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    口蹄疫病毒O型抗體檢測注意事項及結(jié)果分析

    2021-03-05 01:34:35呂寶珍
    畜牧業(yè)環(huán)境 2021年2期
    關(guān)鍵詞:吸水紙洗滌液移液器

    呂寶珍

    (洛南縣動物疫病預(yù)防控制中心,陜西洛南 726100)

    1 樣品來源

    該實驗樣品來自于全縣16個鎮(zhèn),隨機(jī)抽取生豬養(yǎng)殖場20個,每場采集血清樣品15份;零散養(yǎng)殖戶隨機(jī)抽取16戶,每戶采集血清樣品5份,共計380份。

    2 實驗儀器

    量筒、燒杯、離心管架、超純水機(jī)、電熱恒溫箱、洗板機(jī)、酶標(biāo)分析儀、移液槍頭、單道移液器、多道移液器、離心管、一次性洗液皿、一次性吸水紙。

    3 洗滌液配制

    用量筒取900ml蒸溜水或去離子水與100ml洗滌液混合(洗滌液是濃縮洗液,需要稀釋),充分混勻即為工作濃度洗滌液。

    4 具體實驗步驟

    4.1 實驗前的準(zhǔn)備工作

    將阻斷ELISA抗體檢測試劑盒和待檢血清從冷藏和冷凍箱中取出,將待檢血清豎行排列于離心管架上,并做好編碼,等試劑和血清樣品溫度恢復(fù)到室溫20℃~25℃,在進(jìn)行實驗。

    4.2 操作步驟

    4.2.1 加樣

    (1)預(yù)先取出包被板,取出樣品稀釋液,在每孔加入樣品稀釋液50 μl。

    (2)再用10 μl的移液器添加50μl待檢樣品。

    (3)在包被板最后加入50μl陰性和陽性對照品各2孔,蓋膜,避光在37℃反應(yīng)60min。

    4.2.2 洗板

    60min時間到取包被板,揭掉封板膜,倒掉孔內(nèi)液體,用預(yù)先配制好的洗滌液洗滌3次,每次停留1min;最后一次倒干凈后,用吸水紙將包被板內(nèi)液體拍干。

    4.2.3 檢測

    (1)在包被板中加酶標(biāo)結(jié)合物(1號液)100μl,蓋膜,避光在37℃反應(yīng)60min。60min時間到后取出包被板,揭膜,倒掉孔內(nèi)液體,用預(yù)先配制好的洗滌液洗滌3次,每次停留1min;最后一次倒干凈后,用吸水紙將包被板內(nèi)液體拍干。

    (2)按所需要用量,臨用前用單道移液器取等體積底物液(3號液)和顯色液(4號液)充分混勻,每孔加入100μl,蓋膜,避光37℃反應(yīng)15min。

    (3)15min時間到后取出反應(yīng)后的酶標(biāo)板,每孔用多道移液器加入終止液(6號液)50μl。用酶標(biāo)儀讀取OD值。

    5 結(jié)果判定

    (1)有效判定:當(dāng)陰性對照孔OD值≥0.5(若小于0.5則實驗無效),當(dāng)陽性對照孔IP值≥60%(若小于60%則實驗無效)。

    (2)檢驗結(jié)果:樣品PI≥50%時,判定為口蹄疫病毒抗體陽性;樣品PI<50%時,判定為口蹄疫病毒抗體陰性。

    6 注意事項

    (1)洗滌液的配置必須用蒸溜水或去離子水稀釋,避免水質(zhì)不符合要求,影響實驗結(jié)果的判定。

    (2)實驗前所用的試劑盒和畜種血清樣品都應(yīng)恢復(fù)至室溫時再開始做實驗。

    (3)洗滌液的配置應(yīng)比實際需要量多配置一些,避免因試劑在各個器具上的殘留而導(dǎo)致的洗滌液的不足,需臨時加配延誤時間使反應(yīng)時間不同步,影響實驗結(jié)果。同時還應(yīng)注意洗板機(jī)的注水口注水是否通暢、吸水口吸水是否通暢,確保反應(yīng)板每孔必需注滿洗滌液洗滌干凈。

    (4)添加酶標(biāo)結(jié)合物時,槍頭不要碰包被板孔內(nèi)壁和外壁。

    (5)做實驗時應(yīng)做好個人防護(hù),穿好防護(hù)服、佩戴好防護(hù)帽、手套和口罩,實驗中試劑使用結(jié)束后應(yīng)立即將試劑瓶蓋緊,防止剩余試劑被污染,影響后續(xù)的檢測;實驗結(jié)束廢棄物由醫(yī)療廢棄物處理機(jī)構(gòu)統(tǒng)一處理,不可以隨意丟棄,以免造成環(huán)境的污染。

    7 結(jié)果分析

    全縣有16個鄉(xiāng)鎮(zhèn),244個行政村,隨機(jī)抽取生豬養(yǎng)殖場20個,每場采集血清樣品15份;零散養(yǎng)殖戶隨機(jī)抽取16戶,每戶采集血清樣品5份,共計380份,合格340份、合格率89%??傮w來看我縣生畜口蹄疫病毒O型的免疫抗體水平較高,確保了我縣常年處于疫苗保護(hù)狀態(tài),有效預(yù)防控制了動物疫病的發(fā)生流行,確保了全縣全年動物疫情的穩(wěn)定控制態(tài)勢。

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