TSP2在人髓母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及意義

孫 靜 楊雪輝 葛春燕

髓母細(xì)胞瘤約占兒童中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的15%～20%，致殘率、病死率較高，預(yù)后差[1，2]。近年來(lái)，隨著神經(jīng)外科技術(shù)的發(fā)展，髓母細(xì)胞瘤的致殘率和病死率有下降趨勢(shì)，5年生存率在50%～70%，10年生存率在30%～50%[3]。血栓素結(jié)合蛋白（thrombospondin，TSP）是多功能基質(zhì)細(xì)胞糖蛋白，能夠調(diào)節(jié)血管生成、炎癥、細(xì)胞增殖和凋亡[4]。有研究顯示TSP2 在髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞中低表達(dá)，可能通過(guò)激活Notch信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移和血管生成[5]。本文探討人髓母細(xì)胞瘤組織TSP2的表達(dá)水平及其與病人預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選取2007 年6 月～2014 年10 月手術(shù)切除的髓母細(xì)胞瘤組織110 例，其中男69 例，女41例；年齡3～41 歲，平均（13.03±2.60）歲。根據(jù)WHO（2016）中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)[6]：經(jīng)典型71例，結(jié)節(jié)型/促結(jié)締組織增生型30 例，大細(xì)胞型/間變型9 例；WNT 亞型24 例，SHH 亞型27 例，非WNT/SHH 亞型59 例。所有病人術(shù)前均未接受放、化療或免疫治療。另選取40 例顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)中切取的正常腦組織為對(duì)照，其中男26 例，女14 例；年齡17～34歲，平均（23.56±6.90）歲。

表1 110例髓母細(xì)胞瘤病人生存預(yù)后影響因素的Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

1.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)TSP2 表達(dá) 所有組織均經(jīng)過(guò)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。按照免疫組化試劑盒（上海雅吉生物科技有限公司）說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，切片脫蠟后用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次。用0.01 mol/L 檸檬酸鈉緩沖液高溫高壓下進(jìn)行抗原修復(fù)，3%過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶10 min。磷酸鹽緩沖液洗滌3 次后滴加兔抗人TSP2單克隆抗體（1:500，美國(guó)Sigma公司），4 ℃孵育過(guò)夜，滴加二抗。鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法顯色，蘇木精復(fù)染。梯度酒精脫水，二甲苯溶液透明，中性樹(shù)膠封片，置于顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察。每張切片觀(guān)察5 個(gè)視野，每個(gè)高倍鏡至少觀(guān)察100 個(gè)細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)著色0 分；淡黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。染色細(xì)胞百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0 分；5%～25%為1 分；26%～50%為2分；51%～75%為3分；＞75%為4分。染色強(qiáng)度評(píng)分和染色細(xì)胞百分比評(píng)分相加后評(píng)分0～3分為低表達(dá)，＞3分為高表達(dá)[7]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計(jì)量資料用x±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；用Ka?plan-Meier 法繪制生存曲線(xiàn)，采用log-rank 檢驗(yàn)；多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析生存期影響因素；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 髓母細(xì)胞瘤組織TSP2 的表達(dá)水平 髓母細(xì)胞瘤組織TSP2 高表達(dá)36 例，低表達(dá)74 例；正常腦組織TSP2 高表達(dá)32 例，低表達(dá)8 例。髓母細(xì)胞瘤組織TSP2低表達(dá)率（67.3%，74/110）明顯高于正常腦組織（20.0%，8/40；P＜0.001）。

2.2 髓母細(xì)胞瘤病人生存期的影響因素 多因素Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示，腫瘤未全切除、TSP2 低表達(dá)是髓母細(xì)胞瘤生存時(shí)間短的獨(dú)立影響因素（P＜0.05，表1）。

2.3 TSP2 表達(dá)水平與髓母細(xì)胞瘤病人預(yù)后的關(guān)系隨訪(fǎng)截止2019 年1 月，隨訪(fǎng)時(shí)間12～80 個(gè)月。低表達(dá)組3、5 年生存率分別為49.05%和35.23%；中位生存期為34.89 個(gè)月。高表達(dá)組3、5 年生存率分別為69.03%和58.78%；中位生存期為41.14 個(gè)月。低表達(dá)組生存時(shí)間明顯低于高表達(dá)組（P＜0.05，圖1）。

3 討論

圖1 Kaplan-Meier 法繪制生存曲線(xiàn)分析TSP2 表達(dá)水平與髓母細(xì)胞瘤病人生存率的關(guān)系

髓母細(xì)胞瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性程度最高的神經(jīng)上皮性腫瘤之一，多發(fā)生于第四腦室頂上的小腦蚓部。髓母細(xì)胞瘤生長(zhǎng)迅速，手術(shù)不易完全切除，病死率高，預(yù)后較差[8]。尋找新的治療靶點(diǎn)是近年來(lái)髓母細(xì)胞瘤研究的熱點(diǎn)[9]。既往研究顯示，血管生成是髓母細(xì)胞瘤發(fā)展的重要因素[10]。TSP2與腫瘤生長(zhǎng)和血管生成密切相關(guān)[11]。TSP2可能通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖、存活和凋亡[12]。TSP2 的作用機(jī)制可能也涉及炎癥，可以通過(guò)降低轉(zhuǎn)錄因子-κB活性，抑制免疫炎癥，進(jìn)而抑制血管生成[13]。這提示TSP2可能發(fā)揮抑癌基因作用。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)髓母細(xì)胞瘤組織TSP2 呈低表達(dá)率明顯高于腦組織；多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示TSP2 低表達(dá)是髓母細(xì)胞瘤病人生存期較短的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；低表達(dá)組生存時(shí)間明顯低于高表達(dá)組。這提示TSP2 可能是判斷髓母細(xì)胞瘤預(yù)后的重要指標(biāo)。

本研究的局限性為：僅檢測(cè)組織TSP2 表達(dá)水平，未分析血清表達(dá)情況；對(duì)TSP2 的作用機(jī)制進(jìn)行分析；分析TSP2表達(dá)水平與放化療敏感性的關(guān)系。

綜上所述，髓母細(xì)胞瘤組織TSP2 呈低表達(dá)，與病人生存預(yù)后較差有關(guān)。