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    采用ITO 法鑒定母親為姐妹的特殊半同胞關(guān)系

    2021-02-26 13:13:02邵誠臣姚以寧周月琴劉志萍徐紅梅謝建輝孫寬
    法醫(yī)學雜志 2021年6期
    關(guān)鍵詞:基因座親緣鑒定人

    邵誠臣,姚以寧,周月琴,劉志萍,徐紅梅,謝建輝,孫寬

    復旦大學基礎(chǔ)醫(yī)學院法醫(yī)學系,上海200032

    在法醫(yī)物證學鑒定中,同胞關(guān)系鑒定作為父權(quán)鑒定外一類主要的親緣關(guān)系鑒定而被廣泛關(guān)注和研究。全同胞關(guān)系鑒定作為同胞關(guān)系鑒定的一種,已有多種解決方案,包括ITO法[1]、狀態(tài)一致性(identity by state,IBS)法[2]、判別函數(shù)法[3]等。2014 年,司法部頒布了《生物學全同胞關(guān)系鑒定實施規(guī)范》(SF/Z JD0105002—2014),使全同胞關(guān)系鑒定得以規(guī)范化、標準化。但由于親緣關(guān)系的復雜性及信息的有限性,無親代參考的半同胞關(guān)系鑒定仍具備一定的特殊性和風險性[4]。

    本鑒定中心在日常檢案中遇到1 例遺傳背景復雜的特殊半同胞關(guān)系鑒定案件,應(yīng)用ITO 法對該案例進行鑒定,以探討特殊半同胞關(guān)系中ITO 法親緣關(guān)系系數(shù)的推導及ITO 法在實際案例中的應(yīng)用。

    1 材料與方法

    1.1 案情介紹

    某地人民法院委托本鑒定中心鑒定張A(女)、張B(男)、張C(女)與張X(女)之間的親緣關(guān)系。委托方稱,張A、張B、張C 為全同胞兄弟姐妹,三人的母親(母1)與張X 的母親(母2)為全同胞姐妹,現(xiàn)要求鑒定張A、張B、張C 與張X 之間的親緣關(guān)系為母親是姐妹的同父異母半同胞關(guān)系(同父)還是普通的一代表親關(guān)系(不同父)。

    若被鑒定人張A、張B、張C 與張X 的父親為同一個體,其家系關(guān)系如圖1 所示;若被鑒定人張A、張B、張C與張X的父親為不同個體,其家系關(guān)系如圖2所示。

    圖1 被鑒定人張A、張B、張C 與張X 的父親為同一個體時的家系圖Fig.1 Genogram in case of Zhang X having the same father with Zhang A,Zhang B and Zhang C

    圖2 被鑒定人張A、張B、張C 與張X 的父親為不同個體時的家系圖Fig.2 Genogram in case of Zhang X having a different father with Zhang A,Zhang B and Zhang C

    1.2 樣本

    采集張A、張B、張C 與張X 4 名被鑒定人的指尖血血痕(載體為濾紙片)進行檢驗。

    1.3 基因分型

    使用Chelex-100 法從張A、張B、張C 和張X 的血痕樣本中提取DNA,使用PowerPlex?21 系統(tǒng)(美國Promega 公司)和21+1 STR 熒光檢測試劑盒(無錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司)檢測40個常染色體STR 基因座,使用Investigator?Argus X-12 QS 試劑盒(德國Qiagen公司)檢測12個X 染色體STR(X-STR)基因座,根據(jù)試劑盒說明書設(shè)置擴增體系與擴增程序,使用Mastercycler?nexus GSX1 PCR 儀(美國Eppendorf 公司)進行擴增,使用3130xl基因分析儀(美國Applied Biosystems 公司)對擴增產(chǎn)物進行毛細管電泳檢測,使用GeneMapperTMIDv3.2 軟件(美國Thermo Fisher Scientific 公司)分析電泳數(shù)據(jù)獲得基因型。

    1.4 采用IBS 法確定被鑒定人的親緣關(guān)系

    依據(jù)《生物學全同胞關(guān)系鑒定實施規(guī)范》(SF/Z JD0105002—2014)計算張A、張B、張C兩兩之間的IBS評分并進行同胞關(guān)系判定。當使用19 個必選基因座和20 個可選基因座進行全同胞關(guān)系鑒定時,IBS≥42可以得出傾向于認為兩名被鑒定人為全同胞的鑒定意見。

    1.5 采用ITO 法計算似然比

    1.5.1 使用ITO 法判定親緣關(guān)系[5]

    根據(jù)孟德爾遺傳定律,父母雙方各隨機遺傳1 個等位基因給孩子。ITO 法中,I、T、O 分別表示兩個體間擁有同源基因(identical by descent,IBD)數(shù)量的3 種可能性:

    k0:兩個體間無IBD 的概率(O);

    2k1:兩個體間有1 個IBD 的概率(T);

    k2:兩個體間有2 個IBD 的概率(I);

    且應(yīng)滿足k0+2k1+k2=1。

    建立檢驗假設(shè):

    Pr:假設(shè)為真的可能性;

    E:檢測到兩個體的基因型;

    Hp:假設(shè)兩個體間為親緣關(guān)系系數(shù)k0、2k1、k2的親屬對;

    Hd:假設(shè)兩個體間為親緣關(guān)系系數(shù)1、0、0 的無關(guān)個體;

    兩個體間為親緣關(guān)系系數(shù)(k0、2k1、k2)的親屬對與兩個體間為無關(guān)個體的似然比(likelihood ratio,LR)如表1 所示。

    表1 兩個體間有親緣關(guān)系與兩個體為無關(guān)個體的似然比Tab.1 The likelihood ratios about two competing hypotheses Hp:(A,B)~(k0,2k1,k2)versus Hd:(A,B)~(1,0,0)

    1.5.2 計算特殊半同胞關(guān)系中的親緣關(guān)系系數(shù)(k0、2k1、k2)

    假設(shè)M1、M2 為全同胞姐妹,C1 為F、M1 之子,C2為F、M2 之子(家系圖見圖3)。

    圖3 母親為全同胞姐妹的家系圖Fig.3 Genogram in case of C1’s mother and C2’s mother are full sibling sisters

    GM2:M1 和M2 間有2 個IBD;

    GM1:M1 和M2 間有1 個IBD;

    GM0:M1 和M2 間無IBD;

    F1:C1 和C2 遺傳自F 的等位基因間有1 個IBD;

    F0:C1 和C2 遺傳自F 的等位基因間無IBD;

    M1:C1和C2遺傳自M1和M2的等位基因間有1個IBD;

    M0:C1 和C2遺傳自M1和M2的等位基因間無IBD。

    1.5.3 計算似然比

    建立檢驗假設(shè):

    備擇假設(shè)1(H1):張A(張B、張C)與張X 間為特殊半同胞;

    備擇假設(shè)2(H2):張A(張B、張C)與張X 間為一代表親;

    原假設(shè)H0:張A(張B、張C)與張X 間為無關(guān)個體。

    特殊半同胞關(guān)系指數(shù)(special half-sibling index,SHSI)表示張A(張B、張C)與張X 間為特殊半同胞和張A(張B、張C)與張X 間為無關(guān)個體的似然比,則:

    一代表親關(guān)系指數(shù)(first cousin index,F(xiàn)CI)表示張A(張B、張C)與張X 間為一代表親和張A(張B、張C)與張X 間為無關(guān)個體的似然比,則:

    因此,張A(張B、張C)與張X 間為特殊半同胞和張A(張B、張C)與張X 間為一代表親的似然比為:

    似然比值大于1,表示被檢個體間關(guān)系為特殊半同胞的可能性大于被檢個體間關(guān)系為一代表親;似然比值小于1,則表示被檢個體間關(guān)系為一代表親的可能性大于被檢個體間關(guān)系為特殊半同胞。

    2 結(jié)果

    2.1 采用IBS 法論證被鑒定人自述的親緣關(guān)系

    張A、張B和張C兩兩之間的IBS評分IBSA-B、IBSA-C、IBSB-C分別為46、49、55,均大于42,符合《生物學全同胞關(guān)系鑒定實施規(guī)范》(SF/Z JD0105002—2014)中傾向于認定全同胞關(guān)系的評分標準。

    2.2 X-STR 基因分型結(jié)果

    根據(jù)4 名被鑒定人12 個X-STR 基因分型檢驗結(jié)果進行分析。因張B 為男性,其X-STR 基因分型結(jié)果均來源于母親,張A 和張C 在每一個X-STR 基因座單倍群分型結(jié)果中均可從母親處找到來源,而張A 和張C 的另一半X-STR 基因座單倍群分型必然來源于父親,據(jù)此可以推測得到假設(shè)父親的X-STR 基因座基因型。張X 的每一個X-STR 基因座均可從假設(shè)父親的X-STR 基因座基因型中找到來源,故不排除假設(shè)父親為張X 的生物學父親。

    2.3 根據(jù)常染色體STR 基因分型結(jié)果計算似然比

    將4 名被鑒定人的常染色體STR 基因分型結(jié)果代入公式進行計算(以張A 與張X 間部分基因座為例的計算結(jié)果見表2)。張A、張B、張C 與張X 之間的SHSI 分別為1.906 6×105、4.888 9×108和1.116 8×1011,CFI 分別為8.329 6×103、2.864 4×105和9.770 4×104,似然比分別為2.288 9×101、1.706 8×103和1.143 0×106。似然比計算結(jié)果分別為適度支持張A 與張X 為特殊半同胞,強烈支持張B 與張X 為特殊半同胞,非常強烈地支持張C 與張X 為特殊半同胞。

    表2 張A 與張X 間部分基因座的基因型、SHSI、FCI和似然比Tab.2 Zhang A and Zhang X’s genotyping and values of SHSI,F(xiàn)CI and LR on some loci for example

    3 討論

    由于同胞關(guān)系鑒定的風險性,為保障鑒定人自身合法權(quán)益,有效規(guī)避鑒定風險,這類案件若無父親和(或)母親參與,鑒定人應(yīng)盡可能對被鑒定人所聲稱的“全同胞”關(guān)系進行驗證[6]。由于當事人隱瞞、不知情等原因造成誤將半同胞關(guān)系當作全同胞關(guān)系進行鑒定,會增加鑒定風險[7]。因此,本例首先應(yīng)用IBS 法對張A、張B、張C 間的全同胞關(guān)系進行了驗證。

    本例涉及的特殊半同胞關(guān)系鑒定,關(guān)鍵在于確認4 名被鑒定人是否來自同一生物學父親。在同父異母半同胞關(guān)系的鑒定中,由于同父異母的半同胞個體之間應(yīng)共享同一父親來源的X-STR 等位基因,可為排除親緣關(guān)系提供重要依據(jù)。然而,由于本例中被鑒定人的母親之間存在全同胞關(guān)系,被鑒定人共享的X 染色體有可能來源于父親,也有可能來源于外祖父,為案件的判定增加了困難。本例中,根據(jù)X-STR 基因分型結(jié)果只能給出“不排除被鑒定人來自同一父親”的結(jié)論。

    對于任意兩種親緣關(guān)系,ITO 法均能夠較為準確地依照個案給出特定的判別方法,最終對被鑒定人之間的關(guān)系進行判斷。以本案為例,基于案件信息分析親代與子代之間的遺傳關(guān)系,建立了被鑒定人間為特殊半同胞關(guān)系的備擇假設(shè)1和被鑒定人間為一代表親關(guān)系的備擇假設(shè)2,通過計算兩者間的似然比來判別這兩種親緣關(guān)系的傾向性。本例中似然比,即特殊半同胞關(guān)系指數(shù)與一代表親關(guān)系指數(shù)之比(SHSI/FCI),表示張A(張B、張C)與張X 間為特殊半同胞的可能性是張A(張B、張C)與張X 間為一代表親的可能性的倍數(shù)。計算結(jié)果顯示,張A、張B、張C 與張X 之間的似然比均大于1,傾向于支持備擇假設(shè)1,即張A、張B、張C 和張X 之間為特殊半同胞。

    結(jié)合已經(jīng)過IBS 評分驗證的張A、張B 和張C 間的全同胞關(guān)系,張A、張B、張C與張X的X-STR 基因分型檢驗結(jié)果,以及張A、張B、張C 與張X 之間的似然比值,支持張A、張B、張C 和張X 之間為特殊半同胞。

    對于任意兩個個體間罕見復雜親緣關(guān)系的鑒定,建議:(1)增加檢測的遺傳標記類型,依照案件特有的遺傳背景和親緣關(guān)系,盡可能還原親代的基因型,輔助判斷案件中可能的親緣關(guān)系;(2)采用ITO 法針對案件特征推導適合于個案分析的ITO 公式,以鑒定訴求為基礎(chǔ),建立相應(yīng)的假設(shè)檢驗,采用似然比的方法對其傾向進行判別??紤]到不同親緣關(guān)系的遺傳特征及被檢遺傳標記系統(tǒng)的檢測效能,建議綜合多種遺傳標記和檢測方法得出鑒定意見。

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