基于Caco-2細(xì)胞模型的3種大豆肽降膽固醇能力研究

張慧娟，付冰冰，王 靜

（北京工商大學(xué)食品與健康學(xué)院 中國(guó)-加拿大食品營(yíng)養(yǎng)與健康聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室（北京） 北京100048）

心腦血管疾病是我國(guó)乃至全球致死率最高的疾病，而高血脂癥則是心腦血管疾病的主要誘因。由于藥物的副作用很難消除，很多研究開始側(cè)重于尋求無(wú)毒、健康的藥物替代品，因此食源性功能成分對(duì)人體脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用得到越來(lái)越多的關(guān)注[1]。大豆多肽因其多樣的生物功效得到越來(lái)越廣泛的關(guān)注[1-5]。Anderson 等[6]證明人體每天攝入25 g 大豆蛋白，可以降低血清中的低密度脂蛋白、膽固醇和甘油三酯的含量分別為9.2%，12.9%和0.5%。也有研究表明連續(xù)5 周每天攝入20 g 大豆蛋白與80 mg 異黃酮，可以降低中年人患冠心病的發(fā)病率[7]；含高植物蛋白的豆奶可以顯著降低血清中的膽固醇含量[8]。據(jù)報(bào)道，大豆蛋白水解物（SPH）具有比完整大豆蛋白更高的體內(nèi)降膽固醇能力[9]。大豆多肽的制取一般采用單一、多種專一、非專一性蛋白酶水解而得。大豆多肽具有良好的溶解性、吸水性等理化性質(zhì)，并具有易吸收，降膽固醇，降血壓，抗氧化，抗炎等多種生理功能[10]。降膽固醇大豆多肽經(jīng)大豆蛋白加工處理，一般由3～6 個(gè)氨基酸組成[11]。張清明[12]以大豆多肽、谷胱甘肽等制成調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的功能性飲品。此外Zhong等[13]以喂食高脂飼料的小鼠為動(dòng)物模型，探究了大豆蛋白酶解產(chǎn)物調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的生物活性，且進(jìn)一步研究表明源于大豆蛋白的多肽WGAPVT（WT-6）和WGAPSL（WL-6）具有體外降膽固醇的生物活性；也有研究表明利用多肽LPVPR（LR-5）灌胃小鼠2 d 后，可以降低小鼠體內(nèi)的總膽固醇和低密度脂蛋白含量[14]，而利用大豆多肽VAWWMY（VY-6）灌胃大鼠1 h 后，表現(xiàn)出抑制膽固醇在大鼠小腸、肝臟及血清中吸收的能力[15]?；钚远嚯牡纳锢枚仁腔钚远嚯倪M(jìn)一步開發(fā)利用的限制性因素[16]，因此利用Caco-2 細(xì)胞模型探究多肽的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收機(jī)制也得到了越來(lái)越廣泛的關(guān)注[17]。

本研究以具有降膽固醇生物活性的3 種大豆多肽WL-6、VY-6 和LR-5 為研究對(duì)象，探究其在Caco-2 細(xì)胞模型中抑制膽固醇吸收的生物活性以及轉(zhuǎn)運(yùn)吸收機(jī)制，以期為活性多肽的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收機(jī)制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

人源腸Caco-2 細(xì)胞，北京協(xié)和醫(yī)院；多肽VY-6、LR-5、WL-6、WT-6，紫域多肽合成有限公司；DMEM 培養(yǎng)基、MEM 培養(yǎng)基、PBS 緩沖液、青霉素-鏈霉素、胰蛋白酶、非必需氨基酸、HEPES緩沖液，美國(guó)Hyclone 公司；胎牛血清（FBS），德國(guó)PAN 公司；22-NBD 膽固醇，美國(guó)Sigma 公司；辛伐他汀，美國(guó)TGI 公司。

1.2 儀器與設(shè)備

GALAXY S 二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱，英國(guó)RS Biotech 公司；Axiovert 200 光學(xué)倒置顯微鏡，德國(guó)Zeiss 公司；生物安全柜，美國(guó)NUAIRE 公司；3K15高速冷凍離心機(jī)，德國(guó)SIGMA Laborzentrifugen GmbH 公司；Synergy H1MDG 多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTek 公司；HH-2 恒溫水浴鍋，金壇市杰瑞爾電器有限公司；KQ-700GVDV 多用途恒溫超聲清洗儀，昆山市超聲波清洗器；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；液質(zhì)聯(lián)用儀（LC-MS），美國(guó)Agilent 公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 Caco-2 細(xì)胞傳代與培養(yǎng) 采用MEM 培養(yǎng)基，加入20%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素、1%非必需氨基酸、1%HEPES 緩沖液配成。人源腸Caco-2 細(xì)胞為25T 瓶，代數(shù)為30。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)，用移液管吸取PBS 緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次后，加入0.5 mL 0.05%胰蛋白酶，搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，確定胰蛋白酶鋪滿培養(yǎng)瓶后，放入37 ℃，5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中消化5 min，顯微鏡下觀察細(xì)胞間連粘斷開呈單一形態(tài)并且大量細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中脫落時(shí)，加入3 mL MEM 培養(yǎng)基，用3 mL 一次性移液管輕微吹打，將培養(yǎng)基和細(xì)胞移入15 mL 離心管中，1 000 r/min 離心5 min 后盡可能完全吸去培養(yǎng)基，加入3 mL 培養(yǎng)基輕柔吹打混勻50 下后，以1∶3的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代第1 天后換液，此后隔天換液，顯微鏡下觀察，待細(xì)胞長(zhǎng)到80%時(shí)繼續(xù)傳代，此時(shí)可用1∶1 的體積比由25T 細(xì)胞瓶傳為75T 細(xì)胞瓶。

1.3.2 Caco-2 細(xì)胞模型的建立

1.3.2.1 Transwell 培養(yǎng)板包被 研究表明，鼠尾膠原在低濃度下包被Transwell 小室膜可以增加Caco-2 細(xì)胞的貼壁性，提高建模成功率[18]。將4 ℃存放的鼠尾膠原迅速溶于0.006 mol/L 無(wú)菌乙酸中，配制成質(zhì)量濃度0.012 mg/mL 的鼠尾膠原稀釋液，24 孔Transwell 板每孔55 μL，搖勻，生物安全柜中晾干過(guò)夜后用于接種細(xì)胞。

1.3.2.2 Caco-2 細(xì)胞培養(yǎng)分化 分化Caco-2 細(xì)胞應(yīng)用DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，DMEM 培養(yǎng)基中加入20%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素、1%非必需氨基酸及1%HEPES 緩沖液。細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化、離心、吸去培養(yǎng)基后加入1 mL 培養(yǎng)基，吹打混勻50次后用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。將細(xì)胞數(shù)量用培養(yǎng)基調(diào)整到1×105個(gè)/孔，將細(xì)胞吹打混勻，接種于24孔Transwell 小室中，基頂側(cè)100 μL、基底側(cè)600 μL 培養(yǎng)基，輕搖后放入37 ℃，5%CO2恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，過(guò)夜換液。此后7 d 隔天換液，第8 天時(shí)每天換液，第21 天時(shí)細(xì)胞分化完成，進(jìn)行模型驗(yàn)證[19]。

1.3.3 22 -NBD 膽固醇膠束溶液配制及其細(xì)胞毒性測(cè)定 固醇類的熒光類似物是一種便利的試驗(yàn)介質(zhì)，可以進(jìn)行細(xì)胞中物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、分配、蛋白-配體互相作用的研究[20]。本試驗(yàn)選用22-NBD 膽固醇作為膽固醇膠束的基本原料，22-NBD 膽固醇的熒光基團(tuán)連接于膽固醇第22 位碳側(cè)鏈上，在激發(fā)光469 nm 和發(fā)射光537 nm 波長(zhǎng)處發(fā)出綠色熒光，熒光強(qiáng)度和膽固醇濃度成正比。

膽固醇微膠束：100 μmol/L 22-NBD 膽固醇、1 mmol/L 油酸、0.5 mmol/L 單酰甘油、6.6 mmol/L牛黃膽酸鈉、0.1 mmol/L 大豆卵磷脂的微膠束溶解于1%二甲基亞砜的Hanks 溶液中，0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾除菌，37 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

對(duì)數(shù)期消化細(xì)胞，96 孔板以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞，100 μL 每孔孵育12 h，將配制好的膽固醇微膠束溶液以每孔10 μL 的體積加入孔中，放在振板器上振動(dòng)后，于37 ℃，5%CO2條件下孵育12 h。每孔加入10 μL CCK-8 溶液孵育90 min，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處的吸光值，檢測(cè)膽固醇微膠束對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

1.3.4 辛伐他汀的激活及對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定 將0.4 g 辛伐他汀溶解在100 μL 無(wú)水乙醇中，加入300 μL 0.1 mmol/L 的氫氧化鈉，50 ℃水浴2 h，加入等體積的0.1 mmol/L HCl，用雙蒸水將其稀釋至1 mL，2 μm 濾膜過(guò)濾，即為1 mol/L 辛伐他汀原液。將辛伐他汀原液用Hanks 溶液稀釋至5，10，20，40，60，80，100 mmol/L，待用。

取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，胰酶消化后以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞，100 μL 每孔孵育21 d，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基，用Hanks 緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次，以每孔100 μL 體積分別加入配制好的濃度梯度為5，10，20，40，60，80，100 mmol/L 辛伐他汀溶液，5 個(gè)平行。在37 ℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育24 h 后，每孔加入10 μL CCK-8 溶液孵育90 min，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長(zhǎng)處的吸光值，檢測(cè)不同濃度辛伐他汀對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

1.3.5 辛伐他汀體外降膽固醇能力驗(yàn)證 選取細(xì)胞存活率在90%以上的辛伐他汀濃度組作為降膽固醇能力驗(yàn)證試驗(yàn)組。取對(duì)數(shù)期細(xì)胞，胰酶消化后以1×105個(gè)/孔細(xì)胞量培養(yǎng)細(xì)胞，每組5 個(gè)平行，100 μL 每孔孵育21 d，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基，用Hanks緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次，以每孔100 μL 體積加入配制好的辛伐他汀與22-NBD 膽固醇膠束混合溶液，在37 ℃，5%CO2條件下孵育3 h 后，用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處的熒光值，檢測(cè)辛伐他汀降膽固醇能力。

1.3.6 3 種多肽降膽固醇能力驗(yàn)證

1.3.6.1 3 種多肽束縛膽固醇膠束的能力 參考Homma 等[21]的方法，略有改動(dòng)，測(cè)定蛋白對(duì)體外微膠束中膽固醇溶解度的影響。膽固醇微膠束成分：100 μmol/L 22-NBD 膽固醇、1 mmol/L 油酸、0.5 mmol/L 單酰甘油、6.6 mmol/L 牛黃膽酸鈉、0.1 mmol/L 大豆卵磷脂。分別向微膠束溶液中添加多肽VY-6，LR-5，WL-6，使每種蛋白的最終濃度分別為0.5，1，1.5 mmol/L，每組3 個(gè)平行。使用超聲萃取儀將配制好的蛋白-微膠束混合液超聲溶解，然后置于37 ℃，5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，10 200 r/min 離心30 min。收集上清液，用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處各組上清液的熒光強(qiáng)度值。

1.3.6.2 3 種多肽對(duì)細(xì)胞攝入膽固醇的影響 細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)80%～90%后按照1×105個(gè)/孔細(xì)胞量接種到6 孔板中，每組5 個(gè)平行，接種后隔天換液，1 周后每天換液，培養(yǎng)至21 d 時(shí)用顯微鏡觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況。設(shè)立常規(guī)培養(yǎng)組（空白）、22-NBD膽固醇膠束組（NCM）、22-NBD 膽固醇膠束+辛伐他汀組（藥物）、22-NBD 膽固醇膠束+VY-6 組（CVY）、22-NBD 膽固醇膠束+LR-6 組（CLR）、22-NBD 膽固醇膠束+WL-6 組（CWL），所有多肽均為1 mmol/L，將上述培養(yǎng)基加入已分化好的Caco-2細(xì)胞中。每組5 個(gè)平行，在37 ℃，5%CO2條件下孵育3 h 后，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基，換為新培養(yǎng)基，用酶標(biāo)儀測(cè)定470 nm/535 nm 波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度值。

1.3.6.3 3 種多肽對(duì)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力的影響 取貼壁80%～90%細(xì)胞，0.05%胰酶消化后，1 000 r/min 離心5 min，以1×105個(gè)/孔的細(xì)胞量接種于24孔Transwell 板中，以基頂側(cè)100 μL 培養(yǎng)基、基底側(cè)600 μL 培養(yǎng)基建立模型，至21 d 細(xì)胞分化完成。第21 天時(shí)吸去模型中的培養(yǎng)基，用Hanks 緩沖溶液潤(rùn)洗細(xì)胞2 次，在基頂側(cè)分別加入100 μL由1.3.3 節(jié)稀釋好的22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L VY-6 混溶的Hanks 緩沖液，22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L LR-5 混溶的Hanks 緩沖液，22-NBD 膽固醇微膠束與2 mmol/L WL-6 混溶的Hanks 緩沖液，基底側(cè)加入600 μL Hanks 緩沖溶液，每組5 個(gè)平行。轉(zhuǎn)運(yùn)120 min 后，收集基底側(cè)溶液，于470 nm/535 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定熒光強(qiáng)度值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 22-NBD 膽固醇最適濃度的選擇

22-NBD 膽固醇膠束濃度會(huì)對(duì)細(xì)胞造成溶解現(xiàn)象，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，所以需要選擇一個(gè)適宜濃度的22-NBD 膽固醇膠束溶液作為高脂細(xì)胞模型，利用1.3.3 節(jié)所述膠束溶液配制方法，用Hanks 稀釋膠束溶液母液，培養(yǎng)24 h 后加入CCK-8 顯色，結(jié)果如圖1所示，與對(duì)照組相比，在母液的基礎(chǔ)上稀釋到8 倍的22-NBD 膽固醇膠束無(wú)顯著細(xì)胞毒性，其余3 個(gè)稀釋倍數(shù)的膽固醇膠束皆對(duì)細(xì)胞有毒性。

2.2 辛伐他汀最適濃度的選擇

2.2.1 辛伐他汀CCK-8 試驗(yàn) 本研究使用辛伐他汀作為藥物對(duì)照。辛伐他汀是土曲霉發(fā)酵產(chǎn)物的合成衍生物，屬于他汀類降血脂藥物，可以起到控制血脂，預(yù)防心血管疾病的作用。辛伐他汀為羥甲基戊二酸單酰輔酶A 合酶（HMG-CoA）的抑制劑，其降膽固醇機(jī)制主要是通過(guò)對(duì)該酶特異的競(jìng)爭(zhēng)性抑制使HMG-CoA 無(wú)法轉(zhuǎn)變?yōu)榧谆u戊酸，從而阻斷膽固醇的合成，減少血清內(nèi)膽固醇[22]。丁宏輝等[23]研究表明辛伐他汀不僅能顯著降低血清內(nèi)甘油三酯和膽固醇，還可以改善脂譜，即辛伐他汀顯著降低高膽固醇患者LDLC/HDLC 的比值與ApoB100/ApoAI，由此降低心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)性。

圖2可知，在5～100 μmol/L 濃度范圍內(nèi)，辛伐他汀對(duì)細(xì)胞皆有顯著毒性，而20 μmol/L 以內(nèi)細(xì)胞存活率為90%以上，可以作為合適的試驗(yàn)濃度，故選用5，10，20 μmol/L 濃度的辛伐他汀檢測(cè)其抑制細(xì)胞攝取膽固醇的能力。

2.2.2 辛伐他汀降膽固醇試驗(yàn) 如圖3所示，20 μmol/L 的辛伐他汀抑制細(xì)胞攝取膽固醇率達(dá)到33.3%。在細(xì)胞耐受范圍內(nèi)達(dá)到了最佳降膽固醇的效果，故選用20 μmol/L 辛伐他汀作為藥物對(duì)照組。

圖2 CCK-8 法測(cè)定不同濃度辛伐他汀對(duì)細(xì)胞毒性的影響Fig.2 The effects of cytotoxicity of simvastatin in different concentrations by the CCK-8 method

圖3 不同濃度辛伐他汀體外細(xì)胞的膽固醇攝入能力Fig.3 Cholesterol uptake inhibition of simvastatin in Caco-2 cells in different concentrations

2.3 3 種多肽體外降膽固醇能力

2.3.1 3 種大豆肽抑制膽固醇吸收能力分析 由圖4可知，VY-6 在0.5～2 mmol/L 濃度內(nèi)抑制細(xì)胞攝取膽固醇能力隨濃度增加而增加，且在2 mmol/L 時(shí)抑制能力超過(guò)藥物組達(dá)到了43.14%；在2.5 mmol/L 時(shí)細(xì)胞攝取膽固醇量增加，顯著性與0.5 mmol/L 時(shí)相同，證明在此濃度下，多肽抑制膽固醇吸收能力效果下降；在3 mmol/L 時(shí)，抑制效果又明顯回升。本課題組前期的研究表明[24]，高濃度多肽對(duì)小鼠膽固醇吸收有促進(jìn)效果，故多肽在2.5 mmol/L 時(shí)膽固醇吸收能力會(huì)增強(qiáng)，而在3 mmol/L時(shí)多肽與22-NBD 膽固醇膠束共同作用下對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生了毒性，從而減少了膽固醇的攝入。

從圖5結(jié)果可知，在0.5～3 mmol/L 濃度下，LR-5 可以顯著（P＜0.05）抑制細(xì)胞吸收膽固醇作用，在2.5 mmol/L 時(shí)抑制率達(dá)到45.7%，而在3 mmol/L 時(shí)高濃度的多肽導(dǎo)致抑制率降低。

由圖6可知，多肽WL-6 在0.5～3 mmol/L 濃度范圍內(nèi)都可以顯著（P＜0.05）抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇吸收的能力，且在2 mmol/L 時(shí)抑制率最大，達(dá)到45.93%。在濃度為3 mmol/L 時(shí)也出現(xiàn)了抑制能力下降的現(xiàn)象。

2.3.2 3 種大豆肽抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力分析 抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇的吸收情況是降膽固醇的一方面，另一方面需要在Caco-2 轉(zhuǎn)運(yùn)模型中考察多肽介導(dǎo)膽固醇膠束轉(zhuǎn)運(yùn)情況。由圖7所示，NCM 組、藥物組與3 種多肽組進(jìn)行膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)情況的比較，WL-6 組中膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)抑制率最高，使轉(zhuǎn)運(yùn)率下降了30.7%，其后抑制效果顯著的是VY-6，使轉(zhuǎn)運(yùn)率下降了22.1%，WT-6 的抑制率為15.1%，而LR-5 對(duì)膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制效果并不明顯。

圖4 不同濃度VY-6 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.4 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of VY-6

圖5 不同濃度LR-5 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.5 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of LR-5

圖6 不同濃度WL-6 抑制細(xì)胞攝入膽固醇的能力Fig.6 The ability of cholesterol uptake inhibition in different concentrations of WL-6

2.3.3 3 種大豆肽抑制膽固醇膠束溶解能力分析 表1是不同濃度大豆肽對(duì)膽固醇膠束的物理作用溶解率的影響結(jié)果。設(shè)立空白對(duì)照組為100%，與其余3 種多肽比較發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的升高抑制率逐漸下降。其次，抑制率最高的是WL-6，在0.5 mmol/L 時(shí)達(dá)到14.2%，隨后隨著濃度升高抑制率逐漸下降。VY-6 的膽固醇溶解也隨濃度升高而下降，在2 mmol/L 時(shí)只有2.5%，僅為0.5 mmol/L 時(shí)的52%。而LR-5 在1 mmol/L 時(shí)膽固醇溶解率略有下降，之后在2 mmol/L 時(shí)顯著上升，整體呈上升趨勢(shì)。Chou 等[25]報(bào)道黑米醋中含有大量必需氨基酸與疏水性氨基酸，如：谷氨酸、亮氨酸、組氨酸和賴氨酸，可以顯著降低倉(cāng)鼠體重，同時(shí)降低血清和肝中的總膽固醇含量，提高膽汁酸脂質(zhì)含量和肝抗氧化能力。本文研究的3 種多肽均含有上述氨基酸，從而對(duì)膽固醇膠束具有物理束縛作用，進(jìn)而均有降膽固醇的生物活性。

圖7 3 種大豆肽抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力Fig.7 Three kinds of soybean peptides inhibition ability of cholesterol transport

3 結(jié)論

本文利用CCK-8 法選擇稀釋8 倍的22-NBD膽固醇膠束濃度為高脂組濃度，辛伐他汀抑制細(xì)胞對(duì)膽固醇吸收的試驗(yàn)選定藥物組濃度為20 μmol/L。對(duì)3 種多肽在不同濃度下降膽固醇能力的驗(yàn)證結(jié)果顯示，VY-6 在濃度為2 mmol/L 時(shí)抑制率最大（43.1%），LR-5 在濃度為2.5 mmol/L 時(shí)抑制率最大（45.7%），WL-6 在濃度為2 mmol/L 時(shí)抑制率最大（45.9%），WL-6 是3 種多肽中抑制膽固醇效果最好的多肽。在抑制膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)方面，WL-6 的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)抑制率為30.7%，效果最好，其次抑制效果顯著的是VY-6，抑制率達(dá)到了22.1%，LR-5 的抑制率僅為9.3%。在膽固醇溶解的抑制能力方面，多肽WL-6 在0.5 mmol/L 時(shí)抑制膽固醇溶解率效果最優(yōu)，達(dá)到14.2%，其次VY-6 在濃度為0.5 mmol/L 時(shí)抑制膽固醇溶解率為4.8%，而LR-5 在2 mmol/L 時(shí)抑制率為4.1%，其中VY-6、WL-6 的抑制效果隨濃度升高而下降，LR-5 抑制率隨濃度升高整體呈升高趨勢(shì)。本試驗(yàn)結(jié)果表明這3 種大豆肽均可以通過(guò)抑制細(xì)胞吸收膽固醇能力、膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)能力以及溶解率，實(shí)現(xiàn)降低體內(nèi)膽固醇的吸收，達(dá)到降低膽固醇水平的目的。綜合比較降膽固醇效果最高的多肽是WL-6。

表1 不同濃度大豆肽對(duì)膽固醇膠束溶解率的影響（%）Table 1 Different concentrations of soybean peptides influence of cholesterol solubility（%）