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    胃癌患者外周血miR-93和miR-185的表達水平及意義

    2021-03-05 04:23:36周穎禎
    國際消化病雜志 2021年1期
    關(guān)鍵詞:胃癌水平研究

    周穎禎 張 皓

    在中國,胃癌具有較高的發(fā)病率和病死率,屬于常見的消化道惡性腫瘤,由于進展期胃癌具有較高的轉(zhuǎn)移率和較快的增殖速度,患者確診時多已進入晚期,5年生存率為20%~30%[1]。現(xiàn)階段臨床上主要通過TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤組織學類型等臨床病理學特征對胃癌進行術(shù)前診斷和預后判斷,但敏感度相對較低。近年來有研究提示,微RNA(miRNA)在消化系統(tǒng)惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[2]。miR-93和miR-185均是重要的miRNA,已被證實可參與多種腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程[3-4],但目前其在胃癌患者中的相關(guān)報道較少。本研究探討了胃癌患者外周血miR-93、miR-185的表達水平及臨床意義,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2017年1月至2019年3月蘇州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院收治的65例胃癌患者作為觀察組,其中男性37例,女性28例;年齡為33~71歲,平均年齡為(51.01±8.82)歲。納入標準:(1)均經(jīng)病理學確診;(2)初治患者;(3)臨床病理學資料完整;(4)年齡>18歲;(5)患者及家屬知情同意。排除標準:(1)入組前已接受放射、化學治療等抗腫瘤治療;(2)合并有其他系統(tǒng)的惡性腫瘤;(3)合并有免疫系統(tǒng)疾病。另選取同期在本院體檢的65位健康志愿者作為對照組,其中男性35例,女性30例;年齡為35~71歲,平均年齡為(50.02±9.22)歲。觀察組與對照組在年齡、性別方面比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2 實驗方法

    采用實時熒光定量PCR(real-time PCR)法檢測兩組外周血miR-93、miR-185的表達水平。觀察組在入院治療前進行第1次采血,經(jīng)手術(shù)及放射、化學治療后,3個月后由相同醫(yī)師再進行采血檢驗。采集受試者清晨空腹時的肘部靜脈血10 mL,加入TRIzol試劑1 mL后經(jīng)氯仿抽提,加入異丙醇沉淀后獲得總RNA,采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)兩步法將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA后進行擴增,Poly(A)修飾的miRNA進行反轉(zhuǎn)錄反應,具體如下:94 ℃ 2 min預變性,之后94 ℃ 20 s,60 ℃ 34 s退火、延伸,循環(huán)40次。采用RT-PCR相對定量法,以U6為內(nèi)參,采用2-△△Ct表示胃癌miR-93、miR-185的相對表達量?!鳌鰿t=(CtmiRNA-CtU6)觀察組-(CtmiRNA-CtU6)對照組。引物序列見表1。

    表1 引物序列

    1.3 統(tǒng)計學處理

    2 結(jié)果

    2.1 兩組外周血miR-93、miR-185的表達水平比較

    觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于對照組,差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。見表2。

    表2 兩組外周血miR-93、miR-185的相對表達量比較

    2.2 外周血miR-93、miR-185與胃癌患者臨床病理學特征的關(guān)系

    由表3可知,腫瘤直徑≥5 cm、臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,其外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于腫瘤直徑<5 cm、臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者,差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。

    表3 胃癌患者外周血miR-93、miR-185的相對表達量與臨床病理學特征的關(guān)系

    2.3 相關(guān)性分析

    對治療前觀察組外周血miR-93與miR-185的表達水平進行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示兩者的相對表達量呈正相關(guān)(r=0.332,P<0.05)。

    2.4 治療前后觀察組外周血miR-93、miR-185的表達水平比較

    與治療前相比,治療后觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

    表4 治療前后觀察組外周血miR-93、miR-185的相對表達量比較

    3 討論

    胃癌是中國常見的消化道惡性腫瘤,發(fā)病率和病死率均較高[5]。手術(shù)切除是目前臨床治療早期胃癌的主要方法,具有一定的效果,但胃癌患者確診時多處于中、晚期,不利于臨床治療方案的選擇,且預后較差。因此,探究胃癌的早期診斷方法并分析其發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)機制,對提高治療效果、改善患者預后具有重要意義。

    miRNA屬于非編碼 RNA,可通過與靶基因3′端的完全或不完全互補結(jié)合而抑制目的基因的翻譯及表達[6-7]。有研究發(fā)現(xiàn),miRNA在不同腫瘤中呈現(xiàn)不同的表達譜,可參與個體發(fā)育、細胞分化、增殖、代謝、凋亡、遷移和轉(zhuǎn)移等細胞生物學過程[8]。本研究結(jié)果顯示,觀察組外周血miR-93、miR-185水平明顯高于對照組,提示miR-93、miR-185具有成為診斷胃癌的重要指標的潛力。有研究表明,超過半數(shù)的miRNA定位于或靠近染色體特定區(qū)域,可調(diào)控多種重要的促癌基因或抑癌基因,進而促進或抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[9]。

    本研究對胃癌患者外周血miR-93、miR-185的表達水平與臨床病理學特征的關(guān)系進行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤直徑≥5 cm、臨床分期為Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者,其外周血miR-93、miR-185的相對表達量均顯著高于腫瘤直徑<5 cm、臨床分期為Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。提示miR-93、miR-185可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程,具有作為評估胃癌疾病進展的重要指標的潛力。有研究發(fā)現(xiàn),miR-93能夠抑制整合素138的表達,促進腫瘤生長和腫瘤血管生成,但具體機制還有待進一步探討[10]。另有研究指出,miR-185能夠調(diào)控抑癌基因的表達,影響β-連環(huán)蛋白、細胞周期蛋白D1(CyclinD1)和c-Myc等細胞凋亡蛋白的表達,進而通過調(diào)節(jié)細胞周期,抑制細胞凋亡[11]。由此推測,miR-185可能是通過影響細胞的正常凋亡,參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程。

    本研究對觀察組外周血miR-93與miR-185的表達水平進行相關(guān)性分析,結(jié)果顯示兩者的相對表達量呈正相關(guān),提示胃癌患者外周血miR-93、miR-185具有同向作用,但兩者是否存在機制介導還有待進一步證實。本研究結(jié)果顯示,胃癌患者治療后外周血miR-93、miR-185的表達水平均較治療前顯著降低,提示兩者具有較高的敏感度。胃癌的發(fā)病機制復雜,幽門螺桿菌感染、環(huán)境因素以及遺傳因素等均可誘發(fā)胃癌,miRNA因具有高度的時序性、保守性及組織特異度,相較于傳統(tǒng)的腫瘤標志物更具有優(yōu)勢,使腫瘤檢測能夠兼容特異度和敏感度。近年來對于miRNA的研究發(fā)展較快,其對于惡性腫瘤的作用機制和基因功能逐步被闡釋,現(xiàn)已開始探索其在腫瘤等疾病的診斷和治療方面的作用,其有望成為惡性腫瘤的重要檢測指標,并為胃癌等腫瘤的治療提供新的思路。

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