皂白散治療足癬的實(shí)驗(yàn)研究*

郭蛟，馮捷，謝作哲，解豫苑，趙東科，閆小寧

1.陜西省中醫(yī)醫(yī)院，陜西西安710003；2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西西安710004；3.寶雞市人民醫(yī)院，陜西寶雞721001；4.西安市新城區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，陜西西安710005；5.楊凌東科麥迪森制藥有限公司，陜西咸陽(yáng)712100

足癬往往稱之為“腳濕氣”“臭田螺”［1-2］，由于患者平素生活起居不慎，久居濕熱地區(qū)、趾縫潮濕、腳汗多而外感濕邪，或脾虛濕蘊(yùn)下注足部，或因接觸患者的用具沾染蟲毒導(dǎo)致［3-4］。常見(jiàn)腳趾縫浸漬、糜爛、丘疹水皰或干燥、脫屑，瘙癢明顯，臭穢不堪［5-6］。臨床上抗真菌藥物成分比較單一，長(zhǎng)期服用損傷肝腎功能等不良反應(yīng)大［7-8］，且治療后病情容易反復(fù)，如若治療不及時(shí)甚至繼發(fā)丹毒［9］。因此，尋求不良反應(yīng)小、療效好的治療藥物迫在眉睫。

皂白散由白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角、黃精、地骨皮藥物組成［10］，具有清熱燥濕，殺蟲止癢的作用，廣泛用于濕熱蘊(yùn)結(jié)型手足癬的治療［11］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為足癬的基本病機(jī)為濕熱郁遏肌膚，治療以清熱燥濕止癢為主［12］，但關(guān)于皂白散治療足癬的藥理作用及機(jī)制尚未完全闡明，為闡明皂白散具有抗炎、毛細(xì)血管通透性、抑制真菌、抑制細(xì)菌的藥理作用，本文對(duì)其主要藥效學(xué)進(jìn)行了研究。

1 材料

1.1 動(dòng)物SPF級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量（27±3）g，雌雄各半，由陜西省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，批號(hào)：SCXK-（陜）2018-308，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過(guò)陜西省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批（批號(hào)：SZYY2018006），實(shí)驗(yàn)溫度（22±3）℃，濕度50% ～60%，自由飲水，注意通風(fēng)換氣，保持空氣清新。

1.2 藥品與試劑皂白散（陜藥控股集團(tuán)天寧制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：091207D1）；巴豆油合劑（2%巴豆油，20%無(wú)水乙醇、5%蒸餾水、73%乙醚）；l%醋酸（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理教研室提供）；伊文思蘭（曉柚生物，批號(hào)：X11103）；醋酸氟輕松軟膏（天津太平洋制藥有限公司，批號(hào)：2009DD4056）；地塞米松磷酸鈉注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20091011）；莫匹羅星軟膏（中美天津史克制藥有限公司，批號(hào)：2009B00825）。

1.3 菌株實(shí)驗(yàn)真菌：青霉菌、黑曲霉、黃曲霉、白色念珠菌、許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌。實(shí)驗(yàn)細(xì)菌：乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌。以上菌株均由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部細(xì)菌室提供。

1.4 儀器722型分光光度計(jì)（江西貝諾儀器有限公司）；QY-EFYH253-193型無(wú)菌濾紙片（上海喬羽生物科技有限公司）；RPY-564型普通瓊脂平板（上海榕柏生物技術(shù)有限公司）；R454462型沙保弱氏瓊脂平板（上海舜友生物技術(shù)有限公司）；cl-191c型培養(yǎng)箱（上海信裕生物科技有限公司）；KL05A型離心機(jī)（湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法

2.1 皂白散對(duì)小鼠耳腫脹影響取ICR小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，即大劑量組（60%皂白散浸液），小劑量組（30%皂白散浸液），對(duì)照組（蒸餾水）及陽(yáng)性對(duì)照組（醋酸氟輕松軟膏）。用巴豆油合劑（0.1 mL）涂于每只小鼠右耳兩面致炎后待用，各組小鼠右耳兩面涂藥，左耳作為自身對(duì)照，不涂試藥，藥、蒸餾水量均為每只0.1 mL。待藥水干4 h后，將小鼠脫臼處死。剪下左、右兩耳。用9 mm直徑打孔器分別在每耳的同一部位取樣。用左右兩耳片質(zhì)量作為腫脹度，用扭力天平稱量。

2.2 皂白散對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

取ICR小鼠40只，雌雄各半。隨機(jī)分為大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對(duì)照組（蒸餾水）及陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松磷酸鈉注射液）。于給藥后1 h，每只靜注伊文思蘭生理鹽水。每只腹腔注射1%醋酸0.2 mL。30 min后處死動(dòng)物。用5 mL生理鹽水洗滌腹腔。收集腹腔洗滌液，加生理鹽水至6 mL，離心后用722型分光光度計(jì)，在波長(zhǎng)590 nm處比色法測(cè)定其中伊文思蘭的光密度。

2.3 皂白散的抗真菌實(shí)驗(yàn)將無(wú)菌濾紙片（Ф6 mm）分別浸泡于大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對(duì)照組（蒸餾水）及陽(yáng)性對(duì)照組（注射用兩性霉素B）中，將待測(cè)真菌均勻涂于沙保弱氏平板，以無(wú)菌鑷夾取無(wú)菌濾紙片粘貼于平板表面，標(biāo)記，室溫放置20 min，移入28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，用卡尺測(cè)量各樣品及對(duì)照的抑菌環(huán)直徑，抑菌實(shí)驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)：小于6 mm，不敏感（無(wú)抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（輕度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.4 皂白散的抗細(xì)菌實(shí)驗(yàn)將無(wú)菌濾紙片（Ф6 mm）分別浸泡于大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對(duì)照組（蒸餾水）及陽(yáng)性對(duì)照組（莫匹羅星軟膏）中，室溫放置備用，將待測(cè)細(xì)菌均勻涂于普通瓊脂平板，以無(wú)菌鑷夾取無(wú)菌濾紙片粘貼于平板表面，標(biāo)記，室溫放置20 min，移入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。用卡尺測(cè)量各樣品的抑菌環(huán)，抑菌實(shí)驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)：小于6 mm，不敏感（無(wú)抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（輕度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.5 皂白散全身致敏實(shí)驗(yàn)取ICR小鼠20只，體質(zhì)量（27±3）g，雌雄各半，隔日皮下注射60%皂白散浸液（0.4 mL·kg-1），每日2次，連續(xù)14 d。觀察ICR小鼠全身癥狀，包括皮膚潮紅、丘疹、蜷縮、嗆咳、呼吸困難、死亡等。

2.6 皂白散的毒性實(shí)驗(yàn)取ICR小鼠20只，雌雄各半，禁食12 h后，灌胃給予皂白散大劑量組（60%皂白散浸液），每日3次，1日內(nèi)累加劑量達(dá)40.2 g·kg-1，灌胃給藥后，給予固體飼料和水，觀察1周內(nèi)小鼠死亡數(shù)及其中毒現(xiàn)象。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 25軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn)，三組及以上計(jì)量資料比較用方差分析，以P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 皂白散對(duì)巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應(yīng)的影響與對(duì)照組比較，大、小劑量皂白散組小鼠的耳部腫脹度明顯降低（P＜0.05），大、小劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示皂白散具有明確療效。見(jiàn)表1。

表1 皂白散對(duì)巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應(yīng)的影響（±s）

表1 皂白散對(duì)巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應(yīng)的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

腫脹度對(duì)照組組別n 左耳質(zhì)量（m／mg） 右耳質(zhì)量（m／mg）10 17.83±2.32 26.25±2.56 8.04±4.60陽(yáng)性對(duì)照組10 16.36±2.33 28.27±0.90 2.09±2.02小劑量皂白散組 10 15.75±1.62 20.25±2.86 4.50±3.00*大劑量皂白散組 10 14.40±3.62 18.70±1.83 3.50±2.12*

3.2 皂白散對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

與對(duì)照組比較，大、小劑量皂白散均能顯著降低1%醋酸對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 皂白散對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（±s）

表2 皂白散對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

通透性對(duì)照組組別n 10 0.472±0.133陽(yáng)性對(duì)照組10 0.390±0.114小劑量皂白散組10 0.279±0.149*大劑量皂白散組10 0.255±0.221*

3.3 皂白散對(duì)常見(jiàn)真菌的抑菌環(huán)直徑大小的影響

與對(duì)照組比較，大、小劑量皂白散對(duì)青霉菌、黑曲霉、黃曲霉具有輕度抑制作用，對(duì)白色念珠菌、許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌有中度抑制作用；小劑量組對(duì)白色念珠菌有輕度抑制作用，對(duì)放線菌有中度抑制作用。見(jiàn)表3。

表3 皂白散對(duì)常見(jiàn)真菌的抑菌環(huán)直徑大?。ā纒，mm）

表3 皂白散對(duì)常見(jiàn)真菌的抑菌環(huán)直徑大?。ā纒，mm）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別青霉菌黑曲霉黃曲霉白色念珠菌許蘭氏毛癬菌 石膏樣小孢子菌犁頭菌放線菌對(duì)照組0.0±0.1 0.0±0.0 0.0±0.1 0.0±0.4 0.0±0.2 0.0±0.2 0.0±0.3 0.0±0.1陽(yáng)性對(duì)照組15.0±1.4 17.0±1.4 15.0±12.0 23.0±1.6 15.0±1.4 13.0±1.2 20.0±1.3 23.0±15.0小劑量皂白散組0.0±0.3*0.0±0.1*0.0±0.2*6.0±1.1*0.0±0.3*0.0±0.0*0.0±0.0*12.0±1.5*大劑量皂白散組8.0±1.3*7.0±1.6*7.0±1.5*10.0±1.2*10.0±1.3*10.0±1.4*10.0±1.2*15.0±1.3*

3.4 皂白散對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑大小的影響

與對(duì)照組比較，大劑量皂白散對(duì)乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用；小劑量對(duì)乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、變形桿菌和布氏桿菌有中度抑制作用，但對(duì)枯草桿菌、卡他球菌無(wú)抑制作用。見(jiàn)表4。

表4 皂白散對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑大?。ā纒，mm）

表4 皂白散對(duì)常見(jiàn)細(xì)菌的抑菌環(huán)直徑大?。ā纒，mm）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05

氏痢疾桿菌枯草桿菌大腸桿菌變形桿菌 金黃色葡萄球菌 卡他球菌布氏桿菌對(duì)照組1.0±0.8 0.0±0.0 1.0±0.3 1.0±0.4 0.0±0.2 0.0±組別乙型鏈球菌 F 0.7 0.0±0.5 0.0±0.6陽(yáng)性對(duì)照組15.0±1.8 17.0±17.0 20.0±1.6 16.0±1.5 13.0±1.4 13.0±1.4 14.0±1.5 13.6±1.4小劑量皂白散組 10.0±1.2 10.0±1.0 0.0±0.1 8.0±1.1 12.3±1.1*8.0±1.3 0.0±0.2 12.5±0.8*大劑量皂白散組 12.0±1.4* 13.0±1.6* 12.0±1.3* 15.0±1.4* 14.0±1.2* 12.0±1.6* 13.0±1.5* 12.0±1.4*

3.5 皂白散全身致敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果致敏作用連續(xù)觀察隔日皮下注射大劑量皂白散藥液，未發(fā)現(xiàn)小鼠皮膚潮紅、丘疹、蜷縮、嗆咳、呼吸困難等癥狀，亦未見(jiàn)小鼠死亡現(xiàn)象，說(shuō)明皂白散無(wú)明顯全身致敏作用。

3.6 皂白散毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果1周內(nèi)20只小鼠均無(wú)死亡，毛發(fā)、活動(dòng)、體態(tài)及飲食、糞便等未見(jiàn)明顯異常，證明皂白散口服時(shí)的LD50＞40.2 g·kg-1，屬比較安全的藥物。

4 討論

足癬在中醫(yī)經(jīng)典《外科正宗》記載：“臭田螺，乃足陽(yáng)明胃，經(jīng)濕火攻注而成。此患者多生足趾腳丫，隨之白斑作爛，先癢后痛，破流臭水，形似螺靨［13］”。皂白散由白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角、黃精、地骨皮藥物組成。其中白礬煅后為枯礬，具有解毒殺蟲、燥濕止癢作用為君藥［14］，《本草綱目》云：“礬石之用有四……酸苦涌泄……酸澀而收……收而燥濕……解毒也”；皂礬為硫酸鹽類礦物水綠礬的礦石，具有解毒燥濕，殺蟲補(bǔ)血的功效，煅后增強(qiáng)了燥濕止癢的功效［15-16］。皂角祛風(fēng)殺蟲、散結(jié)消腫［17-18］，《本草綱目》云：“治民癘疥癬……殺蟲……涂之則散腫消毒，搜風(fēng)治瘡?！贝硕帪槌妓帲坏毓瞧で鍩狃B(yǎng)陰［19］，有輔佐前3味藥物過(guò)燥之弊，因而為佐藥；近期研究地骨皮有抑菌抗炎的作用［20］，黃精具有健脾養(yǎng)陰之功效，歸脾經(jīng)［21］，一方面制約白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角燥性，另一方面起到引經(jīng)報(bào)使之目的為使藥。全方共奏清熱燥濕，殺蟲止癢之功用而達(dá)到了治療腳濕氣之目的［22］。結(jié)果表明大、小劑量皂白散組與對(duì)照組比較，有明顯差異，皂白散對(duì)巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應(yīng)，側(cè)面表明皂白散有抗炎的作用；且大、小劑量皂白散均能顯著降低l%醋酸對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管的通透性，進(jìn)一步說(shuō)明皂白散具有止癢的作用。西醫(yī)認(rèn)為足癬多由毛癬菌屬、小孢子菌屬、表皮癬菌屬感染引起［23-24］，居淺部真菌病的首位［25］。本研究表明大劑量皂白散組對(duì)許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌、白色念珠菌有中度抑制作用；小劑量組對(duì)白色念珠菌有輕度抑制作用，對(duì)放線菌有中度抑制作用；而不同類型的足癬患者皮膚屏障容易被真菌破壞［26］，易使皮膚菌群失調(diào)，局部炎癥進(jìn)一步加重，患者自身的瘙癢、疼痛癥狀更加明顯；皂白散大劑量對(duì)乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用，表明皂白散有抑制真菌、抑制細(xì)菌的作用。

中藥治療足癬主要有中藥熏洗、中藥涂敷法、浸泡法等［27］，有醋制劑、水制劑、氣霧劑、膏劑等制劑［28］，皂白散屬于水制劑浸泡法。實(shí)驗(yàn)表明，皂白散具有抗炎、降低毛細(xì)血管通透性、抑制真菌、抑制細(xì)菌的作用，無(wú)明顯全身致敏性，比較安全，且具有組方簡(jiǎn)單、工藝簡(jiǎn)便、安全有效、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，值得在臨床推廣應(yīng)用。