ANA細胞質(zhì)熒光模式在ANCA相關(guān)血管炎中的臨床意義

張乃丹，劉利洪，鄒雨沙，李白露，楊 浩，唐 靈，彭美君，張雪文，袁成良△

1.德陽市人民醫(yī)院檢驗科,四川德陽 618000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)檢驗系,四川成都 610072；3.川北醫(yī)學(xué)院檢驗系，四川南充 637100

抗中性粒細胞細胞質(zhì)抗體(ANCA)相關(guān)血管炎(AAV)根據(jù)臨床表現(xiàn)和病理特征，主要分為顯微鏡下多血管炎(MPA)、肉芽腫性多血管炎(GPA)和嗜酸性肉芽腫性多血管炎(EGPA)[1]。AAV患者體內(nèi)可出現(xiàn)多種自身抗體，以Hep-2細胞為抗原基質(zhì)的間接免疫熒光法(IIF)是用于抗核抗體(ANA)檢測的方法；相較于ANA細胞核熒光模式，ANA細胞質(zhì)熒光模式的相關(guān)報道較少。本研究探討了ANA細胞質(zhì)熒光模式與AAV患者臨床表現(xiàn)和相關(guān)實驗室檢查結(jié)果的關(guān)系，以及與ANCA不同熒光模式的對應(yīng)關(guān)系，旨在為AAV的診斷和預(yù)后判斷提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2009年12月至2019年12月于德陽市人民醫(yī)院就診的AAV確診患者共232例納入研究，納入研究者均同時進行了IIF-ANCA和IIF-ANA檢測，根據(jù)檢測結(jié)果分為ANA細胞質(zhì)熒光模式組和對照組，分組標(biāo)準(zhǔn)參考文獻[2-4]。ANA細胞質(zhì)熒光模式組：IIF-ANA檢測為細胞質(zhì)熒光模式，或IIF-ANA檢測為混合型，但以細胞質(zhì)熒光模式為主；對照組：IIF-ANA檢測為細胞質(zhì)陰性，或IIF-ANA檢測為混合型，但其中不包括細胞質(zhì)熒光模式。ANA細胞質(zhì)熒光模式組115例，男22例、女93例，平均年齡(54.85±16.83)歲；對照組117例，男73例、女44例，平均年齡(55.03±19.28)歲。兩組間性別構(gòu)成比比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

1.2方法 IIF-ANCA和IIF-ANA的檢測采用歐盟公司的試劑盒，使用的顯微鏡為奧林巴斯公司BX51型顯微鏡?？顾柽^氧化物酶抗體(anti-MPO)、抗蛋白酶3抗體(anti-PR3)、抗心磷脂抗體(ACA)的檢測采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光儀(江蘇浩歐博生物醫(yī)藥股份有限公司)；補體C3和C4的檢測采用西門子BN-Ⅱ全自動蛋白分析儀。血常規(guī)檢測采用希森美康公司XE-5000型血液學(xué)分析儀；凝血檢測采用希森美康公司CA-7000型分析儀；常規(guī)生化指標(biāo)檢測采用西門子ADVIA-2400型生化分析儀；試劑均采用儀器配套試劑。

2 結(jié) 果

2.1納入研究者基本特征比較 ANA細胞質(zhì)熒光模式組男性比例明顯低于對照組(P<0.05)。ANA細胞質(zhì)熒光模式組胸部受累比例明顯高于對照組(P<0.05)，心血管受累比例明顯低于對照組(P<0.05)。年齡、首發(fā)癥狀至確診時間、伯明翰血管炎活性評分(BVAS)及其余系統(tǒng)/部位受累情況兩組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組間繼發(fā)性血管炎的比例及引起繼發(fā)性血管炎的主要疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征)所占比例比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 研究對象的臨床特征

續(xù)表1 研究對象的臨床特征

2.2ANA細胞質(zhì)熒光模式組和對照組臨床常規(guī)檢測指標(biāo)的比較 ANA細胞質(zhì)熒光模式組總蛋白(TP)、三酰甘油(TG)水平和平均紅細胞體積(MCV)高于對照組(P<0.05)；ANA細胞質(zhì)熒光模式組血肌酐、白細胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)水平低于對照組(P<0.05)；兩組間其余臨床常規(guī)檢測指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3ANA細胞質(zhì)熒光模式組和對照組自身抗體及補體水平的比較 ANA細胞質(zhì)熒光模式組ACA、補體C4水平均高于對照組(P<0.05)，anti-MPO、anti-PR3和補體C3水平均低于對照組(P<0.05)，見表3。

2.4ANA細胞質(zhì)熒光模式組中血肌酐水平的影響因素分析 采用多元線性回歸進一步分析兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義的臨床常規(guī)檢測指標(biāo)對ANA細胞質(zhì)熒光模式組患者血肌酐水平的影響。因變量為血肌酐，預(yù)測變量為TP、TG、WBC、MCV、PLT、anti-MPO、C3和C4，多因素方差分析顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=4.171，P<0.05)。線性回歸分析顯示，自變量anti-MPO對應(yīng)的P<0.001，表明anti-MPO對ANA細胞質(zhì)熒光模式組患者血肌酐水平的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表4。

2.5ANA細胞質(zhì)熒光模式與不同ANCA熒光模式的對應(yīng)關(guān)系分析 不同ANCA熒光模式組中ANA細胞質(zhì)顆粒型所占比例比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進一步做兩兩比較，核周型ANCA(pANCA)組和非典型ANCA(xANCA)組ANA細胞質(zhì)顆粒型所占比例明顯高于胞質(zhì)型ANCA(cANCA)組(P<0.017)；而pANCA和xANCA組之間ANA細胞質(zhì)顆粒型所占比例比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.017)。見表5。

表5 ANCA熒光模式與5種ANA細胞質(zhì)熒光模式的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

AAV患者體內(nèi)可出現(xiàn)多種自身抗體，且大多數(shù)患者伴有不同程度的腎臟受損[5-6]。2012年的Chapel Hill會議將ANCA作為對AAV具有診斷意義的血清學(xué)標(biāo)志物[7]。有專家共識明確指出，ANCA熒光模式分為必報模式(包括cANCA、pANCA)和選報模式(xANCA)[3]。ANA作為目前臨床應(yīng)用最廣泛的一組自身抗體，對于自身免疫性疾病(AID)的篩查具有重要意義?！犊购丝贵w檢測的臨床應(yīng)用專家共識》[4]明確指出，ANA細胞質(zhì)熒光模式中，必報模式包括纖維型、顆粒型、網(wǎng)狀/線粒體型、極性/高爾基體型和棒環(huán)狀型[4]。

目前關(guān)于IIF-ANA細胞質(zhì)熒光模式的研究主要圍繞AID進行，并且研究較為明確的熒光模式主要為抗線粒體抗體、抗高爾基體抗體及抗棒環(huán)狀型，關(guān)于其余必報熒光模式的臨床意義暫不明確[8-10]。有文獻報道,抗細胞質(zhì)熒光模式出現(xiàn)在未分化結(jié)締組織病(UCTD)相關(guān)間質(zhì)性肺病(ILD)患者,但并沒有觀察到與高分辨率計算機斷層攝影術(shù)(HRCT)的檢查結(jié)果具有相關(guān)性[11]。在抗合成酶抗體綜合征疑似患者的臨床篩查中，抗細胞質(zhì)自身抗體和抗Jo-1抗體的檢測組合顯示出較高的靈敏度(92%)和特異度(89%)[12]。在老年組(60～76歲)健康體檢人群中，IIF-ANA檢測為細胞質(zhì)熒光模式的占總陽性例數(shù)的35.71%，僅次于IIF-ANA細胞核斑點型(42.85%)，提示該模式的出現(xiàn)可能與患者年齡相關(guān)[13]。另有研究證實，抗線粒體抗體與特發(fā)性炎性肌病[14]及系統(tǒng)性紅斑狼瘡中循環(huán)自身抗原有關(guān)[15]?？垢郀柣w抗體則易出現(xiàn)在AID、病毒感染及神經(jīng)系統(tǒng)等疾病中[16-18]。抗棒環(huán)狀型則主要出現(xiàn)在感染丙型肝炎病毒并接受干擾素/利巴韋林治療的患者中[19-22]。本研究顯示，IIF-ANA細胞質(zhì)陽性者在IIF-ANCA篩查陽性患者中的比例為17.29%，提示ANA細胞質(zhì)熒光模式的出現(xiàn)與AAV可能存在一定關(guān)聯(lián)，但是ANA是否參與AAV發(fā)病以及在其中的具體作用目前尚不清楚。用BVAS評價AAV活動性，ANA細胞質(zhì)熒光模式組與對照組得分無明顯差異，但在臨床癥狀方面，ANA細胞質(zhì)熒光模式組患者的胸部受累(例如肺部結(jié)節(jié)/纖維化、胸膜炎、咯血)情況多于對照組，而心血管受累(例如心包炎、新近心肌梗死、慢性心力衰竭)情況少于對照組，提示IIF-ANA細胞質(zhì)陽性對于AAV患者肺部損傷和心臟損傷的鑒別診斷及預(yù)后判斷可能有一定價值[23-24]。

本研究顯示，與對照組AAV患者相比，ANA細胞質(zhì)熒光模式組患者的血肌酐和anti-MPO水平更低，提示IIF-ANA細胞質(zhì)陽性的AAV患者腎臟損傷程度更輕，線性回歸分析顯示，anti-MPO與血肌酐呈正相關(guān)，提示篩查ANA細胞質(zhì)熒光模式對于AAV患者腎損傷的輔助判斷有一定意義。而關(guān)于ANA在細胞質(zhì)中如何參與AAV患者腎損傷過程的機制還需要進一步研究，AAV患者的免疫細胞如何參與細胞質(zhì)ANA生成的調(diào)控也還需要進一步通過動物模式來進行研究。

本研究中，IIF-ANA細胞質(zhì)網(wǎng)狀/線粒體型在不同ANCA熒光模式的患者中均未檢出，而其余4種必報模式均有不同程度的檢出率，其中IIF-ANA細胞質(zhì)顆粒型易出現(xiàn)在pANCA組和xANCA組，而在cANCA組檢出率較低，細胞質(zhì)顆粒型是否可以成為ANCA熒光模式的預(yù)測指標(biāo)，目前暫時沒有文獻報道。由于IIF-ANA檢測可以在自身免疫性疾病出現(xiàn)臨床癥狀和病理損傷之前出現(xiàn)陽性，IIF-ANA細胞質(zhì)顆粒型的檢出對臨床無癥狀的早期AAV患者可能具有提示作用。

綜上所述，ANA細胞質(zhì)熒光模式與AAV患者的部分臨床表現(xiàn)和實驗室常規(guī)檢測指標(biāo)水平有一定關(guān)系。AAV患者IIF-ANA細胞質(zhì)熒光模式可以為臨床醫(yī)師提供更多有價值的信息，有助于AAV的診斷和預(yù)后判斷。