• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    藍莓花藥組織培養(yǎng)研究

    2021-03-01 01:52:17付燕楊芩楊月胡紅
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年1期
    關(guān)鍵詞:花藥培養(yǎng)愈傷組織增殖

    付燕 楊芩 楊月 胡紅

    摘要?以“杰兔”“燦爛”和“粉藍”3個兔眼藍莓品種的花藥為試材,采用正交試驗設(shè)計,研究了植物生長調(diào)節(jié)劑和不同品種對藍莓花藥愈傷組織誘導(dǎo)和增殖效果的影響,以期為開展藍莓花藥培養(yǎng)創(chuàng)新種質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果表明,6-BA、2,4-D 和NAA的濃度變化對藍莓花藥愈傷組織誘導(dǎo)有明顯影響,其中6-BA 影響最大;MS+1.0?mg/L 6-BA+2.0?mg/L 2,4-D+0.4?mg/L NAA對“燦爛”花藥愈傷組織誘導(dǎo)率最高,出愈率為35.67%。同時,將參試的3個品種的花藥分別接種在上述培養(yǎng)基中,品種間的出愈率差異顯著,依次分別為“杰兔”46.50%、“燦爛”35.70%和“粉藍”29.50%。此外,以“杰兔”初代培養(yǎng)誘導(dǎo)的愈傷組織繼續(xù)增殖培養(yǎng),該研究處理中最佳增殖培養(yǎng)基為MS+1.00?mg/L IAA+1.25?mg/L 6-BA+0.25?mg/L KT+1.00?mg/LNAA,其增殖系數(shù)為0.89。

    關(guān)鍵詞?藍莓;花藥培養(yǎng);基因型;愈傷組織;增殖

    中圖分類號?S663.9?文獻標(biāo)識碼?A

    文章編號?0517-6611(2021)01-0045-03

    doi:10.3969/j.issn.0517-6611.2021.01.012

    Abstract?Orthogonal design was used to study the effects of plant growth regulators and different varieties on the induction and proliferation of anther callus using the anthers of three rabbiteye blueberry Powderblue,Premier and Brightwell as materials,in order to lay a foundation for the innovative germplasm in blueberry.The results showed that the concentration of 6-BA,2,4-D and NAA had significant effects on the induction of anther callus in blueberry,and among which 6-BA had the greatest effect.The optimum medium for anther callus induction of MS+1.0?mg/L 6-BA+2.0?mg/L 2,4-D+0.4?mg/L NAA with the highest induction rate of 35.67%.Meanwhile,there were significant differences in callus induction rate of anthers among different genotypes,and the callus induction rate of ‘Premier was the highest with 46.50%.In addition,the optimum medium for anther callus proliferation of MS+1.00?mg/L IAA+1.25?mg/L 6-BA+0.25?mg/L KT+1.00?mg/L NAA with the proliferation coefficient of 0.89.

    Key words?Blueberry;Anther culture;Genotype;Callus;Multiplication

    藍莓 (Blueberry) 屬杜鵑花科 (Ericaceae) 越橘屬 (Vaccinium spp.) 植物,為多年生落葉或常綠小灌木果樹[1],其果實含有大量的維生素A、C、E 和花青苷等生化物質(zhì),具有良好保健功能,備受國內(nèi)外消費者青睞[2]。目前,國內(nèi)關(guān)于藍莓的研究主要集中在資源調(diào)查、育苗、土壤改良、貯藏加工等方面,而育種,特別是生物技術(shù)的研究很少[2-3],主栽品種大多為國外20世紀(jì)選育。為促使我國藍莓產(chǎn)業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展,必須加快培育擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的品種[4]。目前,國內(nèi)外關(guān)于藍莓品種的選育主要通過野生選種、實生選種、雜交育種和倍性育種獲得,其中雜交育種仍是最重要的手段[4-5]。近年來,我國把新品種培育作為保持和提升果品競爭力的有力措施,藍莓遺傳育種研究備受我國科研人員關(guān)注和重視[6]。然而,我國藍莓常規(guī)雜交選育種技術(shù)由于受種質(zhì)資源狹窄、周期長等缺點的限制,導(dǎo)致短時間內(nèi)很難超越其他國家的優(yōu)良品種,而利用花藥培養(yǎng)等現(xiàn)代生物技術(shù)育種手段不僅可以加快藍莓的育種進程,也是創(chuàng)新種質(zhì)的有效途徑[7-8]。

    花藥培養(yǎng)已在多種果樹上成功應(yīng)用,并獲得單倍體、胚狀體和胚性愈傷組織[9],而單倍體植株加倍后獲得的雙單倍體 (DH) 在遺傳上具有高度的純合性[10],可快速純合優(yōu)良雜交組合的優(yōu)異基因,使植株的基因型和表現(xiàn)型完全一致,尤其在選擇由隱性基因控制的優(yōu)良性狀時具有明顯優(yōu)勢,能極大地縮短育種周期[11]。同時由于基因的純合性,還可以提高基因作圖和基因定位的準(zhǔn)確性,因此單倍體植株是果樹優(yōu)質(zhì)育種、遺傳轉(zhuǎn)化以及分子標(biāo)記、遺傳圖譜構(gòu)建和基因克隆等分子生物學(xué)研究領(lǐng)域的珍貴材料[12]。目前已有許多果樹通過花藥或花粉培養(yǎng),獲得了胚性愈傷組織或單倍體植物[11-12],但藍莓花藥培養(yǎng)研究迄今鮮有報道。鑒于此,筆者以7年生“燦爛”“粉藍”和“杰兔”品種為試驗材料,探討植物生長調(diào)節(jié)劑、基因型對藍莓花藥培養(yǎng)效果的影響,以期建立藍莓花藥培養(yǎng)體系,為花藥培養(yǎng)獲取單倍體和雙單倍體奠定技術(shù)基礎(chǔ),對創(chuàng)新藍莓種質(zhì)資源、推進育種工作具有重要的理論價值和現(xiàn)實意義。

    1?材料與方法

    1.1?材料

    以種植于凱里學(xué)院卓越農(nóng)林人才培養(yǎng)實訓(xùn)基地內(nèi)7年生的藍莓植株“杰兔”(六倍體,6n=72)、“燦爛”(六倍體,6n=72)、“粉藍”(六倍體,6n=72)[13]3個品種為參試材料,盛花期采集橫徑為0.10~0.15 cm、縱徑為0.7~0.8 cm的花蕾,顯微鏡觀察花粉粒處于單核期且發(fā)育良好的花藥為試驗材料進行接種培養(yǎng)。

    1.2?方法

    1.2.1?花藥的獲得。

    將采集的花蕾用70%的酒精去除花冠表面灰塵后,置于(4 ℃)條件下的冰箱中預(yù)處理3 d,然后在無菌條件下,用70% 的乙醇浸泡15 s,無菌水清洗3遍,再用0.1% 升汞溶液消毒4 min,清洗4~5遍。將處理好的材料放置于無菌濾紙上吸干水分,小心剝離花藥并接種在各處理培養(yǎng)基上。

    1.2.2?愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

    參照段麗君等[14-15]的方法并略有改動,愈傷組織培養(yǎng)基為 MS培養(yǎng)基,pH=6.0,添加蔗糖45 g/L,瓊脂9.5 g/L,以“燦爛”花藥為試料,采用L9 (33) 正交實驗設(shè)計,植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA 濃度為0.75、1.00、1.25?mg/L,2,4-D濃度為1.50、2.00、2.50?mg/L,NAA濃度為0.10、0.20、0.40?mg/L。將花藥接種到含有不同激素種類的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每瓶接種4枚花藥,每處理共接種150瓶,每50瓶為1個重復(fù),共3次重復(fù),即每個處理共接種600枚花藥。

    1.2.3?不同基因型對藍莓花藥誘導(dǎo)的影響。將“燦爛”“粉藍”“杰兔”3個品種的花藥分別接種到上述篩選的最佳培養(yǎng)基中,探討不同基因型對藍莓花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響。

    1.2.4?愈傷組織增殖培養(yǎng)基。

    參照黃鳳祥等[16]的方法并略有改動,愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基,pH=6.0,添加蔗糖45 g/L,瓊脂9.5 g/L,以“杰兔”花藥為試料,采用L9(34) 正交實驗設(shè)計,植物生長調(diào)劑6-BA濃度為0.75、1.00、1.25?mg/L,IAA為0.75、1.00、1.25?mg/L,KT為0.25、0.50、0.75?mg/L,NAA濃度0.75、1.00、1.25?mg/L。將直徑1.0~1.5 cm的正方體或近圓形藍莓花藥愈傷組織接種到增殖培養(yǎng)基中,增殖周期為40 d,觀察愈傷組織生長情況,并稱量計算其鮮重增加量。每瓶接種1顆,每個處理均接種30瓶。

    愈傷組織誘導(dǎo)和增殖接種后放置于培養(yǎng)室內(nèi),光照12 h/d,光強2 000~2 500 lx,溫度 (25±1) ℃條件下培養(yǎng)。

    1.3?數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析?接種60 d后統(tǒng)計各處理花藥褐化率、膨大率及花藥出愈率。增殖培養(yǎng)40 d稱量鮮重,并計算增殖系數(shù)。用SPSS (16.0) 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行方差分析,在分析之前先將所有百分率數(shù)據(jù)進行反正弦轉(zhuǎn)換,處理間差異在0.05的顯著水平上進行SNK檢驗。

    褐化率=褐化花藥數(shù)/接種花藥總數(shù)×100%

    出愈率=出愈花藥數(shù)/接種花藥總數(shù)×100%

    膨大率=膨大花藥數(shù)/接種花藥總數(shù)×100%

    增殖系數(shù)=(Y-Yo)/Yo

    式中,Y為接種40 d后愈傷組織鮮重;Yo為接種時愈傷組織鮮重。

    2?結(jié)果與分析

    2.1?植物生長調(diào)節(jié)劑對藍莓花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響

    接種后跟蹤觀察發(fā)現(xiàn),接種后第20天左右花藥開始膨大,第25天左右有部分花藥開始分化愈傷組織,至接種后第33天可見米黃色團狀愈傷組織,且部分愈傷組織在不斷增殖,隨著培養(yǎng)時間的延長,愈傷組織表面顏色由米黃轉(zhuǎn)為綠色,至接種后第50天有少數(shù)愈傷組織邊緣開始出現(xiàn)褐化的現(xiàn)象,之后隨著培養(yǎng)時間的延長,褐化的愈傷組織進而出現(xiàn)干死的現(xiàn)象。同時,從表3可以看出,在培養(yǎng)基中添加不同種類、不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑,對花藥褐化率、膨大率及愈傷組織的誘導(dǎo)均有顯著影響。各處理花藥接種60 d后,花藥的褐化率為1.17%~7.17%,褐化率最高的為2號處理,即0.75?mg/L 6-BA+2.00?mg/L 2,4-D+0.20?mg/L NAA,其膨大率和誘導(dǎo)率分別僅為2.83%和2.33%。各處理間花藥的膨大率和出愈率均存在顯著差異,且花藥的膨大率與愈傷組織誘導(dǎo)率成正相關(guān),其中5號處理6-BA 1.00?mg/L+2,4-D 2.00?mg/L+NAA 0.40?mg/L的花藥膨大率和出愈率最高,分別為37.00% 和35.67%,并顯著高于其他處理;其次是7號處理1.25?mg/L 6-BA+1.50?mg/L 2,4-D+0.40?mg/L NAA的花藥膨大率和出愈率分別為17.67%和15.00%,再次是4號處理1.00?mg/L 6-BA+1.50?mg/L 2,4-D+0.20?mg/L NAA的膨大率和花藥出愈率均為13.00%,其余處理組織的誘導(dǎo)率均為超過10.00%,且3和9號處理的花藥膨大率和出愈率均為0。

    2.2?不同基因型對藍莓花藥誘導(dǎo)的影響

    由表2可知,基因型對藍莓花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)愈傷組織有顯著影響,不同品種的花藥褐化率、膨大率和愈傷組織誘導(dǎo)率存在顯著差異。參試的3個品種中,“燦爛”的褐化率最高,為4.50%,且顯著高于“粉藍”的3.00%和“杰兔”的2.83%?;蛐蛯ε虼舐屎统鲇实挠绊戁厔菀恢拢敖芡谩钡呐虼舐屎统鲇示罡?,分別為47.67%和46.50%,且均顯著高于燦爛的膨大率 (38.20%) 和出愈率 (35.70%),粉藍的膨大率 (33.83%) 和出愈率 (29.50%)最低,且均顯著低于“杰兔”和“燦爛”。

    2.3?植物生長調(diào)節(jié)劑對藍莓增殖效果的影響

    增殖培養(yǎng)跟蹤觀察發(fā)現(xiàn),愈傷組織在整個增殖周期中質(zhì)地均為致密狀態(tài),顏色由最初綠色變?yōu)楹志G色,隨著培養(yǎng)時間推移顏色不斷變深,鮮重不斷增加。培養(yǎng)至第35天左右,愈傷組織鮮重幾乎不再增加,并出現(xiàn)褐化。由表3可知,不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑組合對“杰兔”藍莓花藥愈傷組織增殖效果有顯著影響,其中 6號處理實際增加鮮重顯著高于其他處理,為2.96 g,增殖系數(shù)最高,為0.89;1號處理實際增加鮮重最低,為1.47 g,增殖系數(shù)也最低。綜合考慮,6號處理組合,即MS+1.00 mg/L IAA+1.25 mg/L 6-BA+0.25 mg/L KT+1.00 mg/L NAA對“杰兔”花藥愈傷組織增殖效果最好。

    3?結(jié)論與討論

    花藥離體培養(yǎng)可以使小孢子產(chǎn)生單倍體,是果樹育種中種質(zhì)資源創(chuàng)新的最有效方法之一[17],獲得的單倍體經(jīng)加倍形成純合二倍體,能加快獲得某一性狀純系,同時極大地豐富了親本種質(zhì)資源,從而更好地實現(xiàn)倍性育種,加快育種進程[18-19]。目前,蘋果[17]、枇杷[15]、枸杞[20]、棗[21]、火龍果[9]、木瓜[22]、扁桃[10]、甜橙[23]、軟棗獼猴桃[24]等果樹已通過花藥或花粉培養(yǎng)獲得愈傷組織、胚狀體、單倍體植株。研究表明,植物花藥愈傷組織形成受多種因素影響,其中激素是影響花藥愈傷組織誘導(dǎo)的關(guān)鍵因素,植物生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度和配比的差異直接影響植株的再生率[11,15-16]。該研究發(fā)現(xiàn),不同種類和不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對藍莓花藥愈傷組織的誘導(dǎo)均有顯著影響,這與植物生長調(diào)節(jié)劑對枇杷[15]、軟棗獼猴桃[24]等果樹的花藥愈傷誘導(dǎo)的影響一致。該研究以“燦爛”花藥為試材,在研究植物激素種類和濃度對愈傷組織誘導(dǎo)影響中獲得的最高誘導(dǎo)率為35.67%,與段麗君等[14]在冬棗和范建新等[9]在火龍果上的花藥愈傷誘導(dǎo)率相似,總體上誘導(dǎo)率不高,這可能是因為該研究正交實驗中植物生長調(diào)節(jié)劑的種類或濃度梯度還不夠合理,需要進一步優(yōu)化。

    將不同品種的花藥接種在相同培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)“杰兔”兔眼藍莓花藥的誘導(dǎo)率均顯著高于“燦爛”和“粉藍”,這表明基因型對藍莓花藥愈傷組織誘導(dǎo)可產(chǎn)生顯著影響,這與火龍果[9]上的研究結(jié)果一致。該研究雖然通過正交試驗獲得了比較成熟的藍莓花藥愈傷組織增殖配方,但增殖系數(shù)不高 (最大僅為0.89)。因此,建議在后期的優(yōu)化研究中可添加誘導(dǎo)效果更好的TDZ,比較其對藍莓愈傷組織增殖和再分化的影響。

    參考文獻

    [1]胡選萍,秦公偉,曹小勇.藍莓組織培養(yǎng)技術(shù)的研究進展[J].分子植物育種,2018,16(3):960-965.

    [2]張晉,李江舟,趙雪麗,等.藍莓品種“頂級”花藥培養(yǎng)技術(shù)體系的建立[J].分子植物育種,2019,17(20):6756-6761.

    [3]吳林.中國藍莓 35 年——科學(xué)研究與產(chǎn)業(yè)發(fā)展[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2016,38(1):1-11.

    [4]孫海悅,李亞東.世界藍莓育種概述[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2014,45(9):116-122.

    [5]王慧亮,張慧琴,肖金平,等.藍莓育種研究概況[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,51(3):474-481.

    [6]朱宏芬,劉健,徐兵兵.高叢藍莓雜交育種及種子萌發(fā)研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(36):55-57,69.

    [7]余宏傲,葉朝軍,康華靖,等.高叢藍莓品種“薄霧”愈傷組織高效誘導(dǎo)及胚性轉(zhuǎn)化[J].分子植物育種,2019,17(12):4042-4053.

    [8]段元杰,劉海剛,孟富宣,等.棗樹花藥組織培養(yǎng)研究進展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報,2016,28(11):47-50.

    [9]范建新,鄧仁菊,王永清,等.火龍果花藥培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性愈傷組織及遺傳穩(wěn)定性[J].分子植物育種,2017,15(1):258-266.

    [10]CIM G,MARCHESE A,GERMAN M A.Microspore embryogenesis induced through in vitro anther culture of almond (Prunus dulcis Mill.)[J].Plant cell,tissue organ culture,2017,128(1):85-95.

    [11]王廣富,艾軍,秦紅艷,等.果樹花藥培養(yǎng)及單倍體植株鑒定研究進展[J].特產(chǎn)研究,2016,38(4):68-72.

    [12]張圣倉,魏安智,楊途熙.果樹單倍體和加倍單倍體 (DH) 技術(shù)研究與應(yīng)用進展[J].果樹學(xué)報,2011,28(5):869-874.

    [13]SAKHANOKHO H,RINEHART T A,STRINGER S J,et al.Variation in nuclear DNA content and chromosome numbers in blueberry[J].Scientia horticulturae,2018,233:108-113.

    [14]段麗君,鄧青云,李國元,等.冬棗花藥培養(yǎng)愈傷組織誘導(dǎo)的影響因素[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(1):60-62.

    [15]陶煉,潘翠萍,謝紅江,等.枇杷花藥胚狀體誘導(dǎo)條件的優(yōu)化[J].熱帶作物學(xué)報,2015,36(12):2223-2229.

    [16]黃鳳翔,管艷,桂明春,等.正交實驗法優(yōu)選橡膠樹花藥愈傷組織誘導(dǎo)的研究[J].北方園藝,2014(18):109-111.

    [17]溫鑫,鄧舒,張春芬,等.“嘎啦”蘋果花藥培養(yǎng)種質(zhì)創(chuàng)新[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,50(14):2793-2806.

    [18]GERMAN M A.Gametic embryogenesis and haploid technology as valuable support to plant breeding[J].Plant cell reports,2011,30(5):839-857.

    [19]GERMAN M A.Anther culture for haploid and doubled haploid production[J].Plant cell,tissue and organ culture,2011,104(3):283-300.

    [20]段麗君,曹有龍.枸杞花藥培養(yǎng)研究[J].種子,2018,37(9):100-105.

    [21]韓晶,王玖瑞,代麗,等.“長紅棗”和“金絲小棗”離體花藥不定芽的誘導(dǎo)[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2014,37(6):38-42.

    [22]CHONG-PREZ B,CARRASCO B,SILVA H,et al.Regeneration of highland papaya (Vasconcellea pubescens) from anther culture[J].Applications in plant sciences,2018,6 (9):1-7.

    [23]CARDOSO J C,MARTINELLI A P,GERMAN M A,et al.In vitro anther culture of sweet orange (Citrus sinensis L.Osbeck) genotypes and of a C.clementina × C.sinensis ‘Hamlin hybrid[J].Plant cell,tissue and organ culture,2014,117(3):455-464.

    [24]WANG G F,QIN H Y,SUN D,et al.Haploid plant regeneration from hardy kiwifruit (Actinidia arguta Planch.) anther culture[J].Plant cell,tissue and organ culture,2018,134(1):15-28.

    猜你喜歡
    花藥培養(yǎng)愈傷組織增殖
    不同基因型水稻花藥培養(yǎng)效果的比較研究
    不同培養(yǎng)基對水稻花藥培養(yǎng)力的影響
    ‘金凱特’杏的組織培養(yǎng)與快繁
    不同外植體和植物激素對大蒜愈傷組織誘導(dǎo)的影響
    普伐他汀對人胰腺癌細胞SW1990的影響及其協(xié)同吉西他濱的抑瘤作用
    細胞自噬與人卵巢癌細胞對順鉑耐藥的關(guān)系
    生物教學(xué)中滲透壓對銀杏愈傷組織的影響研究
    成才之路(2016年27期)2016-09-30 16:57:25
    雷帕霉素對K562細胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    松花菜花藥培養(yǎng)再生植株
    柱花草花藥離體培養(yǎng)研究
    99在线人妻在线中文字幕| 一级毛片高清免费大全| 999精品在线视频| avwww免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产成人系列免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 午夜久久久在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产xxxxx性猛交| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 大香蕉久久成人网| 国产人伦9x9x在线观看| 妹子高潮喷水视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 日韩av在线大香蕉| 多毛熟女@视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 精品久久久久久,| 亚洲av电影在线进入| 一进一出抽搐动态| 国产激情欧美一区二区| 国产高清视频在线播放一区| 久久久久久国产a免费观看| 麻豆国产av国片精品| 91大片在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一区福利在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 国产99久久九九免费精品| 国产一区二区三区视频了| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 12—13女人毛片做爰片一| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产成人精品无人区| 老司机午夜福利在线观看视频| 午夜福利影视在线免费观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产亚洲精品一区二区www| 韩国精品一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜免费观看网址| 亚洲人成电影观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 悠悠久久av| 亚洲熟妇熟女久久| 精品一区二区三区四区五区乱码| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 9191精品国产免费久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| www.自偷自拍.com| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| x7x7x7水蜜桃| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜免费观看网址| 久9热在线精品视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 十分钟在线观看高清视频www| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久狼人影院| 久久精品成人免费网站| 日日夜夜操网爽| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩一级在线毛片| 国产亚洲精品一区二区www| 美女大奶头视频| 欧美成人性av电影在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 国产视频一区二区在线看| 国产一卡二卡三卡精品| 可以在线观看的亚洲视频| 看黄色毛片网站| 神马国产精品三级电影在线观看 | 天堂√8在线中文| 99香蕉大伊视频| 国产1区2区3区精品| 97碰自拍视频| 免费搜索国产男女视频| 怎么达到女性高潮| 男女午夜视频在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产高清videossex| 亚洲中文字幕日韩| 淫秽高清视频在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久国产精品影院| 国产一区二区激情短视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 日本一区二区免费在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产主播在线观看一区二区| 后天国语完整版免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人国产一区最新在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 性欧美人与动物交配| 色老头精品视频在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产精品一区二区精品视频观看| 99在线人妻在线中文字幕| 很黄的视频免费| 天天一区二区日本电影三级 | 窝窝影院91人妻| 神马国产精品三级电影在线观看 | 视频区欧美日本亚洲| 桃色一区二区三区在线观看| 黄色成人免费大全| 露出奶头的视频| 中出人妻视频一区二区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产一区二区三区综合在线观看| 性欧美人与动物交配| 97人妻天天添夜夜摸| 岛国视频午夜一区免费看| 在线观看免费午夜福利视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 色播在线永久视频| 丰满的人妻完整版| 热99re8久久精品国产| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 日韩欧美三级三区| 欧美日韩一级在线毛片| 免费无遮挡裸体视频| 18禁国产床啪视频网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一本大道久久a久久精品| 久久狼人影院| 国产国语露脸激情在线看| 国产免费男女视频| 亚洲久久久国产精品| bbb黄色大片| 欧美性长视频在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 国产97色在线日韩免费| 又紧又爽又黄一区二区| or卡值多少钱| 制服人妻中文乱码| 亚洲 国产 在线| 精品免费久久久久久久清纯| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 少妇粗大呻吟视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 伦理电影免费视频| 丝袜美足系列| 久久中文看片网| 日本一区二区免费在线视频| 在线观看66精品国产| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 在线观看66精品国产| 美女高潮到喷水免费观看| 大码成人一级视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 色尼玛亚洲综合影院| 一区二区三区高清视频在线| av视频在线观看入口| 精品第一国产精品| 精品国产一区二区三区四区第35| 精品熟女少妇八av免费久了| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日韩免费av在线播放| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品久久电影中文字幕| 丝袜在线中文字幕| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲国产欧美网| 男人舔女人下体高潮全视频| 免费在线观看亚洲国产| 欧美日韩黄片免| 制服丝袜大香蕉在线| 级片在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 在线观看免费日韩欧美大片| 超碰成人久久| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 女人被狂操c到高潮| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲最大成人中文| 成人免费观看视频高清| 制服人妻中文乱码| av在线播放免费不卡| 久久九九热精品免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99热只有精品国产| 校园春色视频在线观看| 日韩免费av在线播放| av网站免费在线观看视频| 国产精品电影一区二区三区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲欧美激情综合另类| 少妇 在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 91大片在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美成人午夜精品| 亚洲国产精品成人综合色| 国产1区2区3区精品| 两个人免费观看高清视频| 女警被强在线播放| 不卡一级毛片| 中国美女看黄片| 91九色精品人成在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲伊人色综图| 十八禁人妻一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 午夜免费观看网址| 午夜久久久在线观看| 乱人伦中国视频| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久中文字幕人妻熟女| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 少妇的丰满在线观看| 不卡一级毛片| 国产成人影院久久av| 在线观看舔阴道视频| 宅男免费午夜| 中出人妻视频一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 又大又爽又粗| 日韩精品中文字幕看吧| 久久久国产精品麻豆| 级片在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 女人被狂操c到高潮| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 久久精品91无色码中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 国产精品九九99| 国产精品 欧美亚洲| av中文乱码字幕在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 又紧又爽又黄一区二区| 夜夜爽天天搞| 美女国产高潮福利片在线看| 制服丝袜大香蕉在线| 久久 成人 亚洲| 精品国产美女av久久久久小说| 在线av久久热| 涩涩av久久男人的天堂| 精品国产一区二区久久| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲精品久久国产高清桃花| 曰老女人黄片| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产1区2区3区精品| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲第一电影网av| 一级a爱片免费观看的视频| 久99久视频精品免费| 麻豆成人av在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 色综合婷婷激情| www.999成人在线观看| svipshipincom国产片| 国产三级在线视频| 99久久精品国产亚洲精品| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲精华国产精华精| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日韩视频一区二区在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 久久中文看片网| 校园春色视频在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 操美女的视频在线观看| 国产精品影院久久| 午夜老司机福利片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 波多野结衣一区麻豆| 久久国产精品影院| 中国美女看黄片| 岛国在线观看网站| 两个人视频免费观看高清| 国产亚洲精品av在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| xxx96com| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久天堂一区二区三区四区| 高清在线国产一区| 黄色女人牲交| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产主播在线观看一区二区| 午夜久久久在线观看| 亚洲第一av免费看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 一进一出抽搐动态| 日韩精品青青久久久久久| 欧美色视频一区免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 大型av网站在线播放| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| av视频免费观看在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美日本亚洲视频在线播放| 女人精品久久久久毛片| 波多野结衣av一区二区av| 午夜老司机福利片| 午夜免费成人在线视频| 两人在一起打扑克的视频| 精品电影一区二区在线| 操出白浆在线播放| 日韩成人在线观看一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 亚洲avbb在线观看| 在线观看一区二区三区| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 精品日产1卡2卡| 涩涩av久久男人的天堂| www国产在线视频色| 国产亚洲精品第一综合不卡| 少妇的丰满在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产亚洲精品第一综合不卡| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲少妇的诱惑av| 在线av久久热| 啦啦啦免费观看视频1| 国产单亲对白刺激| 在线观看一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲成人国产一区在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 深夜精品福利| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产黄a三级三级三级人| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 在线观看免费视频网站a站| www.精华液| 一区福利在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲男人天堂网一区| 国产在线精品亚洲第一网站| www.999成人在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲男人天堂网一区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 88av欧美| 91精品国产国语对白视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 精品国内亚洲2022精品成人| 91成年电影在线观看| netflix在线观看网站| 国产精品精品国产色婷婷| 中文字幕高清在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲av片天天在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 韩国av一区二区三区四区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 天天一区二区日本电影三级 | 亚洲欧美激情在线| 两性夫妻黄色片| 国产99白浆流出| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲 国产 在线| 无人区码免费观看不卡| 午夜免费成人在线视频| 老司机福利观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 男女床上黄色一级片免费看| 国内精品久久久久精免费| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美精品啪啪一区二区三区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美日韩黄片免| 可以在线观看的亚洲视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲免费av在线视频| 亚洲第一av免费看| 正在播放国产对白刺激| 99在线人妻在线中文字幕| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 美国免费a级毛片| 欧美成人性av电影在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 十八禁人妻一区二区| 黄色 视频免费看| 美女 人体艺术 gogo| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 色av中文字幕| 国产私拍福利视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产乱人伦免费视频| 十八禁人妻一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲免费av在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲一区二区三区不卡视频| 最近最新免费中文字幕在线| 12—13女人毛片做爰片一| 极品人妻少妇av视频| 无遮挡黄片免费观看| 怎么达到女性高潮| 久久久久久久午夜电影| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲伊人色综图| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久狼人影院| 午夜免费鲁丝| 国产精品av久久久久免费| 岛国在线观看网站| 两性夫妻黄色片| 韩国精品一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 99精品欧美一区二区三区四区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 丝袜美足系列| 欧美在线一区亚洲| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩欧美一区视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久这里只有精品19| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 天堂影院成人在线观看| 国产三级黄色录像| 不卡av一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 黄色 视频免费看| 亚洲免费av在线视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 免费高清在线观看日韩| 国语自产精品视频在线第100页| 制服诱惑二区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美大码av| av有码第一页| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| www.熟女人妻精品国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产免费男女视频| 91国产中文字幕| 乱人伦中国视频| 欧美中文综合在线视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| www日本在线高清视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 男人舔女人的私密视频| www国产在线视频色| 亚洲成人国产一区在线观看| 91在线观看av| 亚洲精品久久国产高清桃花| 此物有八面人人有两片| 日本三级黄在线观看| 黄色视频不卡| 欧美激情久久久久久爽电影 | 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 正在播放国产对白刺激| 亚洲人成77777在线视频| 国产乱人伦免费视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 波多野结衣av一区二区av| 91大片在线观看| 天天添夜夜摸| 一边摸一边做爽爽视频免费| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 中文字幕高清在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 此物有八面人人有两片| 高清在线国产一区| 亚洲人成77777在线视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 成年人黄色毛片网站| 久久人人精品亚洲av| 国产片内射在线| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲成av人片免费观看| 亚洲美女黄片视频| 黄片播放在线免费| 免费观看人在逋| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 麻豆一二三区av精品| 大型av网站在线播放| 一进一出抽搐gif免费好疼| 成人亚洲精品av一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久亚洲精品不卡| 一本大道久久a久久精品| 久久性视频一级片| 国产精品久久久av美女十八| 欧美一级a爱片免费观看看 | 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品久久久久久精品电影 | 精品人妻1区二区| 91大片在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 中文字幕色久视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 女性被躁到高潮视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 男人舔女人下体高潮全视频| 99国产精品99久久久久| 国产精品 国内视频| 国产精品影院久久| 久久人妻av系列| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 激情视频va一区二区三区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 一边摸一边抽搐一进一出视频| bbb黄色大片| 亚洲激情在线av| 欧美乱色亚洲激情| 后天国语完整版免费观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产激情欧美一区二区| 中亚洲国语对白在线视频| av中文乱码字幕在线| 黄片播放在线免费| 国产成人精品无人区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 高清在线国产一区| 欧美激情高清一区二区三区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日本在线视频免费播放| 久久久久久国产a免费观看| 又紧又爽又黄一区二区| 成人国语在线视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品99久久99久久久不卡| 性少妇av在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 女性被躁到高潮视频| 三级毛片av免费| 亚洲第一青青草原| www日本在线高清视频| 热99re8久久精品国产| 亚洲,欧美精品.| 757午夜福利合集在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品国产美女av久久久久小说| 又黄又粗又硬又大视频| 久久香蕉激情| 免费av毛片视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 久99久视频精品免费| 国产91精品成人一区二区三区| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产成人av教育| 99热只有精品国产| 美女国产高潮福利片在线看| 99久久精品国产亚洲精品| 免费高清视频大片| 亚洲色图av天堂| 国产97色在线日韩免费| 国产黄a三级三级三级人| 在线观看免费视频日本深夜| 成人国语在线视频| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美激情在线|