中藥白芷的活性成分歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響

曾丹，范燕燕，袁建暉，汪利群

（江西省婦幼保健院，江西 南昌 330006）

卵巢癌是發(fā)生于卵巢的惡性腫瘤疾病，早期無(wú)明顯特征，不易發(fā)現(xiàn)，且卵巢位于盆腔中，體積較小，難以發(fā)現(xiàn)，若不及時(shí)給予治療，大多數(shù)癌細(xì)胞會(huì)擴(kuò)散至盆腹腔器官[1]。而臨床治療主要以手術(shù)綜合治療為主，但缺乏有效的治療藥物，且治療后復(fù)發(fā)率較高，預(yù)后較差，具有較高的病死率，是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌，且以上皮癌最常見(jiàn)，其次是惡性生殖細(xì)胞腫瘤，嚴(yán)重威脅女性生命安全[2]。癌癥治療常用藥物生長(zhǎng)抑素是一種環(huán)狀多肽類(lèi)激素，對(duì)多種疾病的發(fā)展、防治有重要意義，而奧曲肽為生長(zhǎng)抑素八肽衍生物，其作用與生長(zhǎng)抑素相似，但持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，主要作用肝癌、胃癌等病癥的輔助治療[3]。本研究采用MTT技術(shù)檢測(cè)歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞株增殖的影響；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)有效濃度范圍的奧曲肽對(duì)卵巢癌細(xì)胞株凋亡的影響，對(duì)中藥白芷的活性成分歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡的影響進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019 年1 月至2020 年4 月本院實(shí)驗(yàn)室保存的卵巢癌細(xì)胞60 例，樣本來(lái)源均為女性，年齡35～72歲，平均年齡（42.65±3.22）歲，分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各30例。實(shí)驗(yàn)組根據(jù)不同濃度歐前胡素的干預(yù)下細(xì)胞的增殖及凋亡機(jī)制，設(shè)置濃度為1.560 mg/L（實(shí)驗(yàn)1 組）、3.125 mg/L（實(shí)驗(yàn) 2 組）、6.250 mg/L（實(shí)驗(yàn) 3 組）、12.550 mg/L（實(shí)驗(yàn) 4組）、25.250 mg/L（實(shí)驗(yàn) 5 組）、40.500 mg/L（實(shí)驗(yàn) 6 組），對(duì)照組為空白對(duì)照組。

1.2 方法 MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖：于96 孔板中接種卵巢癌細(xì)胞，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，各組分別加入不同濃度的歐前胡素干預(yù)（1.560、3.125、6.250、12.550、25.250、40.500 mg/L），并設(shè)置空白對(duì)照孔。保持溫度37 ℃，在體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2環(huán)境中培養(yǎng)24 h 后，每孔經(jīng)20 μL MTT 液培養(yǎng)，4 h 后去液，加入二甲基亞砜每孔150 μL，平板離心機(jī)10 min。以酶標(biāo)儀測(cè)定490mm波長(zhǎng)的吸光度（OD）值，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。增殖抑制率=（對(duì)照組平均OD 值-實(shí)驗(yàn)組平均OD 值）/對(duì)照組平均OD值×100%。

流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡：于6孔板中接種細(xì)胞，不同濃度歐前胡素干預(yù)24 h后，用0.25%胰酶消化細(xì)胞5 min，1 500 rmp離心 3 min 左右，經(jīng) PBS 洗滌 3 次，收集細(xì)胞于 1.5 mL EP 管中 ，3 500 rpm 離心 5 min 左右 ，加入 200 μL 的 PBS 懸浮細(xì)胞。在渦旋震蕩時(shí)觀察組滴加70%乙醇，共1 mL，震蕩搖勻后保持于 4 ℃，3 500 rmp 離心 5 min，洗滌 2 次，之后上流式分析儀檢測(cè)，1、2、3 h 內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，取平均值，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制效果及歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡效果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用“”表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制效果 MTT檢測(cè)結(jié)果顯示，歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的作用與劑量相關(guān)，且隨歐前胡素濃度升高，對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖抑制效果也隨之升高，見(jiàn)表1。

表1 歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制效果

2.2 歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡效果 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞處理24 h后凋亡比率高于對(duì)照組，且隨著歐前胡素濃度的增加卵巢癌細(xì)胞凋亡率隨之升高，見(jiàn)表2。

表2 歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞凋亡效果

3 討論

卵巢惡性腫瘤是臨床常見(jiàn)的女性生殖器官的惡性腫瘤之一，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，但可能與患者遺傳、內(nèi)分泌等因素有關(guān)，其病癥分為卵巢上皮癌和卵巢惡性生殖細(xì)胞腫瘤，前者最常見(jiàn)，常表現(xiàn)為腹痛、消瘦，后者于早期出現(xiàn)腹部包塊、腹脹等[4]。且卵巢惡性腫瘤發(fā)生率僅次于宮頸癌與宮體癌，具有較高的病死率，位于各類(lèi)婦科腫瘤首位，嚴(yán)重威脅女性患者的生命安全。臨床常給予患者化療、手術(shù)、藥物于一體的綜合治療，但尚未有顯著的治療措施。而近年來(lái)隨著臨床惡性腫瘤的發(fā)病率升高，積極尋求抗癌腫瘤活性成分藥物至關(guān)重要[5]。歐前胡素具有明顯是抗腫瘤作用，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，繼而引起下游凋亡基因級(jí)聯(lián)反應(yīng)，效果顯著。中藥白芷中的主要成分為脂溶性香豆素類(lèi)，主要有氧化前胡素、歐前胡素、異歐前胡素，同時(shí)，還有白當(dāng)歸素、白當(dāng)歸腦等，各類(lèi)有效成分對(duì)各類(lèi)病癥均有顯著作用，如佛手柑內(nèi)酯、水合氧化前胡素和白當(dāng)歸素被證實(shí)具有抗炎鎮(zhèn)痛作用；呋喃香豆素被證實(shí)有清除氧化自由基的功效；獨(dú)活醇對(duì)枯草桿菌，阿魏酸和白當(dāng)歸素對(duì)臘葉芽枝酶有明顯的抗菌作用，臨床應(yīng)用效果顯著。而歐前胡素，具有抗菌、平喘、抗敏等作用，在多種內(nèi)分泌、外分泌激素的分泌中有重要作用，可通過(guò)靶細(xì)胞膜上的生長(zhǎng)抑素受體介導(dǎo)，其中亞型2 的作用最重要，且可通過(guò)生長(zhǎng)抑素受體抑制腫瘤細(xì)胞增殖，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[6]。而歐前胡素極性小，不溶于水，易溶于極性小的有機(jī)溶劑，具有多種生理活性，可作用于患者垂體腺瘤、肝癌等病癥，效果顯著[7]。

近年來(lái)，隨臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展，發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生與發(fā)展受多基因調(diào)控，與腫瘤細(xì)胞的凋亡有密切關(guān)系，隨著臨床對(duì)歐前胡素的研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡有重要作用[8]。而凋亡細(xì)胞的數(shù)目的變化與DNA 電泳可在一定范圍內(nèi)反映細(xì)胞的凋亡情況。本研究結(jié)果顯示，歐前胡素對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖抑制效果顯著，可促使癌細(xì)胞凋亡，且歐前胡素濃度越高，藥物機(jī)制作用越顯著，同時(shí)，還可誘導(dǎo)患者癌細(xì)胞凋亡，其濃度與凋亡率成正相關(guān)，而歐前胡素對(duì)亞型2 有極強(qiáng)的親和力，是治療患者癌癥的有效治療藥物，可使患者腫瘤明顯縮小，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。因此，采用該藥物治療，對(duì)患者癌細(xì)胞控制效果顯著。

綜上所述，中藥白芷的活性成分歐前胡素可有效遏制卵巢癌腫瘤細(xì)胞的增殖，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡，可針對(duì)患者癌細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控，效果顯著，值得臨床推廣應(yīng)用。但臨床相似研究證明較少，未來(lái)應(yīng)加大臨床研究力度，進(jìn)一步明確中藥白芷的活性成分歐前胡素對(duì)卵巢癌腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡的影響，為臨床治療提供可靠依據(jù)。