3-芳基-4-氧香豆素基苯基硫脲衍生物的合成及殺菌活性

陳美航, 羅海榮, 杜士杰, 魯?shù)劳? 張 迅,沈祖敏, 秦旭峰, 譙登賢, 吳文能

(1. 銅仁學院 材料與化學工程學院，貴州 銅仁 554300；2. 貴陽學院 食品與制藥工程學院，貴陽 550005)

硫脲類衍生物不僅是一類重要的有機合成中間體，而且具有抗菌[1-2]、抗病毒[3-6]、抗癌[7-8]、抗氧化[9]及殺蟲[10-11]等生物活性，一直以來備受關注；而香豆素化合物是一種存在于多種植物、細菌和真菌中的含氧雜環(huán)化合物，由于其分子中的苯并吡喃酮結構能夠通過弱鍵之間的相互作用使香豆素衍生物與生物體中的酶發(fā)生反應[12]，因而具有廣泛的生物活性，如：抗腫瘤[13-14]、抗菌[15]、抗氧化[16]、除草[17-18]等。本課題組前期以4-羥基香豆素為原料，經(jīng)氯化、醚化、異硫氰酸化和加成等反應，合成了一系列含香豆素的硫脲類衍生物，并發(fā)現(xiàn)其具有較好的殺菌活性，其中化合物1-(4-乙氧基苯基)-3-(3-(4-氧香豆素基) 苯基) 硫脲抑制水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌的EC50值分別為117.43 和90.52 μg/mL，優(yōu)于對照藥劑噻菌銅(EC50值分別為 195.24 和 120.25 μg/mL)[19-20]。為進一步尋找具有更高殺菌活性的含香豆素的硫脲類衍生物，本文在前期工作基礎上，擬用2- 或3-單取代苯胺、其他二取代苯胺與異硫氰酸 (4-香豆素氧基) 苯酯反應，合成一系列新型3-芳基-4-氧香豆素基苯基硫脲衍生物 (合成路線見圖式1)，對其結構進行了鑒定，并初步測試了其對水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌抑制活性。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥劑

JEOL-ECX500 型 500 MHz 核磁共振儀 (日本電子株式會社)；B11-2 溫度數(shù)顯磁力攪拌器 (上海司樂儀器有限公司)；RE-52AA 旋轉蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化有限公司)；ZF-2 型三用紫外分析儀 (上海市安亭電子儀器廠)；X-6 型數(shù)字顯微熔點測定儀 (北京泰克儀器有限公司)；IR Affinity-1 傅里葉變換分光光度計 (島津公司)；

所有的分析純、色譜級試劑以及其他試劑均購自商業(yè)供應商，除特別注明外，未經(jīng)進一步處理，直接使用；98% 4-羥基香豆素、90%硫光氣和取代苯胺 (天津希恩思生化科技有限公司)； 98%對氨基酚 (上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；99%噻唑酮 (浙江龍灣化工有限公司)。

牛肉膏培養(yǎng)基 (NB 液體培養(yǎng)基) 的配制：分別稱取3 g 牛肉膏、5 g 蛋白胨、1 g 酵母提取物及10 g 葡萄糖置于1 L 燒杯中，加入1 L 二次蒸餾水后用5 mol/L 的氫氧化鈉溶液調pH = 7 左右，121 ℃滅菌20 min 后室溫保存，備用。

1.2 供試植物病原細菌

水稻白葉枯菌Xanthomonas oryzae pv. oryzae和柑橘潰瘍病菌Xanthomonas citri subsp. citri 由貴州大學精細化工研究中心提供。

1.3 目標化合物的合成

1.3.1 異硫氰酸 (4-香豆素氧基) 苯酯 (3) 的合成 參考文獻[19-20]的方法進行。將7.59 g (30 mmol)4-(4-氨基苯氧基)-香豆素 (2)、3.0 mL 三乙胺和100 mL 氯苯加入250 mL 的三口瓶中，攪拌并加熱至35 ℃，滴加2.55 mL (36 mmol) 硫光氣和60.0 mL 氯苯混合溶液，采用薄層層析 (TLC)(V(乙酸乙酯):V(石油醚) = 1:4) 監(jiān)測反應至結束。待反應液冷卻至室溫后，用旋轉蒸發(fā)儀除去溶劑。殘留液中加入70 mL 水，攪拌，過濾，所得固體干燥后用無水乙醇重結晶，得到化合物3。白色固體，m.p. 146～148 ℃, 產(chǎn)率 87%.1H NMR (500 MHz，DMSO-d6), δ: 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz,2H, Ph-H), 7.16 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.48-7.43 (m, 2H,coumarin-6,8-H), 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.03(d, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-5-H);13C NMR (125 MHz,DMSO-d6), δ: 93.21, 115.31, 117.25, 122.31, 123.48, 125.10,128.22, 131.16, 133.35, 136.69, 151.52, 154.16, 161.35,165.93.

1.3.2 目標化合物 (4a～4m) 的合成 參考文獻[19-20] 的方法進行。將0.59 g (2.0 mmol) 化合物3、2.2 mmol 取代苯胺和25 mL 四氫呋喃加入100 mL 三口瓶中，室溫下攪拌，并采用TLC(V(乙酸乙酯) : V (石油醚) = 2 : 1) 監(jiān)測至反應結束。旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到白色固體，過濾，干燥，用甲醇重結晶，得到13 個3-芳基-4-氧香豆素基苯基硫脲衍生物 (4a～4m)。

3-苯基-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4a): 白色固體, m.p.165～167 ℃, 產(chǎn)率 86%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 224, 1 388,1 541, 1 606, 1 624, 1 716, 3 151, 3 322.1H NMR(500 MHz,DMSO-d6), δ: 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 7.13 (d, J = 6.5 Hz,2H, Ph-H), 7.31-7.49 (m, 7H, coumarin-6,8-H, Ph-H), 7.62 (d, J =8.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-7-H),8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.85 (s, 1H, NH), 9.92(s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 93.41,115.33, 117.14, 121.88, 123.54, 124.43, 125.06, 125.17,126.17, 129.01, 133.94, 138.44, 139.90, 148.99, 153.64,161.73, 166.53, 180.36. MS (ESI), m/z: 411.1 ([M+Na]+).C22H16N2O3S 計算值: C, 68.02; H, 4.15; N, 7.21. 實測值: C,67.98; H, 4.38; N, 7.31.

3-(2-甲基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4b): 白色固體,m.p. 167～169 ℃, 產(chǎn)率 82%; IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 224, 1 389,1 541, 1 606, 1 624, 1 716, 3 137, 3 323.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 2.30 (s, 3H, CH3), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H),6.97 (s, 1H, Ph-H), 6.98-7.62 (m, 9H, coumarin-6,8-H, Ph-H), 7.75(t, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H,coumarin-5-H), 9.83 (s, 1H, NH), 9.91 (s, 1H, NH);13C NMR(125 MHz, DMSO-d6), δ: 21.57, 93.37, 115.29, 117.15,121.65, 121.87, 123.55, 124.96, 125.07, 125.92, 126.21,128.88, 133.96, 138.29, 138.47, 139.73, 148.95, 153.63,161.74, 166.55, 180.26. MS (ESI), m/z: 425.9 ([M+Na]+).C23H18N2O3S 計算值: C, 68.64; H, 4.51; N, 6.96. 實測值: C,68.56; H, 4.58; N, 6.95.

3-(2,3-二甲基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4c): 白色固體, m.p. 174～176 ℃, 產(chǎn)率 80%; IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 226,1 386, 1 538, 1 606, 1 625, 1 714, 3 132, 3 336;1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 2.14 (s, 3H, CH3), 2.27 (s, 3H, CH3), 5.26 (s,1H, coumarin-3-H), 7.06-7.10 (m, 3H, Ph-H), 7.30 (d, J = 9.0 Hz,2H, Ph-H), 7.45-7.49 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.60 (d, J =9.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-7-H),8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.45 (s, 1H, NH), 9.68(s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 14.78, 20.59,93.38, 115.33, 117.13, 121.80, 123.55, 125.05, 125.97, 126.31,126.53, 128.65, 131.34, 133.93, 134.32, 137.69, 138.07,149.04, 153.64, 161.73, 166.55, 181.23. MS (ESI), m/z: 439.1([M+Na]+); C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21; H, 4.84; N, 6.73.實測值: C, 69.16; H, 4.92; N, 6.82.

3-(2,4-二甲苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4d): 白色固體, m.p. 175～177 ℃, 產(chǎn)率 78%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 224,1 387, 1 538, 1 606, 1 624, 1 712, 3 163, 3 332.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ: 2.21 (s, 3H, CH3), 2.27 (s, 3H, CH3), 5.26(s, 1H, coumarin-3-H), 7.00-7.11 (m, 3H, Ph-H), 7.31 (d, J = 8.5 Hz,2H, Ph-H), 7.45-7.49 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.59 (d, J = 9.5 Hz,2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.03 (d, J =8.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.36 (s, 1H, NH), 9.75 (s, 1H,NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 18.37, 21.13, 93.35,115.29, 117.14, 121.92, 123.56, 125.08, 126.52, 127.26,128.51, 130.29, 131.46, 133.96, 135.29, 136.34, 138.40,149.01, 153.61, 161.77, 166.58, 181.10. MS (ESI), m/z: 439.1([M+Na]+). C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21; H, 4.84; N, 6.73.實測值: C, 69.35; H, 4.78; N, 6.71.

3-(2,5-二甲苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4e): 白色固體, m.p. 176～178 ℃, 產(chǎn)率 82%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 276,1 389, 1 560, 1 606, 1 625, 1 707, 3 155, 3 322.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ: 2.21 (s, 3H, CH3), 2.27 (s, 3H, CH3), 5.26(s, 1H, coumarin-3-H), 6.98-7.11 (m, 3H, Ph-H), 7.31 (d, J =6.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.44-7.49 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.59(d, J = 7.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.03 (d, J = 7.5 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.39 (s, 1H, NH),9.77 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 18.01,21.00, 93.38, 115.31, 117.14, 121.90, 123.55, 125.07, 126.52,127.86, 128.99, 130.73, 131.32, 132.30, 133.94, 135.73 138.40, 149.06, 153.62, 161.75, 166.56, 180.99. MS (ESI),m/z: 439.1 ([M+Na]+). C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21;H, 4.84; N, 6.73. 實測值: C, 69.40; H, 4.78; N, 6.71.

3-(3,4-二甲苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4f): 白色固體, m.p. 177～178 ℃, 產(chǎn)率 85%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 219,1 392, 1 560, 1 605, 1 625, 1 703, 3 149, 3 331.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6), δ: 2.20 (s, 3H, CH3), 2.21 (s, 3H, CH3), 5.26(s, 1H, coumarin-3-H), 7.09-7.20 (m, 3H, Ph-H), 7.31 (d, J =8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.46-7.49 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.61 (d, J =8.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.5 Hz, 1H, coumarin-7-H),8.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.73 (s, 1H, NH), 9.79(s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 19.39, 20.02,93.38, 115.21, 117.14, 121.80, 122.25, 123.54, 125.86, 126.20,128.31, 129.96, 133.34, 133.94, 136.76, 137.37, 138.55,148.91, 153.64, 161.74, 166.54, 180.31. MS (ESI), m/z: 439.1([M+Na]+). C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21; H, 4.84; N, 6.73.實測值: C, 69.35; H, 4.76; N, 6.78.

3-(3,5-二甲苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4g): 白色固體, m.p. 175～177 ℃, 產(chǎn)率 82%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 222,1 384, 1 541, 1 620, 1 687, 3 168, 3 329.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 2.26 (s, 6H, CH3), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H),6.80 (s, 1H, Ph-H), 7.07 (s, 1H, Ph-H), 7.20 (s, 1H, Ph-H),7.31 (d, J = 7.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.47-7.50 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H,coumarin-7-H), 8.04 (d, J = 7.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.75(s, 1H, NH), 9.84 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSOd6), δ: 21.48, 93.37, 115.32, 117.13, 121.81, 122.19, 123.54,125.05, 126.24, 126.82, 133.93, 138.08, 138.52, 139.57,148.96, 153.64, 161.73, 166.53, 180.23. MS (ESI), m/z: 439.1([M+Na]+). C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21; H, 4.84; N, 6.73.實測值: C, 69.18; H, 4.87; N, 6.79.

3-(2-乙基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4h): 白色固體,m.p. 173～175 ℃, 產(chǎn)率 78%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 229, 1 386,1 541, 1 606, 1 624, 1 710, 3 156, 3 337.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 1.16 (t, J = 7.0 Hz, 3H, CH3), 2.60-1.55 (m, 2H,CH2), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 7.21-7.26 (m, 4H, Ph-H),7.30 (d, J = 8.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.42-7.46 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.63 (d, J = 8.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.70 (t, J = 7.5 Hz, 1H,coumarin-7-H), 8.00 (d, J = 7.5 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.37(s, 1H, NH), 9.78 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSOd6), δ: 14.89, 24.55, 93.39, 115.31, 117.10, 121.88, 123.52,125.01, 126.50, 126.61, 127.52, 129.10, 129.40, 133.88,137.23, 138.44, 141.25, 149.08, 153.62, 161.73, 166.52,181.52. MS (ESI), m/z: 439.1 ([M +Na]+). C24H20N2O3S 計算值: C, 69.21; H, 4.84; N, 6.73. 實測值: C, 69.19; H, 4.94; N,6.76.

3-(2-甲氧基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4i): 白色固體, m.p. 181～183 ℃, 產(chǎn)率 80%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 224,1 387, 1 538, 1 606, 1 624, 1 705, 3 137, 3 332.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 3.86 (s, 3H, OCH3), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H),6.94-7.18 (m, 3H, Ph-H), 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H, Ph-H),7.46-7.51 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.69 (d, J = 8.5 Hz, 2H,Ph-H), 7.78 (t, J = 7.5 Hz, 1H, coumarin-7-H), 7.84 (d, J =7.5 Hz, 1H, Ph-H), 8.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H, coumarin-5-H),9.27 (s, 1H, NH), 10.05 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz,DMSO-d6), δ: 56.24, 93.39, 112.09, 115.33, 117.14, 120.39,121.81, 123.55, 125.06, 126.11, 126.70, 128.12, 133.95,138.02, 138.41, 148.94, 152.72, 153.65, 161.72, 166.52,180.21. MS (ESI), m/z: 441.7 ([M+Na]+). C23H18N2O4S 計算值: C, 66.01; H, 4.34; N, 6.69. 實測值: C, 66.11; H, 4.28; N,4.29.

3-(2-乙氧基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4j): 白色固體, m.p. 189～190 ℃, 產(chǎn)率 75%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 223,1 389, 1 541, 1 606, 1 625, 1 707, 3 125, 3 332.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 1.35 (t, J = 7.0 Hz, 3H, CH3), 4.08-4.11 (m, 2H,OCH2), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 6.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H,Ph-H), 7.16-7.19 (m, 2H, Ph-H), 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H, Ph-H), 7.47-7.50 (m, 2H, coumarin-6,8-H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz,2H, Ph-H), 7.74 (t, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H), 7.88 (d, J =7.5 Hz, 1H, Ph-H), 8.04 (d, J = 7.5 Hz, 1H, coumarin-5-H),9.17 (s, 1H, NH), 9.92 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz,DMSO-d6), δ: 15.03, 64.21, 92.96, 115.09, 116.91, 120.09,123.32, 124.83, 125.98, 126.37, 128.38, 129.33, 132.26,133.71, 138.04, 148.04, 151.69, 153.41, 154.70, 161.47,166.28, 181.40. MS (ESI), m/z: 455.3 ([M+Na]+).C24H20N2O4S 計算值: C, 66.65; H, 4.66; N, 6.48. 實測值: C,66.46; H, 4.78; N, 6.39.

3-(2-氟苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4k): 白色固體,m.p. 183～185 ℃, 產(chǎn)率 77%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 228, 1 389,1 541, 1 606, 1 624, 1 716, 3 172, 3 331.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 7.18 (d, J = 6.5 Hz,2H, Ph-H), 7.34-7.48 (m, 4H, coumarin-6,8-H, Ph-H), 7.60 (d, J =7.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.73 (t, J =8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.94 (s, 1H, NH), 10.06 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz,DMSO-d6), δ: 93.41, 115.31, 115.72, 117.15, 121.97, 123.55,125.08, 126.32, 127.02, 127.08, 133.96, 136.21, 138.32,149.08, 153.63, 161.74, 166.53, 180.72. MS (ESI), m/z: 429.4([M+Na]+). C22H15FN2O3S 計算值: C, 65.01; H, 3.72; N, 6.89.實測值: C, 65.13; H, 3.95; N, 6.92.

3-(3,4-二氯苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4l): 白色固體, m.p. 198～199 ℃, 產(chǎn)率 67%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 228,1 382, 1 539, 1 627, 1 606, 1 725, 3 149, 3 331.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H), 7.33 (d, J = 9.0 Hz,2H, Ph-H), 7.39-7.49 (m, 5H, coumarin-6,8-H, Ph-H), 7.58 (d, J =9.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.73 (t, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H),8.03 (d, J = 7.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.89 (s, 1H, NH),10.09 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz, DMSO-d6), δ: 93.41,115.28, 116.95, 117.16, 122.09, 123.55, 125.01, 125.54,126.51, 126.77, 133.99, 137.20, 138.05, 149.26, 153.62,153.89, 155.83, 161.746, 166.52, 180.67. MS (ESI), m/z: 479.6([M+Na]+). C22H14Cl2N2O3S 計算值: C, 57.78; H, 3.09; N,6.13. 實測值: C, 57.66; H, 3.16; N, 6.27.

3-(3-甲基苯基)-4-氧香豆素基苯基硫脲 (4m): 白色固體, m.p. 178～178 ℃, 產(chǎn)率 80%. IR (KBr), ν/cm?1: 1 145, 1 223,1 382, 1 539, 1 606, 1 625, 1 724, 3 157, 3 339.1H NMR (500 MHz,DMSO-d6), δ: 2.23 (s, 3H, CH3), 5.26 (s, 1H, coumarin-3-H),7.22 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.33-7.48 (m, 6H, coumarin-6,8-H, Ph-H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 2H, Ph-H), 7.72 (t, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-7-H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H, coumarin-5-H), 9.44 (s, 1H, NH), 10.01 (s, 1H, NH);13C NMR (125 MHz,DMSO-d6), δ: 17.94, 93.41, 115.29, 117.11, 122.05, 123.52,125.03, 126.59, 126.82, 128.27, 130.28, 132.27, 133.90,134.50, 138.32, 139.79, 149.25, 153.61, 161.74, 166.51,181.02. MS (ESI), m/z: 425.3 ([M+Na]+). C23H18N2O3S 計算值: C, 68.64; H, 4.51; N, 6.96. 實測值: C, 68.59; H, 4.55; N,6.99.

1.4 抑菌活性測試

采用渾濁度法測定目標化合物4a～4m 對水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌的抑菌活性[21]。以噻唑銅 (thiazolone) 為對照藥劑。將目標化合物4a～4m 及對照藥劑分別配制成質量濃度為200 及100 μg/mL 的含藥 NB 液體培養(yǎng)基，加入 40 μL 上述制備的含有供試菌液的NB 液體培養(yǎng)基，在28 ℃、180 r/min 恒溫搖床中振蕩培養(yǎng)24～48 h。采用酶標儀測定各濃度菌液的OD 值；同時測定含有200及100 μg/mL 目標化合物及對照藥劑的無菌NB液體培養(yǎng)基的OD 值。按 (1) 式計算抑制率。

其中：I 為抑制率；T0為對照菌液OD 值；T1為樣品菌液OD 值。菌液OD 值 = 含菌培養(yǎng)基OD 值?無菌培養(yǎng)基 OD 值。

根據(jù)初篩結果進一步測定高活性化合物的EC50值。測定時配制化合物的質量濃度梯度為200、100、50、25 和 12.5 μg/mL，以噻唑銅為對照藥劑。

2 結果與討論

2.1 目標化合物的合成

參考文獻[19-20]方法，由4-羥基香豆素與三氯氧磷反應得到4-氯香豆素 (1)。以K2CO3作縛酸劑，將化合物1 與對氨基苯酚在乙腈中加熱回流，生成4-(4-氨基苯氧基)-香豆素 (2)。以氯苯作溶劑，在35 ℃下，化合物 2 與硫光氣反應生成異硫氰酸 (4-香豆素氧基) 苯酯 (3)?；衔? 與2-或3-單取代苯胺、二取代苯胺反應得到13 個目標化合物。該合成路線操作簡單，反應條件溫和。

2.2 目標化合物的圖譜解析

所有目標化合物的結構均通過IR、1H NMR、13C NMR 和MS 等方法進行表征。其中，在IR 譜圖中，1 128～1 149 cm?1處出現(xiàn)雙峰，是 -NHCSNH-中C=S 伸縮振動吸收峰；苯并吡喃環(huán)的C=O 伸縮振動吸收峰出現(xiàn)在 1 732～1 687 cm?1；3 339～3 124 cm?1是NH 的伸縮振動引起的。在1H NMR 譜圖中，3 位香豆素環(huán)上質子的化學位移 (δ) 為5.26；-NHCSNH- 的質子 δ 為 9.65～10.03。在13C NMR譜圖中，δ 93.41～92.96 是香豆素中3 位碳的化學位移值。

2.3 目標化合物的殺菌活性

測定結果見表1。從中可以發(fā)現(xiàn)，目標化合物對水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌均具有很好的抑制活性。當化合物質量濃度為200 μg/mL 時，化合物4b、4h、4i、4j 和4m 對水稻白葉枯菌的抑制率均大于8 0%，且高于對照藥劑噻菌銅(68.7%)，且當質量濃度降為100 μg/mL，各化合物的抑制率均保持在50% 左右，高于噻菌銅(42.1%)；在 200 和 100 μg/mL 時，化合物 4a、4c、4d、4e、4f 和4g 對水稻白葉枯菌的抑制活性與噻菌銅相當；而4k 和4l 的抑制活性均低于噻菌銅。相似的是，在200 μg/mL 時，化合物4b、4h、4i、4j 和4m 對柑橘潰瘍病菌的抑制率均大于80%，高于對照藥劑噻菌銅 (74.9%)，即使在100 μg/mL 下，4h、4i、4j 和 4m 對柑橘潰瘍病菌的抑制率也均大于50%，高于噻菌銅 (45.3%)；在質量濃度為200 和100 μg/mL 時，化合物 4a、4c、4d、4e、4f 和4g 對柑橘潰瘍病菌的抑制活性與噻菌銅相當；而4k 和4l 的抑制活性均低于噻菌銅。

根據(jù)初步的殺菌活性測定結果，進一步測定殺菌活性較好的化合物4b、4h、4i、4j 和4m 對兩種病原細菌的EC50值。結果 (表2) 表明：供試5 種化合物對水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌的EC50值均低于對照藥劑噻菌銅；此外還發(fā)現(xiàn)，用2 或3-單取代苯胺和二取代苯胺與異硫氰酸 (4-香豆素氧基) 苯酯反應，合成的一系列3-芳基-4-氧香豆素基苯基硫脲衍生物與用4-單取代苯胺與異硫氰酸 (4-香豆素氧基) 苯酯反應合成的一系列3-(4-取代芳基)-4-氧香豆素基苯基硫脲衍生物相比較，其抑制水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌活性均相當[19]。

表1 目標化合物 (4a～4m) 的殺菌活性Table 1 Antibacterial activities of the title compounds 4a-4m

表2 部分化合物對兩種病原細菌的EC50 值Table 2 EC50 values of some compounds against two pathogenic bacteria

3 結論

以香豆素環(huán)為母體，設計并合成了13 個未見文獻報道的1-(4-((2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基) 氧)苯基)-3-取代苯基硫脲衍生物，所有化合物的結構均經(jīng)過1H NMR、13C NMR、MS 和元素分析確證。殺菌活性測試結果表明，該類化合物表現(xiàn)出較好的殺菌活性，其中化合物4b、4h、4i、4j 和4m 對水稻白葉枯菌和柑橘潰瘍病菌的抑制活性均優(yōu)于對照藥劑噻菌銅?？偟膩碚f，該類化合物具有進一步研究的價值。