人乳頭狀瘤病毒高危亞型的表達(dá)特征及其對疫苗接種的指導(dǎo)意義

孫莉莉

(臨沂市河?xùn)|區(qū)人民醫(yī)院，山東 臨沂 276000)

人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)是一種嗜上皮性病毒，在人和動物中分布廣泛，有高度的特異性，多數(shù)HPV可引起人類良性的腫瘤和疣，也可引起細(xì)胞增殖失控。目前，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的HPV中，14種類型具有高度危險(xiǎn)性。近年來已陸續(xù)研發(fā)出了二價、四價、九價HPV疫苗，為HPV的有效預(yù)防提供了有力的支持。本研究采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)(RT-PCR)開展14型高危HPV檢測，了解門診病例HPV帶毒表達(dá)，為有效防治HPV提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 2017年1月—2019年12月共采集來本院就診的臨床病例標(biāo)本2 505份，均為女性，年齡16～72歲，平均(38.16±7.54)歲。

1.2方法 高危HPV核酸檢測試劑盒(廣東省潮州凱普生物化學(xué)有限公司)，LineGene 9660 RT-PCR儀等，標(biāo)本的處理與提取、PCR 擴(kuò)增及質(zhì)量控制按照試劑說明書進(jìn)行。采集就診者宮頸脫落細(xì)胞樣本，利用RT-PCR對14種高危型HPV DNA定性檢測，對其中16、18分型鑒定，另外12種高危型HPV(31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)用FAM熒光檢測通道進(jìn)行定性檢測。

1.3指標(biāo)評價 利用RT-PCR儀配套軟件進(jìn)行自動分析，得到各樣本在FAM、HEX、ROX熒光檢測通道和內(nèi)對照β-globin在Cy5熒光檢測通道的Ct值。Ct值40時，其它熒光檢測通道Ct值顯示為Undet，結(jié)果判斷為陰性；其它熒光檢測通道Ct值≤40時判斷為陽性；40

2 結(jié)果

2.1HPV檢出情況 2505份標(biāo)本中檢出HPV陽性人428例，陽性率為17.09%。其中，三檢測通道共HPV16型121株，18型39株，其他12型326株，總表達(dá)數(shù)486，存在多型株復(fù)合感染。根據(jù)人群年齡特征，將人群分為5組，各年齡組檢出型株組合情況見表1。

表1 2505例宮頸脫落細(xì)胞14種高危HPV檢測結(jié)果表達(dá)分布(n)

2.2各年齡組病例陽性表達(dá)率比較 各年齡組HPV總陽性率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.83，P=0.029)，以≤25歲年齡組陽性率最高，但與≥56歲組比較尚無顯著性(χ2=1.97，P=0.161)。

2.3各型間陽性率比較 因其它12型未分型，只做 HPV16、HPV18型間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，HPV16陽性率為4.83%(121/2505)，HPV18陽性率為1.56%(39/2505)。二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=42.36，P<0.01)。

2.4單、多重感染情況推斷 根據(jù)表中數(shù)據(jù)，在不考慮其他12型高危亞型的感染組合情況下，單種亞型感染的確定性概率為4.03%(101/2505)，感染兩種亞型以上的確定性概率為2.24%(56/2505)。二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.73，P<0.01)。

3 討論

臨床上開展婦科宮頸脫落細(xì)胞高危HPV檢測對宮頸細(xì)胞異常及宮頸癌的病理學(xué)診斷具有輔助作用，同時通過對高危HPV在人群表達(dá)特征的分析，對指導(dǎo)接種疫苗也具有積極的指導(dǎo)意義。臨床上通過RT-PCR技術(shù)可對HPV及不同亞型進(jìn)行有效的定性檢測，該技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法，該法在HPV的檢測上有著廣泛的應(yīng)用。

本實(shí)驗(yàn)室對14種HPV高危亞型進(jìn)行定性檢測，并對其中HPV16、HPV18兩種亞型進(jìn)行分類，在FAM通道中，將其余12種高危亞型定性檢測。2505份標(biāo)本中，陽性標(biāo)本428例，14種HPV亞型人群總表達(dá)率為17.09%；在不同年齡組中，25歲以下年齡組感染率明顯高于其他年齡組，且存在一定比例的多重感染。本資料出現(xiàn)了16、18型與其他12種亞型組合多重感染，但受檢測方法的限制無法進(jìn)行多重感染比例的判定。

來自世界各國宮頸癌組織標(biāo)本的研究發(fā)現(xiàn)，HPV16和18型感染率最高，也是主要致病亞型[1]。針對高危型HPV的研究已充分證實(shí)感染與宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)病率正相關(guān)性，其中HPV16感染類型檢出率最高，可作為臨床診斷、預(yù)后效果評估的指標(biāo)[1]，該型是最重要的導(dǎo)致高級別宮頸上皮病變的危險(xiǎn)因素[2]。近年來，多種HPV疫苗在國內(nèi)外陸續(xù)上市，在全球推廣使用并取得顯著效果，但仍存在一些不足，而且并無治療性HPV疫苗上市[3]。目前已上市的HPV預(yù)防性疫苗按照亞型成分包括二價疫苗(16，18)、四價疫苗(16，18，6，11)、九價疫苗(16，18，6，11，31，33，45，52，58),其中HPV6、11因臨床上的低度危險(xiǎn)性因而未列入高危亞型。

目前，在中國HPV疫苗接種覆蓋率仍極低，主要原因可能與民眾對疫苗種類的選擇、接種的最佳年齡及疫苗接種程序與價格等多種因素存在困惑相關(guān)。但實(shí)踐證明,通過HPV疫苗接種和篩查可以大幅度降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率。與篩查相比，HPV疫苗不僅可以提供更長期的保護(hù)作用，而且最具有成本效益[4]。有調(diào)查表明，高中生HPV感染相關(guān)知信行總得分處于中等偏下水平，可以知信行理論為指導(dǎo)的健康教育干預(yù)方法能有效提高高中生的HPV感染知信行。有報(bào)道HPV知曉率及HPV疫苗知曉率較高，但對HPV疫苗相關(guān)知識了解并不深入；HPV疫苗接種意愿高，但接種率低，主要原因?yàn)橐呙缳M(fèi)用昂貴[5]。因此，需加強(qiáng)對相關(guān)知識的健康教育，同時可倡導(dǎo)政府制定相關(guān)優(yōu)惠政策，使低齡女孩及其家長了解宮頸癌及HPV疫苗相關(guān)知識。在疫苗選擇上，可以綜合考慮價格、規(guī)避重點(diǎn)致病風(fēng)險(xiǎn)的原則，使低齡女孩盡早接種HPV疫苗。