砂燙對(duì)大棗主要活性成分的影響*

劉世軍，魯靜，張娛，宋忠興，崔春利，許洪波，劉紅波，張軍武，王少程

陜西中醫(yī)藥大學(xué)／陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心／秦藥特色資源研究開發(fā)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（培育）／陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西咸陽712083

大棗為鼠李科植物棗（Ziziphus jujuba Mill.）的干燥成熟果實(shí)［1］，是藥食同源品種中的佳品?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將大棗載為上品，“主心腹邪氣，安中養(yǎng)脾，助十二經(jīng)，平胃氣，通九竅，補(bǔ)少氣、少津液，身中不足，大驚，四肢重，和百藥，久服輕身長年［2］。”大棗具有補(bǔ)中益氣，養(yǎng)血安神的功效，常用于脾虛少食，乏力便溏，婦人臟躁等癥［1］?！吨腥A人民共和國藥典》《傷寒論》《金匱要略》中許多處方都有大棗［3-5］?，F(xiàn)代藥理研究表明，大棗具有抗氧化、抗缺氧、抗抑郁、抗疲勞、抑制腫瘤、抗過敏、保肝、鎮(zhèn)靜、抗壓、抗衰老等作用［6］。大棗含有的少量環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和環(huán)磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）活性成分，具有抗心律失常、抑菌保肝、降低血糖和膽固醇等藥理作用，大棗被民間譽(yù)為“益壽果”［7］。大棗中主要含有三萜類、皂苷類、生物堿類、黃酮類、糖類、酚類等化合物及維生素、礦物質(zhì)元素等［8］。

由于大棗具有豐富的化學(xué)成分和良好的藥理作用，近年來，關(guān)于大棗的基礎(chǔ)研究和相關(guān)產(chǎn)品層出不窮，比如大棗泡騰顆粒［9］、大棗雞蛋發(fā)糕［10］、大棗椰漿馬蹄糕［11］、大棗煎膏劑［12］、大棗抗氧化口紅［13］、大豆棗糕［14］等。另外將與大棗經(jīng)常配伍的生姜［15］開發(fā)成大棗紅糖姜茶［16］。因產(chǎn)地、生長環(huán)境和采摘條件、時(shí)間不同，中藥化學(xué)成分的含量會(huì)有差異。不同產(chǎn)地的大棗，其含有的相同或同類化學(xué)成分的含量也有一定的差異。

大棗藥用從古至今多為生用，但大多會(huì)注明擘開或去核等，然而好多患者在將大棗入煎劑或者作為食療煲湯時(shí)常未擘開。民間也有將大棗炒焦當(dāng)茶飲。大棗炒炭用于治療內(nèi)痔出血。清代《本草害利》記載：“入醒胃藥，但去核炒香。”明代《晉濟(jì)方》記載：“凡湯用完物皆擘破。”陳振武等［17］對(duì)大棗生品、炒黃、炒焦、砂燙等炮制品的常規(guī)煎出物進(jìn)行測(cè)定和比較，發(fā)現(xiàn)不論哪種炮制品，剖開較不剖開煎出物含量都高，且大棗煎出物百分含量（完整）：炒焦（29.16%）＞炒黃（22.31%）＞砂燙（22.28%）＞醋炙（19.78%）＞生品（9.85%）；（剖開）：炒焦（36.46%）＞醋炙（32.80%）＞砂燙（31.87%）＞炒黃（31.34%）＞生品（13.55%）?？梢姶髼椨貌煌姆椒ㄅ谥坪?，其煎出物含量也存在著一定的差異。大棗炮制后棗皮被破壞，使大棗有效成分的提取利用率增加，降低了大棗在應(yīng)用中不必要的損耗，從而增加一些新的功效或者增強(qiáng)原有療效，減少不良反應(yīng)，緩和藥性，易于粉碎，進(jìn)而使大棗臨床應(yīng)用的范圍大大增加。大棗炒制后增強(qiáng)了養(yǎng)血安神的功能，對(duì)高血壓引起的頭痛、失眠能起到很好的食療效果。由于大棗砂燙后主要活性成分的含量變化文獻(xiàn)研究較少，本研究以此為契機(jī)，對(duì)大棗砂燙后主要活性成分的含量變化進(jìn)行初步研究。

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料大棗（產(chǎn)地：陜西合陽，新疆和田）。

1.2 試劑濃鹽酸（西安三浦化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20170626）、甲醇（天津市天力化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20190108）、冰醋酸（天津市天力化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20180208）、氫氧化鈉（天津市天力化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：20180801）、乙酸乙酯（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào)：2019031801）、高氯酸（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào)：2019072201）、Folin試劑（天津市天力化學(xué)科技有限公司，批號(hào)：F9252）、硝酸鋁，九水（成都市科隆化學(xué)品有限公司，批號(hào)：2017090501）、香草醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20160326）、無水乙醇（安徽安特食品股份有限公司，批號(hào)：1806073602）。對(duì)照品：蘆丁（陜西樂博生化科技有限公司，批號(hào)：16122801）、齊墩果酸（陜西樂博生化科技有限公司，批號(hào)：16051205）、沒食子酸（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20851）、蓮心堿（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20730）。所有化學(xué)試劑均為分析純。

1.3 儀器電子分析天平（賽多利斯科儀器有限公司）、電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）、MH-500調(diào)溫型電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）、KSW 型電爐溫度控制器（北京科偉永興儀器有限公司）、箱式電阻爐（北京科偉永興儀器有限公司）、DZKW-4電子恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）、高速萬能粉碎機(jī)（天津鑫博得儀器有限公司）、島津UV-2600紫外可見分光光度儀（日本島津公司）、KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、C21-HT2109多功能電磁爐（廣東美的生活電器制造有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 大棗炮制將大棗凈選，去核，切厚片，置于干凈托盤內(nèi)，攤開，于50℃的烘箱內(nèi)干燥。取已洗凈干燥的河砂適量倒在鍋內(nèi)，用武火加熱至滑利狀態(tài)，倒入大小分檔的大棗片或大棗個(gè)，不停翻動(dòng)炒至大棗表皮鼓起，皺縮基本消失，表面顯深褐色，有焦香氣發(fā)出［18］，取出鋪開晾涼（用刀刮除附著于大棗上的砂子）。將大棗生片、各大棗炮制品分別用粉碎機(jī)粉碎，得其相應(yīng)的粉末。生品和炮制品的水分控制在5%以下。

2.2 活性成分提取準(zhǔn)確稱取樣品0.5 g，轉(zhuǎn)入50 mL離心管中。分別加體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液5 mL，100 W 超聲提取30 min，4 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10 min，離心半徑10 cm，收集上清液，殘?jiān)蒙鲜龇椒ㄔ偬崛?次，合并上清液后過濾，濾液定容至10 mL，備用［19］。

2.2.1 總酚含量測(cè)定精密稱量沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品1 mg，用蒸餾水溶解且定容至10 mL，得質(zhì)量濃度0.1 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，準(zhǔn)確量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL置10 mL容量瓶中，用蒸餾水補(bǔ)充至6 mL，搖勻后加入體積分?jǐn)?shù)50%的Folin酚試劑0.5 mL，搖勻后靜置1 min，加入1.5 mL體積分?jǐn)?shù)20%Na2CO3溶液，混勻定容至10 mL，在水浴鍋內(nèi)75℃恒溫反應(yīng)10 min，取出冷卻至室溫，在760 nm處測(cè)定吸光度［20］。

精密量取各樣品體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取液0.1 mL轉(zhuǎn)入10 mL容量瓶中，用蒸餾水補(bǔ)充至6 mL，搖勻后加入體積分?jǐn)?shù)50%的Folin酚試劑0.5 mL，搖勻后靜置1 min，加入1.5 mL的體積分?jǐn)?shù)20%Na2CO3溶液，混勻定容至10 mL，在水浴鍋內(nèi)75℃恒溫反應(yīng)10 min，取出冷卻至室溫，于760 nm波長處測(cè)定其吸光度［20］。結(jié)果見圖1，表1。

圖1 總酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 大棗總酚的含量變化

大棗砂燙前后各樣品中總酚的含量依次為13.163 mg·g-1、24.470 mg·g-1、23.120 mg·g-1、11.543 mg·g-1、26.596 mg·g-1，表示大棗砂燙后總酚的含量有所增加，砂燙片比砂燙個(gè)總酚的含量增加的多，可能是由于大棗外表5.0～7.5μm的角質(zhì)層及4～6列厚角細(xì)胞，阻礙提取溶劑的進(jìn)入和內(nèi)部成分的提出［17］。大棗切成片后棗皮被破壞，比表面積增加，更易于有效成分的溶出。新疆大棗生品中總酚的含量高于陜西大棗生品，但陜西大棗經(jīng)砂燙后比新疆大棗砂燙后總酚含量略高。

2.2.2 總黃酮含量測(cè)定對(duì)于中藥總黃酮的測(cè)定，大多采用紫外分光光度法測(cè)定［21-22］，本實(shí)驗(yàn)也采用該方法對(duì)大棗總黃酮進(jìn)行測(cè)定。

準(zhǔn)確稱量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品2 mg，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶解且定容至10 mL的容量瓶中，得0.2 g·L-1的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，量取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL置10 mL容量瓶中，再用體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液補(bǔ)充體積至5.0 mL，加入體積分?jǐn)?shù)5%NaNO2的溶液0.3 mL，搖勻放6 min后再加0.3 mL體積分?jǐn)?shù)10%Al（NO3）3溶液，搖勻，靜置6 min后加入4 mL 1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻后再加入體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液定容至10 mL，再次搖勻，10 min后在510 nm波長處測(cè)定吸光度［20］。

精密量取稀釋成適當(dāng)倍數(shù)的體積分?jǐn)?shù)80%甲醇提取液2.0 mL，再加入體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液補(bǔ)充體積至5.0 mL，加入體積分?jǐn)?shù)5%NaNO2的溶液0.3 mL，搖勻靜置6 min后再加0.3 mL體積分?jǐn)?shù)10%Al（NO3）3溶液，搖勻，靜置6 min后加入4 mL 1 mol·L-1的NaOH溶液，混勻后再加入體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶液定容至10 mL，再次搖勻，10 min后在510 nm波長處測(cè)定吸光度。結(jié)果見圖2，表2。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

表2 大棗總黃酮的含量變化

總黃酮含量依次為 1.277 mg· g-1、13.480 mg·g-1、13.895 mg·g-1、3.632 mg·g-1、12.591 mg·g-1，可以看出大棗炮制后總黃酮的含量大大增加，可能是大棗經(jīng)砂燙后有利于有效成分的溶出。大棗片砂燙后增加量略少于大棗個(gè)砂燙后，有可能是切片后比表面積增大，溫度過高可能破壞了黃酮苷，使一部分黃酮苷分解成苷元，導(dǎo)致總黃酮的含量降低。這只是一種推測(cè)，具體原因有待進(jìn)一步深入研究。新疆大棗生品的含量小于陜西大棗生品。砂燙后新疆大棗的總黃酮含量大于陜西大棗，這與新疆大棗個(gè)大肉厚核小可能也有一定的關(guān)系。

2.2.3 總?cè)坪繙y(cè)定三萜類化合物是大棗的主要活性成分類群之一?！吨腥A人民共和國藥典》用齊墩果酸、白樺脂酸作為大棗定性鑒別的對(duì)照品［1］，可見這類成分在大棗的功效及藥理作用方面有舉足輕重的作用。

精確稱取對(duì)照品齊墩果酸1.0 mg，放在10 mL容量瓶中，體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶解并定容。最后得到質(zhì)量濃度0.1 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。分別依次精密取對(duì)照品溶液0.0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL于10 mL的容量瓶中，水浴揮干體積分?jǐn)?shù)80%甲醇溶劑，再分別加入0.4 mL體積分?jǐn)?shù)5%香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后放于90℃水浴反應(yīng)15 min，取出冷卻至室溫，乙酸乙酯定容，搖勻，在560 nm處測(cè)吸光度［20］。

精密量取體積分?jǐn)?shù)80%甲醇稀釋5倍，量取提取液0.1 mL，于10 mL容量瓶中，水浴揮去溶劑后，再分別加入0.4 mL體積分?jǐn)?shù)5%香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后放在于90℃水浴反應(yīng)15 min，取出冷卻至室溫，乙酸乙酯定容，搖勻，在560 nm波長處測(cè)定吸光度。結(jié)果見圖3、表3。

圖3 齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線

表3 大棗總?cè)频暮孔兓ā纒）

表3 大棗總?cè)频暮孔兓ā纒）

-1樣品稀釋倍數(shù)吸光度（A） 含量／mg·g 0.330 37.080新疆砂燙（片）5 0.544 59.968新疆砂燙（個(gè)）5 0.574 63.176陜西生品5 0.334 37.508陜西砂燙新疆生品5 5 0.596 65.529

總?cè)坪恳来螢?7.080 mg· g-1、59.968 mg·g-1、63.176 mg·g-1、37.508 mg·g-1、65.529 mg·g-1，表明大棗炮制后總?cè)频暮吭黾雍芏啵側(cè)频暮枯^總酚、總黃酮都高，也能體現(xiàn)出三萜類化合物的重要性。大棗個(gè)砂燙后增加量大于大棗片砂燙后，有可能是大棗皮在砂燙過程中對(duì)大棗三萜類成分進(jìn)行了保護(hù)，防止大棗片比表面積大破壞三萜類成分。新疆大棗生品的含量略小于陜西大棗生品。

2.2.4 總生物堿含量測(cè)定精密稱量2 mg對(duì)照品蓮心堿置于容量瓶中，無水乙醇溶解并定容至10 mL，得0.2 g·L-1的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。量取0.0 mL、1.2 mL、1.5 mL、1.8 mL、2.1 mL、2.4 mL依次置于10 mL容量瓶中，無水乙醇定容至刻度，在282 nm處測(cè)定吸光度［23］。

配制體積分?jǐn)?shù)1%Hcl 250 mL，體積分?jǐn)?shù)1%NaOH 300 mL備用。分別稱取各樣品0.5 g于離心管中，并貼好標(biāo)簽，向每個(gè)離心管中分別加入10 mL體積分?jǐn)?shù)1%Hcl，調(diào)節(jié)pH＝2，浸泡2 h，使生物堿轉(zhuǎn)化為生物堿鹽溶于酸水中。每個(gè)離心管中分別加入體積分?jǐn)?shù)1%NaOH，調(diào)節(jié)pH為9～10，使生物堿游離出來。有機(jī)溶劑萃?。悍謩e加入無水乙醇15 mL，密封，超聲處理40 min，取出離心管，過濾樣品溶液，將經(jīng)過過濾的溶液用無水乙醇定容到50 mL的容量瓶中，備用［23］。結(jié)果見圖4，表4。

將上述制備的提取液適當(dāng)稀釋后于282nm波長處測(cè)定吸光度。

圖4 蓮心堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

表4 總生物堿的含量

總生物堿的含量依次為5.011 mg·g-1、187.370 mg·g-1、54.428 mg·g-1、15.350 mg·g-1、233.771 mg·g-1?？梢钥闯龃髼椗谥坪罂偵飰A的含量大大增加，大棗片砂燙后增加量明顯大于大棗個(gè)砂燙后。

3 討論

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不論是新疆產(chǎn)大棗切片或不切片，還是陜西產(chǎn)大棗，進(jìn)行砂燙炮制，其總酚、總黃酮、總?cè)啤⒖偵飰A含量都增大。新疆大棗個(gè)砂燙后其總酚、總生物堿的增加量少于大棗片砂燙后，可能由于大棗切片后比表面積增加，炮制時(shí)有利于兩類成分的溶出，而總?cè)?、總黃酮的增加量大棗個(gè)大于大棗片砂燙后，這可能由于這兩類成分中的一些成分對(duì)熱不穩(wěn)定，大棗外皮可以對(duì)其進(jìn)行保護(hù)，故大棗個(gè)總?cè)?、總黃酮的增加量大于大棗片。

新疆大棗生品的總酚含量大于陜西大棗生品，但是其總黃酮、總?cè)?、總生物堿等卻小于陜西大棗生品。大棗切片后砂燙的總體效果要比大棗整個(gè)砂燙要好。試驗(yàn)中總生物堿的增加量特別大，具體原因有待進(jìn)一步深入研究，但總成分的變化趨勢(shì)還是一目了然的。

大棗砂燙后由于有效成分的含量明顯增加，其養(yǎng)血安神的效果較生品有了一定的提高，能對(duì)失眠起到很好的輔助治療效果。對(duì)大棗砂燙后主要活性成分含量的變化進(jìn)行研究，可為大棗砂燙炮制品在臨床上的應(yīng)用提供一定的依據(jù)。