煙臺地區(qū)HIV反應(yīng)性獻(xiàn)血者追蹤檢測與歸隊(duì)結(jié)果分析

宋和蔚，孫宗祥，徐明華，欒希英

(1濱州醫(yī)學(xué)院，山東 煙臺 264003；2煙臺市中心血站)

目前，國內(nèi)普遍采用ELISA和核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)(NAT)進(jìn)行血液初篩，由于不同廠家的ELISA試劑包被抗原抗體片段不同，導(dǎo)致檢測結(jié)果差異[1]，同時也提高了假陽性率[2]，致其被歸為不適宜獻(xiàn)血者，造成血液浪費(fèi)及獻(xiàn)血者隊(duì)伍的流失。根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)規(guī)定，本站制定了《血清學(xué)及NAT反應(yīng)性獻(xiàn)血者追蹤、屏蔽與歸隊(duì)操作規(guī)程》，采用ELISA 和單人份核酸檢測(ID-NAT)，電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(ECLIA)和WB作為補(bǔ)充，對HIV假反應(yīng)性者進(jìn)行追蹤檢測，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 2015年12月21日至2020年7月25日煙臺地區(qū)213 712份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本，對49名獻(xiàn)血者實(shí)施追蹤檢測。

1.2試劑與儀器 ELISA：4代HIV抗原和抗體試劑盒(試劑1)，3代HIV抗體試劑盒(試劑2)，STAR加樣儀、FAME24/20酶免分析儀(瑞士Hamilton)；NAT：Cobas s201核酸檢測系統(tǒng)及配套試劑(美國羅氏)，Chitas BSS1200核酸篩查系統(tǒng)及配套試劑(上海浩源)；ECLIA：Cobas E411分析儀及配套HIV抗原和抗體試劑盒(美國羅氏)。

1.3標(biāo)本采集與處理 血液初篩標(biāo)本：以旁袋留樣方式留取2份標(biāo)本，分置2支5 mL試管內(nèi)(含EDTA-K2)，1支用于酶免檢測，1支(帶分離膠)用于NAT檢測。追蹤檢測標(biāo)本：以靜脈采血法留取NAT檢測和酶免檢測標(biāo)本各1支(同上)，并填寫《反應(yīng)性獻(xiàn)血者跟蹤檢測采樣及結(jié)果告知記錄》。所有標(biāo)本冷鏈運(yùn)輸，2℃～8℃冰箱保存，72 h內(nèi)完成檢測。

1.4血液初篩模式和判定規(guī)則 ①ELISA：2種ELISA試劑同時檢測，S/CO<0.50為合格，0.50≤S/CO<1.00為灰區(qū)，S/CO≥1.00為單試劑反應(yīng)性；若標(biāo)本S/CO≥0.50，需對原標(biāo)本及其血袋小辮血進(jìn)行雙試劑雙孔復(fù)檢，復(fù)檢任一孔S/CO≥0.50判為不合格。②NAT：ELISA雙試劑反應(yīng)性標(biāo)本不進(jìn)行NAT檢測。Cobas s201、Chitas BSS1200分別為6、8個標(biāo)本混樣的HBV/HCV/HIV 聯(lián)合核酸檢測(MP-NAT)，結(jié)果無反應(yīng)性則標(biāo)本全部合格，結(jié)果為反應(yīng)性需拆分單檢，拆分檢測結(jié)果無反應(yīng)性判定為合格，拆分單檢反應(yīng)性判定為不合格。③ECLIA：任一ELISA試劑S/CO≥0.3的標(biāo)本或HIV RNA反應(yīng)性標(biāo)本需進(jìn)行ECLIA補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。HIV Ag-Ab1/2反應(yīng)性或HIV RNA反應(yīng)性標(biāo)本送CDC以WB試驗(yàn)確證。

1.5追蹤檢測及獻(xiàn)血者歸隊(duì)

1.5.1追蹤檢測條件 血清學(xué)反應(yīng)性者需同時滿足以下4個條件：①HIV Ag-Ab1/2單試劑反應(yīng)性或灰區(qū)；②NAT無反應(yīng)性；③WB試驗(yàn)確證陰性；④距上次獻(xiàn)血時間超過3個月。ID-NAT反應(yīng)性者需同時滿足2個條件：①HIV Ag-Ab1/2無反應(yīng)性；②HIV RNA反應(yīng)性。追蹤檢測間隔期以7 d為周期遞增。對符合追蹤檢測條件且愿意者告知追蹤檢測流程，可追蹤檢測。

1.5.2追蹤檢測項(xiàng)目 ①2種ELISA試劑和1種ECLIA試劑檢測HIV Ag-Ab1/2；②ID-NAT；③HIV Ag-Ab1/2反應(yīng)性和HIV RNA反應(yīng)性標(biāo)本以WB方法確證。其中任一試劑出現(xiàn)反應(yīng)性，則長期屏蔽。

1.5.3歸隊(duì)條件 需同時滿足以下3個條件：①2種ELISA試劑和1種ECLIA試劑檢測HIV Ag-Ab1/2均無反應(yīng)性；②ID-NAT無反應(yīng)性；③法規(guī)規(guī)定的其他篩查項(xiàng)目均無反應(yīng)性。追蹤檢測1次，對符合條件的獻(xiàn)血者經(jīng)審批可在獲批90 d后獻(xiàn)血。NAT追蹤檢測獻(xiàn)血者不解除屏蔽。

1.6數(shù)據(jù)處理 應(yīng)用SPSS26.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)。以受試者工作特征曲線(ROC)分析試劑診斷價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1HIV初篩和確證結(jié)果 213 712份血液標(biāo)本的初篩及確診結(jié)果見表1。

2.2三種試劑診斷能力評價(jià) 試劑1、試劑2、ECLIA試劑的ROC的曲線下面積(AUC)，95%置信區(qū)間下取3種試劑的最大約登指數(shù)其對應(yīng)的最佳臨界值及特異度見表2。

2.3追蹤檢測結(jié)果 49名追蹤檢測者初篩結(jié)果：ELISA單試劑反應(yīng)性48名，HIV RNA反應(yīng)性1名。追蹤檢測過程中，1名初篩僅HIV RNA反應(yīng)性獻(xiàn)血者在追蹤第28天ELISA雙試劑陽性，WB確證陽性；ELISA單試劑反應(yīng)性12名，灰區(qū)6名，WB確認(rèn)均陰性；ELISA、NAT、ECLIA均無反應(yīng)性30名，允許歸隊(duì)(62.5%)，其中16名再次參加獻(xiàn)血，15名檢測結(jié)果合格，1名ELISA結(jié)果處于灰區(qū)，NAT、ECLIA無反應(yīng)性，WB確證陰性。

表1 HIV初篩和確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 三種試劑診斷能力的評價(jià)

2.4獻(xiàn)血次數(shù)與歸隊(duì)結(jié)果比較 歸隊(duì)的30名中，不同獻(xiàn)血次數(shù)的追蹤檢測合格率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.014，P=0.907)、歸隊(duì)后的獻(xiàn)血率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.046)。見表3。

表3 獻(xiàn)血次數(shù)與追蹤檢測結(jié)果情況[n(%)]

3 討論

ELISA產(chǎn)生假反應(yīng)性的原因有標(biāo)本溶血、自身免疫性疾病、病毒或細(xì)菌感染等。有研究表明，4代試劑包被成分增加了鼠抗體的HIV P24抗體，導(dǎo)致其假反應(yīng)性高于3代試劑，但4代試劑可以縮短窗口期[3]。機(jī)體感染HIV后，外周血中依次能檢測到病毒核酸、HIV P24抗原、抗-HIV。NAT在捕捉HIV ELISA 窗口期獻(xiàn)血者方面起到重要作用[4]。長期不進(jìn)展者(LTNPs)與HIV精英控制者(ECs)在未經(jīng)抗病毒治療前病毒水平常較低[5]，NAT易出現(xiàn)漏檢。我國有研究報(bào)道，獻(xiàn)血者中存在初篩ELISA抗-HIV反應(yīng)性、NAT非反應(yīng)性且WB確證試驗(yàn)陽性的標(biāo)本，推測為ECs或LTNPs[6]。由此，NAT檢測與ELISA檢測不能互為替代。本研究顯示，3種檢測試劑AUC均>0.5，但ECLIA檢測能力最優(yōu)，其分析時間短、結(jié)果準(zhǔn)確、操作方便，將其作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)，可以共同發(fā)揮檢測優(yōu)勢，降低獻(xiàn)血者歸隊(duì)的風(fēng)險(xiǎn)。

目前，我國大多數(shù)血站自行設(shè)置灰區(qū)，灰區(qū)的設(shè)置價(jià)值有限，并不能提高HIV真陽性的例數(shù)。本研究中49名獻(xiàn)血者追蹤檢測結(jié)果中6名因灰區(qū)被繼續(xù)屏蔽，但I(xiàn)D-NAT、ECLIA無反應(yīng)性，WB確證試驗(yàn)陰性，考慮對該6名獻(xiàn)血者進(jìn)行二次追蹤檢測并對灰區(qū)設(shè)置的合理性進(jìn)行研究；歸隊(duì)后重復(fù)獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血率高于首次獻(xiàn)血者，說明重復(fù)獻(xiàn)血者歸隊(duì)后獻(xiàn)血意愿較強(qiáng)，追蹤檢測對挽回固定獻(xiàn)血者的流失具有重要意義。

總之，通過分析血液初篩及追蹤檢測實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析不同檢測方法的差異，將誤屏蔽的獻(xiàn)血者有效歸隊(duì)，既是充分利用資源的現(xiàn)實(shí)需要，也有利于保護(hù)獻(xiàn)血者的積極性。