甲基異噻唑啉酮在健康人群和化妝品接觸性皮炎患者中引起皮膚反應(yīng)的限量研究

馬黎，程英，周宏，徐雅菲，談益妹，鄒穎

（上海市皮膚病醫(yī)院，上海 200443）

防腐劑作為化妝品中不可缺少的組分之一，可以保護(hù)產(chǎn)品在使用過程中免受微生物污染，延長產(chǎn)品保質(zhì)期。隨著化妝品消費(fèi)的提升，其引發(fā)不良反應(yīng)問題也日益凸顯。近年來在我國與國外的化妝品上市后不良反應(yīng)監(jiān)測中，防腐劑是導(dǎo)致化妝品過敏性接觸性皮炎的第二大原因[1-2]。因此化妝品中防腐劑的種類和限量對化妝品的安全性至關(guān)重要。近年來全球各國進(jìn)行的化妝品不良反應(yīng)以及臨床研究中發(fā)現(xiàn)，使用含異噻唑啉酮類的化妝品和接觸性皮炎有一定關(guān)聯(lián)，各國化妝品法規(guī)對甲基異噻唑啉酮（Methylisothiazolinone，MI）的限量標(biāo)準(zhǔn)和適用范圍都進(jìn)行了修改，甚至禁止使用某些種類[3-4]。為了研究MI在中國健康人群和化妝品接觸性皮炎患者中引起皮膚不良反應(yīng)的限量閾值，本項(xiàng)目旨在通過人體皮膚斑貼試驗(yàn)，檢測MI在不同濃度下發(fā)生接觸性致敏的嚴(yán)重程度及比例，從而為我國化妝品安全技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)提供翔實(shí)的研究基礎(chǔ)與指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究對象 本次項(xiàng)目共招募并測試完成健康受試者124例，其中男43例，女81例，年齡18～60歲，平均（48.88±9.82）歲。共招募并測試完成化妝品接觸性皮炎患者98例，其中男6例，女92例，年齡 18～69 歲，平均（37.68±12.06）歲。所有受試者在參加試驗(yàn)前均充分知曉整個(gè)測試過程，自愿簽署知情同意書。

1.1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 健康志愿者組：受試者身體健康，沒有任何化妝品過敏史；化妝品接觸性皮炎患者組：被診斷為化妝品接觸性皮炎。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①處于懷孕期、哺乳期；②在皮膚待試部位有由于瘢痕、色素、萎縮、鮮紅斑痣或其他瑕疵而影響試驗(yàn)結(jié)果的判定者；③正在使用可能影響測試結(jié)果判定的藥物者。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)材料 MI購置于瑞典（Chemotechnique MB Diagnostics AB公司，貨號(hào) M-035B），濃度為0.2%水溶液，使用雙蒸水按梯度稀釋，分別配置了0.02%，0.01%和0.001%3個(gè)濃度。采用蒸餾水作為陰性對照。

1.2.2 試驗(yàn)方法 在溫濕度控制的房間內(nèi)（溫度18～26℃，相對濕度＜70%）進(jìn)行試驗(yàn)。將準(zhǔn)備好的變應(yīng)原使用移液器取0.02 mL加入事先放置濾紙的斑試器內(nèi)，用低致敏膠帶貼敷于受試者的背部肩胛骨下、脊柱中央外雙側(cè)，24 h或48 h后去除斑試器并標(biāo)記，0.5 h（待壓痕消失后）、24 h和48 h根據(jù)國際接觸性皮炎研究組（ICDRG）推薦的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS Statistics 20進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。皮膚不良反應(yīng)發(fā)生率的比較使用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度MI在健康受試者中引起的皮膚反應(yīng) 為了研究不同濃度MI對健康人群皮膚的反應(yīng)，筆者使用0.2%，0.02%，0.01%和0.001%4個(gè)濃度梯度，在124例健康志愿者中進(jìn)行了封閉型人體皮膚斑貼試驗(yàn)。受試者在不同時(shí)間點(diǎn)對不同濃度MI的皮膚不良反應(yīng)評(píng)分詳見表1。其中，0.2%MI在斑貼試驗(yàn)后的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)發(fā)生的可疑陽性反應(yīng)（±）和弱陽性反應(yīng)（+）均顯著多于其他3組。所有受試者中沒有發(fā)生強(qiáng)陽性（++）、極強(qiáng)陽性（+++）皮膚不良反應(yīng)。

表1 不同濃度MI在健康受試者中引起的皮膚反應(yīng) 例

比較4種濃度的MI在斑貼試驗(yàn)72 h后引起的皮膚不良反應(yīng)，結(jié)果顯示：0.2%MI、0.02%MI和0.01%MI引起的皮膚不良反應(yīng)發(fā)生例數(shù)分別為7例、3例和2例，發(fā)生率分別為5.65%、2.42%和1.61%，與0.001%MI以及蒸餾水對照相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖1。

圖1 不同濃度MI在健康受試者中引起的各級(jí)皮膚反應(yīng)發(fā)生率

2.2 不同濃度MI在化妝品接觸性皮炎患者中引起的皮膚反應(yīng) 筆者分別使用不同濃度的MI在98例化妝品接觸性皮炎患者中進(jìn)行了封閉型人體皮膚斑貼試驗(yàn)，患者在不同時(shí)間點(diǎn)對不同濃度MI的皮膚反應(yīng)評(píng)分詳見表2。其中0.2%MI、0.02%MI和0.01%MI在斑貼試驗(yàn)后的3個(gè)時(shí)間點(diǎn)各級(jí)陽性反應(yīng)均顯著多于0.001%MI。其中0.2%MI和0.02%MI在斑貼試驗(yàn)后出現(xiàn)了超強(qiáng)陽性反應(yīng)（+++）。

表2 不同濃度MI在化妝品接觸性皮炎患者中引起的皮膚反應(yīng) 例

筆者接下來比較了4種濃度的MI在斑貼試驗(yàn)去除48 h后引起的皮膚不良反應(yīng)例數(shù)和發(fā)生率。結(jié)果顯示，0.2%MI，0.02%MI和 0.01%MI引起的皮膚不良反應(yīng)的例數(shù)分別為44例，37例和33例，發(fā)生率分別為44.90%，37.76%和33.67%，與0.001%MI以及蒸餾水對照相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4種濃度的MI引起的皮膚反應(yīng)發(fā)生率呈劑量依賴遞增，見圖2。

圖2 不同濃度MI在化妝品接觸性皮炎患者中引起的各級(jí)皮膚不良反應(yīng)發(fā)生率

3 討論

單獨(dú)使用MI是近年來較新應(yīng)用的化妝品防腐劑，但已位列第4種最易引起接觸致敏的化妝品防腐劑[5]。世界各國化妝品法規(guī)都將MI收錄在防腐劑目錄中，但均對其限量進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)定?；贛I的易接觸致敏性，本研究旨在通過梯度稀釋4種濃度的MI，分別在健康人群和化妝品接觸性皮炎患者中進(jìn)行人體斑貼試驗(yàn)，研究MI的安全限量。

目前我國《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版）中規(guī)定，MI在駐留類產(chǎn)品和淋洗類產(chǎn)品中的添加量均不得超過0.01%。這和澳大利亞、加拿大、東盟等國的要求是一致的。而歐盟法規(guī)EC1223/2009 Annex V補(bǔ)充修訂案中規(guī)定，駐留類產(chǎn)品中不得添加MI，淋洗類產(chǎn)品中添加量不得超過0.001 5%[6]。因此在本研究中，筆者針對我國與歐盟法規(guī)的差異，在中國人群中選擇使用封閉型人體皮膚斑貼試驗(yàn)，來模擬MI在駐留類化妝品中對皮膚的影響。在受試物貼敷的時(shí)間上，筆者分別在健康志愿者和化妝品接觸性皮炎患者中使用了24 h和48 h。根據(jù)以往研究顯示，受試物貼敷24 h已經(jīng)可以判斷其是否致敏，但在化妝品接觸性皮炎患者中進(jìn)行診斷性斑貼試驗(yàn)時(shí)，使用48 h的貼敷時(shí)間會(huì)更加有利于判斷過敏原[7]。

在本研究中，共選擇使用了4種濃度梯度的MI，分別為0.2%，0.02%，0.01%和0.001%。在健康人群和化妝品接觸性皮炎患者斑貼試驗(yàn)結(jié)果中，引起皮膚不良反應(yīng)的最低濃度均為0.01%。在化妝品接觸性皮炎患者中，MI的陽性率較高，并且0.2%，0.02%和0.01%MI所引起的2分皮膚反應(yīng)發(fā)生率呈劑量依賴性遞增，提示MI的致敏性隨濃度升高而增強(qiáng)。而0.001%MI在健康人群和化妝品接觸性皮炎患者中均未發(fā)生皮膚反應(yīng)。丹麥有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)MI接觸致敏患者在斑貼試驗(yàn)中對MI產(chǎn)生反應(yīng)的最低劑量為0.004 9%（49百萬分比濃度，49 ppm）[8]。而5 ppm MI與0.4%苯氧乙醇聯(lián)合使用時(shí)就足以作為化妝品防腐劑使用[9]。因此，10 ppm MI可以作為既能夠達(dá)到防腐效果又較為安全的濃度。

綜上所述，本研究通過在健康人群和化妝品接觸性皮炎患者中的人體皮膚斑貼試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，我國現(xiàn)行法規(guī)中MI的限量濃度0.01%MI，在駐留類化妝品中較易引起皮膚不良反應(yīng)，而0.001%MI的劑量較為安全?；诒狙芯拷Y(jié)果，筆者建議降低目前化妝品法規(guī)中MI的限量，從而保證和提高化妝品的安全性。