炎癥細胞因子及T淋巴細胞亞群評估川崎病患兒價值分析

李惠麗 陳偉明 林若萍 林俊榮 楊坤祥 黃雪霞

【摘要】 目的：探討分析炎癥細胞因子及T淋巴細胞亞群評估川崎病患兒的價值。方法：選取2019年1月-2020年10月本院兒科收治的60例川崎病患兒作為試驗組，選取同時期就診的60例細菌感染引起的發(fā)熱患兒作為對照A組，選取同時期60例健康體檢的兒童作為對照B組，均給予炎癥細胞因子、T淋巴細胞亞群檢測。比較三組T淋巴細胞亞群指標、炎性因子指標水平，分析川崎病患兒不同時期與T淋巴細胞亞群指標、炎癥因子指標水平的相關性。結果：試驗組急性期CD4+、CD4+/CD8+均較對照A組、對照組B組顯著提高，CD3+較對照A組、對照組B組顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。試驗組急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均較對照組A組、對照B組顯著提高，且對照組A組IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均較對照組B組顯著提高（P<0.05）。急性期、亞急性期、恢復期，川崎病患兒CD3+指標水平不斷提高，CD4+、CD4+/CD8+、IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR均逐漸降低（P<0.05）。經(jīng)Pearson線性相關分析，川崎病患兒CD3+水平與疾病分期呈正相關（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負相關（r=0.-721、-0.605，P<0.001），川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平與疾病分期均呈負相關（r=-0.781、-0.514、-0.664、

-0.719、-0.652、-0.817，P<0.05）。結論：川崎病患兒T淋巴細胞亞群、炎癥因子指標水平存在異常，且與其病情的發(fā)展顯著相關，可作為鑒別川崎病輔助依據(jù)，也可作為評估川崎病發(fā)展和恢復程度的參考指標。

【關鍵詞】 川崎病 T淋巴細胞亞群 免疫功能

Evaluation of the Value of Inflammatory Cytokines and T Lymphocyte Subsets in Children with Kawasaki Disease/LI Huili， CHEN Weiming， LIN Ruoping， LIN Junrong， YANG Kunxiang， HUANG Xuexia. //Medical Innovation of China， 2021， 18（20）： 0-017

[Abstract] Objective： To explore the value of analyzing inflammatory cytokines and T lymphocyte subsets in evaluating children with Kawasaki disease. Method： From January 2019 to October 2020， 60 children with Kawasaki disease admitted to the clinical pediatrics department of our hospital were selected as the experimental group， and 60 children with fever caused by bacterial infection who visited the same period were selected as the control group A， and the same period was selected. Sixty children under physical examination were used as the control group B. They were all tested for inflammatory cytokines and T lymphocyte subgroups. The three groups of T lymphocyte subgroup index levels and inflammatory factor index levels were compared. Children with molecular Kawasaki disease were compared with T lymphocytes at different periods. Correlation between the level of lymphocyte subsets index and the level of inflammatory factors. Result： The acute phase CD4+ and CD4+/CD8+ in the experimental group were significantly higher than those in the control group A and the control group B， and the CD3+ was significantly lower than that of the control group A and the control group B. The differences were statistically significant （P<0.05）. The acute phase IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR of the experimental group were significantly higher than those of the control group A and the control group B， and IL-6， TNF-α， CRP， IFN -γ， MIF and ESR of the control group A group were significantly higher than those in the control group B （P<0.05）. In the acute， subacute， and recovery phases， the CD3+ index levels of children with Kawasaki disease continued to increase， and CD4+， CD4+/CD8+， IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR all gradually decreased （P<0.05）. Pearson linear correlation analysis， CD3+ in children with Kawasaki disease was positively correlated with disease stage （r=0.526， P<0.001）， CD4+， CD4+/CD8+ and disease stage were all negatively correlated （r=-0.721， -0.605， P<0.001）， the levels of IL-6， TNF-α， CRP， IFN-γ， MIF， and ESR in children with Kawasaki disease were negatively correlated with the disease stage （r=-0.781， -0.514， -0.664， -0.719， -0.652， -0.817， P<0.05）. Conclusion： There are abnormalities in T lymphocyte subgroups and inflammatory factors in children with Kawasaki disease， and they are significantly related to the development of the disease， they can be used as an auxiliary basis for distinguishing Kawasaki disease， and can also be used as a reference index for evaluating the development and recovery of Kawasaki disease.

[Key words] Kawasaki disease T lymphocyte subsets Immune function

First-author’s address： Huizhou First Maternal and Child Health Hospital， Huizhou 516000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.20.004

川崎病是臨床上兒科常見病和多發(fā)血管炎性疾病，患兒表現(xiàn)為發(fā)熱、頸部淋巴結腫大、眼球結膜充血、皮疹、口干等臨床癥狀[1]。川崎病屬于自限性疾病，雖然預后良好，但若川崎病患兒不能及早診斷并給予有效的治療，極易誘發(fā)冠狀動脈損害，嚴重的甚至誘發(fā)心肌梗死、猝死，威脅患兒的生命安全[2]。目前臨床上對于川崎病的發(fā)病機制尚未明確，但是有學者認為其與T淋巴細胞介導的免疫反應和炎癥因子誘發(fā)的炎癥密切相關，參與到川崎病的發(fā)病、進展及預后[3]，本文旨在探討炎癥細胞因子聯(lián)合T淋巴細胞亞群評估川崎病患兒價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月-2020年10月臨床兒科收治的60例川崎病患兒作為研究對象（試驗組），納入標準：經(jīng)臨床兒科?？?、影像學、實驗室檢查均符合川崎病的診斷標準[4]。排除標準：因病原體感染引起的發(fā)熱患兒;血液系統(tǒng)疾病患兒;發(fā)病前60 d使用過免疫調(diào)節(jié)藥物患兒;先天性遺傳病患兒。選取同時期就診的60例細菌感染引起的發(fā)熱患兒作為對照A組，納入標準：實驗室檢查確認為細胞感染，影像學和實驗室檢查排除川崎病的可能，沒有川崎病疾病史。排除標準：心血管疾病引起的感染損害患兒;器質(zhì)性心臟疾病患兒。另選取同時期60例健康體檢的兒童作為對照B組，納入標準：兒童生長發(fā)育正常，各項身體指標檢查正常，無相關疾病。排除標準：體檢資料不完整;心血管疾病引起的感染損害患兒;器質(zhì)性心臟病患兒。研究對象家長簽署知情同意書，自愿參與本研究，本研究開展前經(jīng)醫(yī)院倫理學委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 川崎病患兒分期標準 發(fā)病1～11 d為急性期，發(fā)病11～21 d為亞急性期，發(fā)病21～60 d為恢復期[4]。

1.2.2 檢測方法 （1）T淋巴細胞亞群：檢測患兒CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平，檢測方法為Cell Signaling Technology（CST）提供的流式細胞術。（2）炎癥因子：檢測患兒白細胞介素6（IL-6）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、C反應蛋白（CRP）、干擾素γ（IFN-γ）、巨噬細胞遷移抑制因子（MIF）、紅細胞沉降率（ESR）水平;IL-6、TNF-α、IFN-γ、MIF采用酶聯(lián)免疫吸附法，CRP采用免疫比濁法，ESR采用魏氏法;試劑為武漢艾迪抗生物科技有限公司提供的試劑盒。（3）血樣采集：所有納入研究的對象均采集空腹靜脈血5 mL放置于肝素抗凝管中，保存在-70 ℃冰箱里，川崎病患兒于急性期、亞急性期及恢復期分別采集血樣保存待測。

1.3 觀察指標 比較三組研究對象T淋巴細胞亞群指標水平、炎性因子指標水平;分析川崎病患兒急性期、亞急性期、恢復期與T淋巴細胞亞群、炎性因子指標水平的相關性。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗;相關性分析采用Pearson線性相關。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組一般資料比較 三組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 三組T淋巴細胞亞群指標水平比較 試驗組急性期CD4+、CD4+/CD8+水平均較對照A組、對照組B組顯著提高，CD3+水平較對照A組、對照組B組顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 三組炎性因子指標水平比較 試驗組急性期IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均較對照組A組、對照B組顯著提高，且對照組A組IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均較對照組B組顯著提高，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表3。

2.4 川崎病患兒不同疾病分期與T淋巴細胞亞群指標水平相關性分析 急性期、亞急性期、恢復期，川崎病患兒CD3+水平不斷提高，CD4+、CD4+/CD8+均水平逐漸降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表4。經(jīng)Pearson線性相關分析：川崎病患兒CD3+與疾病分期呈正相關（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負相關（r=0.-721、-0.605，P<0.001）。

2.5 川崎病患兒不同疾病分期的炎性因子指標水平比較 急性期、亞急性期、恢復期，川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐漸下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05），見表5。

3 討論

臨床上對于川崎病的病因及發(fā)病機制尚未有明確的定論，無典型的實驗室診斷指標和臨床癥狀，其與細菌感染性發(fā)熱難以鑒別，極易造成誤診、漏診，延誤治療時間，增加發(fā)生冠狀動脈損害、獲得性心臟病的風險，給患兒家長帶來沉重的經(jīng)濟負擔[5-6]，因此，探究具有診治價值的實驗室指標對于川崎病的診斷、治療及預后評估具有積極意義。

3.1 T淋巴細胞亞群對川崎病診治的影響 T淋巴細胞是人體免疫反應的重要組成部分，機體的免疫功能、狀態(tài)與T淋巴細胞水平密切相關，機體正常情況下淋巴細胞可維持在一定范圍內(nèi)，但當機體出現(xiàn)異常狀態(tài)時則會引發(fā)一系列病理變化，造成機體免疫系統(tǒng)紊亂[7]，依據(jù)表面分化抗原的區(qū)別，可以把T淋巴細胞分類成CD4+和CD8+兩個亞群，而CD4+抗原為輔助T細胞與效應T細胞的表面標志，輔助T細胞通過多種細胞因子的釋放從而激活輔助B細胞與效應T細胞，在機體中可對炎癥細胞毒具有殺傷效果，同時還能夠抵抗炎癥介質(zhì)[8]。CD8+屬于免疫抑制效應細胞，其抗原為抑制T細胞與細胞毒T細胞的表面標志，抑制T細胞釋放抑制因子從而對B細胞以及效應T細胞的活化作用起到抑制效果，當水平出現(xiàn)下降過度時可對免疫系統(tǒng)形成刺激，使得CD4+/CD8+水平升高，造成免疫調(diào)節(jié)作用失衡，免疫系統(tǒng)出現(xiàn)損傷[9]。另外文獻[10]研究認為，CD8+細胞表達下降時有可能會浸潤急性期川崎病患兒的血管壁，使得免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常。本研究結果顯示：川崎病患兒的CD4+、CD4+/CD8+水平均顯著提高，并且處于急性期的患兒CD4+、CD4+/CD8+水平異常升高，CD3+水平在急性期最低，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;經(jīng)Pearson線性相關分析：川崎病患兒CD3+與疾病分期呈正相關（r=0.526，P<0.001），CD4+、CD4+/CD8+與疾病分期均呈負相關（r=0.-721、-0.605，P<0.001），表明川崎病患兒出現(xiàn)免疫抑制功能紊亂，免疫耐受失去平衡，CD4+淋巴細胞亢奮，與川崎病的發(fā)病密切相關，尤其是急性期的川崎病患兒T淋巴細胞數(shù)量和狀態(tài)發(fā)生變化顯著，促使激活機體的免疫系統(tǒng)，誘發(fā)血管炎、免疫損傷及冠狀動脈損害[11-12]，因此，T淋巴細胞指標水平的變化可輔助評估川崎病的發(fā)病、進展及預后。

3.2 炎癥因子對川崎病診治的影響 炎癥因子可增強免疫反應的程度，當川崎病患兒處于急性期時，T淋巴細胞的活躍性增強，激活免疫功能，并且B淋巴細胞被激活，產(chǎn)生和釋放大量的炎癥因子，細胞因子的表達過度增加，機體產(chǎn)生一系列的免疫應答反應，極易出現(xiàn)免疫應答損傷的同時損傷冠狀動脈[13]。IL-6屬于炎癥細胞因子，具有刺激免疫應答和誘發(fā)炎癥反應的作用，但是過度表達導致輔助性T細胞17/調(diào)節(jié)性T細胞比例失去平衡，免疫功能進一步紊亂，患兒產(chǎn)生免疫球蛋白耐藥、血管炎反應，并且與疾病的進展和發(fā)展程度呈正相關[14-15]。CRP、ESR與川崎病患兒的病情程度呈正相關，主要用于疾病感染急性期的評估，也是川崎病診斷、治療評估的重要指標，經(jīng)過免疫球蛋白等治療炎性因子水平可顯著降低[16]。IFN-γ主要產(chǎn)生于活化T細胞中，其生物活性可對血管內(nèi)皮細胞、巨噬細胞、星狀細胞、單核細胞以及皮膚成纖維細胞等的MHCⅡ類表達起到誘導作用，從而參與到特異性的免疫識別過程以及抗原提呈，此外還能夠上調(diào)內(nèi)皮細胞的CD54表達，輔助誘導TNF同時提高巨噬細胞對病原微生物的殺傷作用。IFN-γ作為Th細胞功能水平的代表性因子，常被用于自身免疫性疾病的檢測中[17]。TNF-α屬于多肽調(diào)節(jié)的促炎因子，具備廣泛生物活性，通過對內(nèi)皮細胞黏附因子表達以及活化的誘導，促進中性粒細胞趨化。急性期川崎病患兒TNF-α水平過度表達，使得血管炎癥惡化，造成血管壁廣泛損傷[18]。本研究結果顯示，川崎病患兒的IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均顯著提高，并且急性期、亞急性期、恢復期的川崎病患兒IL-6、TNF-α、CRP、IFN-γ、MIF、ESR水平均逐漸下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。與文獻[19-20]研究結論基本一致，可作為鑒別川崎病和感染性發(fā)熱的輔助依據(jù)，也可作為評估川崎病發(fā)展和恢復程度的參考指標。

綜上所述，川崎病患兒T淋巴細胞亞群、炎癥因子指標水平均存在異常，且與其病情的發(fā)展顯著相關，可作為鑒別川崎病輔助依據(jù)，也可作為評估川崎病發(fā)展和恢復程度的參考指標。

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（收稿日期：2021-04-02） （本文編輯：張爽）