CREPT在人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)及其與病人預(yù)后的關(guān)系

王睿健 張文超 尹 濤

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）屬于WHO分級(jí)Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤，是成人中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，病死率和復(fù)發(fā)率較高[1]。尋找潛在的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)GBM 早期診治有重要意義。腫瘤高表達(dá)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（cell cyclerelated and expression elevated protein in tumor，CREPT）編碼基因位于人類20 號(hào)染色體長(zhǎng)臂1 區(qū)1帶，包含7 個(gè)外顯子，在非小細(xì)胞肺癌[2]、結(jié)直腸癌[3]和宮頸癌[4]、腎癌[5]等多種腫瘤中高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。本文探討人腦GBM 組織CREPT的表達(dá)水平及其與病人預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選取2010 年1 月至2011 年1 月我院病理科保存的104 例GBM 組織，術(shù)前均未接受過放化療，其中男58 例，女46 例；年齡18～74 歲，平均（49.98±12.12）歲。選取2018 年1～12 月顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)中切除的正常腦組織40例為對(duì)照，其中男22例，女18 例；年齡32～61 歲，平均（50.02±11.18）歲。兩組年齡、性別無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

1.2 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)CREPT 的表達(dá) 石蠟切片厚度4 μm。SP 免疫組化試劑盒購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精水化、枸櫞酸溶液抗原修復(fù)后，聚乙二醇辛基苯基醚通透，用3%過氧化氫溶液滅活內(nèi)源性過氧化物酶，隨后用山羊血清封閉。滴加鼠抗人CREPT 單克隆抗體（1:500，上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司），濕盒內(nèi)孵育過夜。用SP 法顯色，蘇木精復(fù)染。梯度酒精脫水，二甲苯溶液透明，中性樹膠封片，BX43 型顯微鏡觀察。每張切片觀察5個(gè)視野，每個(gè)高倍鏡至少觀察100個(gè)細(xì)胞。染色強(qiáng)度評(píng)分：0 分為無著色；1 分為淺棕色；2 分為中棕色；3 分為深棕色。染色細(xì)胞百分比評(píng)分：1%～25%為1分；26%～50%為2分；＞50%為3分。將染色強(qiáng)度評(píng)分和染色細(xì)胞百分比評(píng)分相乘得出染色積分，0～3分為低表達(dá)；4～9分為高表達(dá)[6]。

1.3 隨訪 術(shù)后進(jìn)行門診隨訪，隨訪截止時(shí)間為2019年4月。記錄總生存期（overall survival，OS；術(shù)后第1天至死亡或最后一次隨訪）和無進(jìn)展生存期（pro?gression-free survival，PFS；術(shù)后至第一次發(fā)生疾病進(jìn)展或任何原因死亡的時(shí)間）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計(jì)量資料以x±s表示，用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；采用多因素Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析生存預(yù)后的影響因素；用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，采用Log-rank檢驗(yàn)比較生存率；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 GBM組織CREPT表達(dá)水平GBM組織高表達(dá)率（73.08%，76/104）明顯高于正常腦組織（10.00%，4/40；P＜0.05）。

2.2 GBM 生存預(yù)后的影響因素 多因素Cox 比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果顯示，年齡≥55歲、術(shù)后未接受放化療、CREPT 高表達(dá)是GBM 病人OS 和PFS 較短的獨(dú)立影響因素（P＜0.05；表1、2）。

表1 104例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病人總生存期影響因素的Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

表2 104例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病人無進(jìn)展生存期影響因素的Cox比例回歸風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

圖1 Kaplan-Meier法繪制生存曲線分析CREPT表達(dá)水平與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤病人總體生存率和無進(jìn)展生存率的關(guān)系

2.3 CREPT 表達(dá)水平與GBM 生存期的關(guān)系 高表達(dá)組中位OS 為12 個(gè)月（9～38 個(gè)月），中位PFS 為11 個(gè)月（9～43 個(gè)月）；低表達(dá)組中位OS 為18 個(gè)月（14～44個(gè)月），中位PFS為17個(gè)月（13～48個(gè)月）。低表達(dá)組OS和PFS均明顯高于高表達(dá)組（P＜0.05，圖1）。

3 討論

GBM 惡性程度較高，預(yù)后較差，尋找潛在的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)GBM 臨床診治有重要意義。CREPT是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的癌基因，可通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期來調(diào)控癌癥的發(fā)生和發(fā)展。本文用免疫組化法檢測(cè)GBM 組織CREPT 的表達(dá)，結(jié)果顯示GBM 組織CREPT 高表達(dá)率明顯高于正常腦組織，說明CREPT可能參與GBM的發(fā)生，并且與惡性程度有關(guān)。

CREPT 在腫瘤中的作用機(jī)制可能有：調(diào)節(jié)免疫炎癥，影響腫瘤微環(huán)境[7]；調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞周期G1/S 轉(zhuǎn)換[8]；調(diào)控ROS/p53 通路[9]、RhoA 基因[10]和miRNA等[11]促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移等。Wei等[12]發(fā)現(xiàn)CREPT 可以靶向miR-596，通過Wntcatenin 信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲，并且CREPT 表達(dá)水平增高與膠質(zhì)瘤病人不良預(yù)后有關(guān)。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，年齡、術(shù)后放化療是影響GBM病人生存預(yù)后的獨(dú)立因素，與既往報(bào)道一致[13]。既往研究顯示，CREPT 高表達(dá)與腎癌[5]和結(jié)直腸癌[3]等不良生存預(yù)后有關(guān)。本文CREPT 高表達(dá)GBM 病人的OS 和PFS 明顯縮短，提示CREPT 對(duì)GBM 預(yù)后的早期評(píng)價(jià)可能有一定價(jià)值。

綜上所述，GBM 組織CREPT 呈高表達(dá)，與病人不良生存預(yù)后和腫瘤進(jìn)展有關(guān)。