平均血小板體積與血小板計數(shù)比值、微小RNA-26b相對表達量、微小RNA-195相對表達量與高血壓性左心室肥厚的關系及其對患者預后的預測價值研究

閆玉敏，王希柱，張振飛，常紹菊，陳榮花，賈洪娟，宋巧鳳

高血壓是臨床常見慢性病，長期高血壓可改變患者心臟及血管功能，因此其是導致靶器官損傷及心腦血管疾病的基礎，其中左心室肥厚是高血壓導致的常見靶器官損傷表現(xiàn)之一，可進一步導致患者出現(xiàn)心力衰竭、急性心肌梗死、腦卒中及猝死等［1-3］。因此，及早診斷并有效防治對高血壓性左心室肥厚患者尤為關鍵。左心室心肌質(zhì)量指數(shù)（left ventricular mass index，LVMI）是衡量心肌肥厚及心臟重構的主要參考指標。微小RNA（microRNA，miRNA）作為一類小的非編碼RNA，可調(diào)節(jié)各種細胞活動包括細胞的增殖、分化、發(fā)育及凋亡，其在基因表達、轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)中具有重要作用，同樣在心肌重構及細胞增殖、分化等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。研究表明，miRNA-26b、miRNA-195與心肌重構密切相關［4］。另有研究表明，高血壓發(fā)病機制復雜，其中血小板在高血壓發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［5］?；诖耍狙芯恐荚诜治銎骄“弩w積（mean platelet volume，MPV）與血小板計數(shù)（platelet count，PLT）比值（MPV/PLT）、miRNA-26b、miRNA-195與高血壓性左心室肥厚的關系，并分析其對患者預后的預測價值，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2017年4月—2019年12月唐山市人民醫(yī)院收治的高血壓性左心室肥厚患者102例。納入標準：（1）符合《中國高血壓防治指南（2010年修訂版）》［6］中的原發(fā)性高血壓病診斷標準；（2）經(jīng)超聲心動圖檢查顯示左心室后壁厚度≥12 mm，符合左心室肥厚的判定標準［7］；（3）左心室射血分數(shù)＞40%。排除標準：（1）繼發(fā)性高血壓者；（2）肥厚型、縮窄型心肌病者；（3）合并糖尿病、先天性心臟病、中重度瓣膜病、冠心病、心力衰竭、惡性腫瘤者；（4）伴有甲狀腺功能亢進或減退者；（5）合并嚴重肝腎功能不全者；（6）正在或已服用降壓藥物者。根據(jù)LVMI將所有患者分為低LVMI（≤110 g/m2）組52例與高LVMI（＞110 g/m2）組50例。本研究經(jīng)唐山市人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核批準，患者對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 通過病案系統(tǒng)收集患者入院時臨床資料，包括性別、年齡、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、空腹血糖、血紅蛋白、三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、診室收縮壓、診室舒張壓、診室脈壓、診室平均動脈壓、24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)舒張壓、24 h動態(tài)脈壓、24 h動態(tài)平均動脈壓、左心室射血分數(shù)、心輸出量、每搏輸出量、左心室心肌質(zhì)量（left ventricular mass，LVM）、LVMI、MPV、PLT等，其中空腹血糖、血紅蛋白、三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、MPV、PLT應用日本SYSMEX公司XE-2100型血細胞分析儀、Beeckman Coulter全自動生化分析儀檢測，診室收縮壓、診室舒張壓、診室脈壓、診室平均動脈壓、24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)舒張壓、24 h動態(tài)脈壓、24 h動態(tài)平均動脈壓應用Meditech ABPM-05無創(chuàng)性攜帶動態(tài)血壓監(jiān)測儀測量，左心室射血分數(shù)、心輸出量、每搏輸出量應用美國PHILIPS EPIQ7C心臟超聲診斷儀檢測。

1.2.2 miRNA-26b、miRNA-195相對表達量檢測 患者均于入院后晨起抽取空腹外周靜脈血5 ml，在4 ℃環(huán)境下3 000 r/min離心處理10 min（離心半徑為15 cm），取血漿并置于無RNA酶的EP管內(nèi)，置于-80 ℃環(huán)境中保存待測；按照TRIZOL試劑盒〔天根生化科技（北京）有限公司提供〕說明書提取血漿總RNA，而后采用0.1% DEPC水溶解，采用Bio-Rad檢測RNA純度、濃度，另取1 μl RNA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測其完整性；采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應進行試驗，反應條件為 95 ℃ 15 min，94 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，70 ℃ 34 s共進行40個循環(huán)；采用2-ΔΔCt方法計算miRNA-26b、miRNA-195相對表達量，ΔCt值=Ct值（目的基因）-Ct值（內(nèi)參基因）。

1.2.3 預后 將患者6個月內(nèi)出現(xiàn)心腦血管事件（包括心絞痛、無癥狀心肌缺血、心功能不全、心律失常、腦血管意外）視為預后不良，未出現(xiàn)則視為預后良好。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以相對數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗；采用多元線性回歸分析探討高血壓性左心室肥厚患者LVMI的影響因素；采用多因素Logistic回歸分析探討高血壓性左心室肥厚患者預后的影響因素；繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）以分析LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量及其聯(lián)合對高血壓性左心室肥厚患者預后的預測價值。雙側檢驗水準為α=0.05。

2 結果

2.1 高LVMI組、低LVMI組患者臨床資料、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量比較 高LVMI組患者24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)脈壓、LVM、miRNA-195相對表達量高于低LVMI組，MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量低于低LVMI組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；兩組患者性別、年齡、BMI、空腹血糖、血紅蛋白、三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、診室收縮壓、診室舒張壓、診室脈壓、診室平均動脈壓、24 h動態(tài)舒張壓、24 h動態(tài)平均動脈壓、左心室射血分數(shù)、心輸出量、每搏輸出量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組患者臨床資料、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量比較Table 1 Comparison of clinical data and relative expression levels of miRNA-26b，miRNA-195 between the two groups

2.2 高血壓性左心室肥厚患者LVMI的影響因素分析將表1中有統(tǒng)計學差異的指標作為自變量（賦值均為實測值），高血壓性左心室肥厚患者LVMI（賦值：實測值）作為因變量，進行多元線性回歸分析，結果顯示：24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)脈壓、LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量是高血壓性左心室肥厚患者LVMI的獨立影響因素（P＜0.05），見表2。

表2 高血壓性左心室肥厚患者LVMI相關因素的多元線性回歸分析Table 2 Multiple linear regression analysis on related factors of LVMI in patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

2.3 高LVMI組、低LVMI組患者預后比較 高LVMI組患者中預后良好33例（66.0%），預后不良17例（34.0%）；低LVMI組患者中預后良好44例（84.6%），預后不良8例（15.4%）。高LVMI組患者預后良好發(fā)生率低于低LVMI組，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.774，P=0.029）。

2.4 不同預后的高血壓性左心室肥厚患者的臨床資料、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量比較 預后不良的高血壓性左心室肥厚患者24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)脈壓、LVM、LVMI、miRNA-195相對表達量高于預后良好者，MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量低于預后良好者，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；不同預后的高血壓性左心室肥厚患者性別、年齡、BMI、空腹血糖、血紅蛋白、三酰甘油、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、診室收縮壓、診室舒張壓、診室脈壓、診室平均動脈壓、24 h動態(tài)舒張壓、24 h動態(tài)平均動脈壓、左心室射血分數(shù)、心輸出量、每搏輸出量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表3。

表3 不同預后的高血壓性左心室肥厚患者臨床資料、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量比較Table 3 Comparison of clinical data and relative expression levels of miRNA-26b，miRNA-195 of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy in different prognosis

2.5 高血壓性左心室肥厚患者預后的影響因素分析將表3中有統(tǒng)計學差異的指標作為自變量（賦值均為實測值），高血壓性左心室肥厚患者預后作為因變量（賦值：良好=0，不良=1），進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示，24 h動態(tài)收縮壓、24 h動態(tài)脈壓、LVM、LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量及miRNA-195相對表達量是高血壓性左心室肥厚患者預后的獨立影響因素（P＜0.05），見表4。

表4 高血壓性左心室肥厚患者預后影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multiple Logistic regression analysis of influencing factors of prognosis in patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

2.6 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量及其聯(lián)合對高血壓性左心室肥厚患者預后的預測價值 ROC曲線分析結果顯示，LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量聯(lián)合預測高血壓性左心室肥厚患者預后的曲線下面積（AUC）大于各指標單獨預測，差異均有統(tǒng)計學意義（Z值分別為6.303、4.469、6.675、3.670，P值均＜0.001），見表5、圖1。

表5 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量及其聯(lián)合對高血壓性左心室肥厚患者預后的預測價值Table 5 Predictive value of LVMI，MPV/PLT，miRNA-26b relative expression level，miRNA-195 relative expression level and their combination on the prognosis of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

圖1 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量及其聯(lián)合預測高血壓性左心室肥厚患者預后的ROC曲線Figure 1 ROC curve of LVMI，MPV/PLT，miRNA-26b relative expression level，miRNA-195 relative expression level and their combination in predicting the prognosis of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

3 討論

高血壓是多種心血管疾病的危險因素，長期血壓控制不佳者心肌細胞在高壓力負荷刺激下可出現(xiàn)肥厚性生長應答，主要表現(xiàn)為心肌細胞肥大、心肌纖維化及胞質(zhì)蛋白合成等，進而導致心臟結構及功能改變，引發(fā)左心室肥厚［8］。左心室肥厚作為一種因高血壓引發(fā)的常見亞臨床臟器損傷，可一定程度增加心血管疾病發(fā)生率及病死率［9］。據(jù)調(diào)查，20%～40%的高血壓患者并發(fā)左心室肥厚［10］。因此，及時掌握患者左心室肥厚程度并調(diào)整臨床治療方案對改善高血壓性左心室肥厚患者預后具有積極意義。

研究指出，高血壓患者MPV、PLT、P選擇素等血小板活性指標均明顯升高［11-12］，其中MPV、PLT獲取簡單。LVMI是判斷左心室重構、左心室肥厚程度的重要指標。本研究結果顯示，高LVMI組患者MPV/PLT低于低LVMI組，提示高LVMI的高血壓性左心室肥厚患者血小板功能較差。本研究ROC曲線分析結果顯示，LVMI預測高血壓性左心室肥厚患者預后的AUC為0.832，可見LVMI對高血壓性左心室肥厚患者預后具有一定的預測價值。MPV是反映血小板功能的有效指標，與炎性反應及血栓形成關系密切，MPV越大則血小板聚集功能越好。有研究表明，機體在重度炎癥狀態(tài)下，MPV越大、越具活性，則其消耗量越大［13］。PLT可反映機體血液循環(huán)中血小板數(shù)量，PLT越高則血漿可溶性CD40L分泌、釋放越多，進而促進炎性反應及血栓形成［14］。由此推測，高血壓性左心室肥厚患者MPV/PLT降低可能與炎性反應有關。本研究結果顯示，MPV/PLT是高血壓性左心室肥厚患者LVMI的獨立影響因素，且其預測高血壓性左心室肥厚患者預后的AUC為0.745，靈敏度為80.00%，可見MPV/PLT可作為預測高血壓性左心室肥厚及患者預后的潛在指標。

miRNA作為一類具有高度保守性的非編碼小RNA分子，對生物體基因表達具有精準的調(diào)控作用。目前，miRNA在循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)及消化系統(tǒng)疾病中取得極大的研究進展，且已成為心血管領域的研究熱點。研究表明，miRNA在心血管疾病生理、病理過程中具有重要的調(diào)節(jié)作用，并參與心臟發(fā)育、冠狀動脈病變、心律失常及心室重構等過程［15］，還參與了心室肥厚的發(fā)生、發(fā)展［16］。多項動物實驗結果表明，miRNA-26b與心室肥厚密切相關，并參與了心室肥厚及重構過程［17-18］。馮崴等［19］研究顯示，miRNA-26b相對表達量診斷老年高血壓患者左心室肥厚的AUC為0.836，且二者呈負相關，推測miRNA-26b可作為潛在生物標志物用于老年高血壓患者左心室肥厚的診斷。基于此，本研究分析miRNA-26b相對表達量與高血壓性左心室肥厚的關系，結果顯示：miRNA-26b相對表達量是高血壓性左心室肥厚患者LVMI的影響因素，推測原因為：高血壓性左心室肥厚患者miRNA-26b相對表達量較低，更利于其心肌細胞增殖并出現(xiàn)代償性肥大，且心肌間質(zhì)膠原也可隨之增加，進而導致心肌纖維化，致使肥厚心肌出現(xiàn)功能及生物反應異常，最終造成心臟舒張功能進行性下降，加重病情，不利于患者預后。本研究結果顯示，miRNA-26b相對表達量預測高血壓性左心室肥厚患者預后的AUC為0.796，靈敏度高達98.70%，可見miRNA-26b相對表達可作為預測高血壓性左心室肥厚患者預后的重要指標?？妆氲龋?0］研究表明，miRNA-195在糖尿病心肌病乳鼠心肌細胞肥大中發(fā)揮著重要作用。另有研究表明，miRNA-195可誘導小鼠心臟病理性增大，且與心肌重構關系密切［21］。王文峰等［22］發(fā)現(xiàn)，自發(fā)性高血壓大鼠心臟miRNA-195相對表達量明顯升高，甚至是血壓正常大鼠的4倍，提示miRNA-195相對表達量可能與血壓有關。本研究結果顯示，高LVMI組患者miRNA-195相對表達量高于低LVMI組，且miRNA-195相對表達量是高血壓性左心室肥厚患者LVMI的獨立影響因素，與曾伏虎等［23］研究結果一致，提示miRNA-195相對表達量與高血壓性左心室肥厚相關，可作為診斷高血壓性左心室肥厚的生物標志物。此外，本研究結果還顯示，miRNA-195相對表達量預測高血壓性左心室肥厚患者預后的AUC為0.719，靈敏度為68.00%，特異度為71.43%，提示miRNA-195相對表達量可作為預測高血壓性左心室肥厚患者預后的潛在標志物。此外，本研究結果還顯示，LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量聯(lián)合預測高血壓性左心室肥厚患者預后的AUC大于各指標單獨預測，可見各指標聯(lián)合對高血壓性左心室肥厚患者預后的預測價值更高。

綜上所述，LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量是高血壓性左心室肥厚的獨立影響因素，且LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相對表達量、miRNA-195相對表達量聯(lián)合對高血壓性左心室肥厚患者預后具有較高的預測價值。但本研究納入樣本量較少，結果可能存在一定偏倚，后續(xù)還需納入更多樣本量進一步研究證實結論。

作者貢獻：閆玉敏進行文章的構思與設計，負責文章的質(zhì)量控制及審校；王希柱進行研究的實施與可行性分析；張振飛進行數(shù)據(jù)收集、整理、分析；常紹菊進行結果分析與解釋；閆玉敏、陳榮花撰寫論文；賈洪娟進行論文的修訂；宋巧鳳對文章整體負責、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。