫(Cochran)檢驗(yàn)[17]結(jié)果無離群值，平均值經(jīng)格拉布斯(Grubbs)檢驗(yàn)[17]無離群值，說明測定結(jié)果準(zhǔn)確。5個(gè)樣品室內(nèi)重復(fù)性誤差（平均標(biāo)準(zhǔn)差）為0.18%～0.35%，平均為0.27%；再現(xiàn)性誤差（標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)）為0.20%～0.72%，平均為0.46%；依據(jù)重復(fù)性誤差和重復(fù)性誤差限的關(guān)系，推算出方法的重復(fù)性限0.75%，再現(xiàn)性限為1.3%。因此，本新建方法的允許誤差宜表述為“在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的1.5%。

表4 所建方法的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果比對和方法精密度確定

2.3 所建方法與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T6433—2006的比較

用所建方法和GB/T 6433—2006中酸水解方法測定FA-4和FA-5樣品粗脂肪含量（表5），并按照GB/T 6433—2006中的方法計(jì)算精密度。結(jié)果表明，所建方法的粗脂肪測定結(jié)果與產(chǎn)品的真實(shí)值更吻合，而GB/T 6433—2006中酸水解方法的測定值明顯偏低；所建方法的精密度明顯優(yōu)于國標(biāo)GB/T 6433—2006方法。測定脂肪包埋率較高的樣品FA-4和包埋率較低的樣品FA-5時(shí)，國標(biāo)GB/T 6433—2006方法的測定值分別比所建方法低29.1%和33.3%。

表5 所建方法與GB/T 6433酸水解方法測定微囊型脂肪粉粗脂肪結(jié)果的比較

本研究所建方法操作簡便，且完成測定所需要的時(shí)間短，約為2.6 h，而國標(biāo)GB/T 6433—2006[10]酸水解法約需要7 h；此外，新建方法較為經(jīng)濟(jì)和環(huán)保，節(jié)約了大量有機(jī)試劑的使用。

2.4 所建方法測量載體脂肪粉中粗脂肪含量的結(jié)果分析

將所建方法應(yīng)用于5種載體脂肪粉樣品測定，并與索氏抽提方法比較，結(jié)果見表6。所建方法比索氏抽提法測定值偏低，低24%～10%，造成此結(jié)果的原因在于2種方法提取機(jī)理的差別。本研究所建的酸水解萃取法對粗脂肪的選擇取決于2個(gè)方面，即在石油醚中的溶解度以及在石油醚和酸溶液中的油水分配系數(shù)，而索氏抽提法對粗脂肪的提取僅指在石油醚中溶解的物質(zhì)。載體脂肪粉是由膨化玉米等作為載體物理吸附油脂（包括磷脂），油脂處于游離狀態(tài)，容易被石油醚抽提，不需要酸水解。而酸水解過程載體脂肪粉樣品中的磷脂在強(qiáng)酸加熱條件下可完全水解成甘油、脂肪酸、磷酸等，磷酸溶解于水，因而致使結(jié)果偏低。因此，本研究的所建方法不適合載體脂肪粉樣品中粗脂肪含量的測定。

表6 2種方法測定載體脂肪粉結(jié)果比較

3 討論與結(jié)論

食品工業(yè)把微囊型脂肪粉以粉末油脂命名[14]，飼料工業(yè)還沒有標(biāo)準(zhǔn)化的命名。由于飼料中也有粉末化的載體脂肪粉，為突出微囊型脂肪粉產(chǎn)品的技術(shù)特點(diǎn)，又兼顧到其與飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化術(shù)語[23]“微膠囊化”的異同，本課題組將其命名為微囊型脂肪粉。目前在現(xiàn)行食品和飼料粗脂肪檢測標(biāo)準(zhǔn)中均未涉及該類產(chǎn)品。本研究首先嘗試了食品和飼料的相關(guān)方法[10-11]，發(fā)現(xiàn)均不適用；其他方法中選用的試劑毒性較大，不符合標(biāo)準(zhǔn)化的普適、環(huán)保等要求。

影響微囊型脂肪粉粗脂肪測定準(zhǔn)確度的關(guān)鍵有3點(diǎn)，首先是微囊壁是否全部破碎，其次是萃取時(shí)溶劑乳化和粘附在石油醚層容器壁上殘?jiān)斐傻母蓴_，第三是樣品不含磷脂。本研究沒有直接研究破壞微囊壁結(jié)構(gòu)的物理化學(xué)過程，而是從微囊破壁的條件以及與之密切相關(guān)的游離脂肪的質(zhì)量入手，確定水解條件。4 mol/L鹽酸85℃下水解1 h，足可以使所有熱凝膠蛋白二級以上結(jié)構(gòu)破壞，多糖類壁材比蛋白更容易水解，因此無論對于單材料（多糖類或蛋白類壁材）或二者組合的復(fù)合壁材，水解條件均適用。水解過程不同樣品發(fā)生褐變程度不一，褐變主要是糖和蛋白類氧化發(fā)生美拉德反應(yīng)引起，脂肪在此環(huán)節(jié)可能會微量氧化，但是試驗(yàn)證明這些并沒有引起粗脂肪質(zhì)量的明顯變化。在方法最后去溶劑烘干環(huán)節(jié)，脂肪應(yīng)該會發(fā)生輕微氧化，但是和油脂氧化穩(wěn)定性測定所需要的60℃30天加速氧化法相比，氧化問題可以忽略不計(jì)，這也是所有脂肪測定方法[10-12]所默許的。乙醇的使用很好解決了黏壁和乳化問題，此效應(yīng)同文獻(xiàn)[11]一致。目前，飼用磷脂常以磷脂粉或者載體脂肪粉形式應(yīng)用。磷脂具有乳化和親水性，容易水解和氧化。在藥物微囊化技術(shù)中的脂質(zhì)體技術(shù)中有使用，但是因脂質(zhì)體的熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性較差，該技術(shù)目前還不成熟[7]，而且生產(chǎn)工藝和成本高，因此飼用微囊型脂肪粉生產(chǎn)中不會添加磷脂。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)是建立了新的酸水解方法，使之適用于微囊型脂肪粉，并優(yōu)化了萃取方法，使之充足又避免了浪費(fèi)，實(shí)現(xiàn)了方法的精準(zhǔn)高效和經(jīng)濟(jì)。

此外，本研究過程還發(fā)現(xiàn)微囊型脂肪粉另一個(gè)質(zhì)量指標(biāo)——包埋率仍然缺乏測定方法標(biāo)準(zhǔn)。包埋率由表面油和總油推算而來。目前表面油測定方法不一；本研究用索氏抽提法測定表面油，比其他文獻(xiàn)報(bào)道[13,15]的抽提時(shí)間長，包埋率相對數(shù)值會低一點(diǎn)，但這樣做可以更好地了解樣品的多樣性和包埋率。此法測得的測試樣品包埋率19%～83%，樣品的代表性比較好。

本研究所建方法為：稱取樣品1～2 g（精確到0.1 mg）于50 mL離心管中，加4 mol/L鹽酸20 mL，擰緊蓋子，渦旋30 s，85℃±5℃水浴1 h，期間每20 min渦旋15 s，水解結(jié)束，取出置冷卻至室溫，開蓋加20 mL石油醚和5 mL 95%乙醇，擰緊蓋子，用力振蕩40 s，室溫下，5000 r/min離心6 min，吸取上層液于已經(jīng)烘干恒重過的鋁筒中，再加入20 mL石油醚萃取，合并2次上清液于鋁筒中，蒸餾除去溶劑（可用脂肪儀去溶劑）后，于103℃±2℃烘干15 min，在干燥器中冷卻稱重。本方法適用于不含磷脂的微囊型脂肪粉中粗脂肪的測定，方法重復(fù)性誤差（平均標(biāo)準(zhǔn)差）為0.18%～0.35%，平均為0.27%；再現(xiàn)性誤差（標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)）為0.20%～0.72%，平均為0.46%；方法的重復(fù)性限0.75%，再現(xiàn)性限為1.3%。方法各項(xiàng)性能指標(biāo)滿足實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范[22]指標(biāo)要求，比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法[10]節(jié)省試劑50%以上，節(jié)約時(shí)間50%以上，方法快捷、經(jīng)濟(jì)，已經(jīng)被相關(guān)企業(yè)采用。