耐高溫球等鞭金藻(Isochrysis galbana)藻種的選育與餌料特性初步分析*

趙東會(huì) 趙麗達(dá) 尤 宏 秦 松, 王寅初, ① 焦緒棟, ①

(1. 哈爾濱工業(yè)大學(xué)(威海)海洋科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 威海 264209; 2. 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所 煙臺(tái) 264003;3. 中國(guó)科學(xué)院海洋大科學(xué)研究中心 青島 266071; 4. 南陽(yáng)師范學(xué)院生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 南陽(yáng) 473061)

餌料微藻可以在生物鏈中作為魚(yú)蝦幼苗良好的開(kāi)口食物, 是水產(chǎn)動(dòng)物苗種培育階段的關(guān)鍵因素之一。與傳統(tǒng)的人工飼料相比, 微藻生物餌料有易被養(yǎng)殖對(duì)象消化、便于培養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)全面、對(duì)水體污染小等獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)(許家輝等, 2018)。目前研究的餌料微藻主要包括三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、等鞭金藻(Isochrysis sp.)、亞心形扁藻(Platymonas subcordiformis)、中肋骨條藻(Skeletonema costatum)、威氏海鏈藻(Thalassiosira weissflogii)和海水小球藻(Chlorella sp.)等(劉皓等, 2010; 熊良偉等, 2013; 劉祚屹等, 2020)。

然而, 在夏季高溫條件下, 水溫影響了餌料生物的正常繁殖與生長(zhǎng)(包永波等, 2004)。普通餌料微藻容易衰敗, 造成餌料微藻供應(yīng)不及時(shí)或無(wú)法足量供應(yīng)(鄒琰等, 2010), 為水產(chǎn)苗種的生產(chǎn)帶來(lái)諸多隱患。三角褐指藻在 25°C 下細(xì)胞生長(zhǎng)最好, 小球藻(Chlorella vulgaris)在 5—30°C 均可正常生長(zhǎng), 20°C 為最適宜的生長(zhǎng)溫度(趙婷等, 2016)。亞心形扁藻在28°C 的生長(zhǎng)量最大, 31°C 的溫度條件下, 亞心形扁藻的生長(zhǎng)量下降。不同溫度條件下, 等鞭金藻塔溪堤品系Isochrysis galbana (Tahitian strain)的相對(duì)生長(zhǎng)率在25°C 條件下最高, 其最適生長(zhǎng)溫度為 20—30°C (梁英等, 2011)。諸多研究表明, 目前的餌料微藻最適耐受溫度普遍低于30°C。因此尋找可以在30°C 及以上溫度條件下穩(wěn)定生長(zhǎng)的餌料微藻, 以保障夏季餌料微藻的供應(yīng)量是比較迫切的。

單環(huán)刺螠(Urechis unicinctus)屬螠蟲(chóng)動(dòng)物門(mén)(Echiurioidea) 、 螠 綱 (Echiurida) 、 無(wú) 管 螠 目(Xenopneusta)、刺螠科(Urchidae)、刺螠 屬(李諾等,1998)。目前, 單環(huán)刺螠的研究主要集中在單環(huán)刺螠的繁育、池塘養(yǎng)殖方面的創(chuàng)新工作(王淑芬等, 2016; 許星鴻等, 2016), 但對(duì)單環(huán)刺螠的攝食生理學(xué)研究甚少。單環(huán)刺屬于濾食性動(dòng)物, 主要以金藻、扁藻、小球藻等微藻作為餌料, 其中以金藻作為開(kāi)口餌料效果較好(許星鴻等, 2016)。其夏季育苗一般自 5 月下旬開(kāi)始, 至 8—9 月份結(jié)束, 育苗過(guò)程需經(jīng)過(guò)夏季高溫期。目前所用的餌料微藻難以在高溫高光照條件下存活, 篩選耐高溫餌料微藻可以滿足夏季單環(huán)刺螠幼苗對(duì)活體餌料微藻的需求。

本文從夏季水溫超過(guò) 40°C、已發(fā)生衰敗的萊州某育苗場(chǎng)的球等鞭金藻培育池中分離出 4 株球等鞭金藻, 分別命名為PHY7001—PHY7004。分析了各藻株在33°C、40°C 的水溫下的生長(zhǎng)狀態(tài)和藻株細(xì)胞大小、粗蛋白含量, 并對(duì)生長(zhǎng)速率最快的一株耐高溫球等鞭金藻(PHY7004)的培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。通過(guò)測(cè)試單環(huán)刺螠幼苗對(duì)耐高溫藻株的攝食能力, 選育出具有較好適口性的藻株, 為后期的規(guī)?；锰峁┝死碚摵同F(xiàn)實(shí)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 微藻分離與培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)藻液樣品是在夏季從萊州市順昌水產(chǎn)有限公司的餌料培育池取回, 實(shí)時(shí)水溫為 43°C, 其中培育的藻類(lèi)經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的高溫已發(fā)生嚴(yán)重衰敗。取回后立刻通過(guò)顯微操作技術(shù)分離耐受住高溫脅迫的微藻活細(xì)胞, 對(duì)分離的單細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后得到藻株, 分別命名為: PHY7001、PHY7002、PHY7003、PHY7004。

微藻培養(yǎng)采用f/2 培養(yǎng)基(Guillard et al, 1962), 溫度為25°C, 鹽度為32, 光暗周期為 12 h/12 h, 光照強(qiáng)度 12 μmol/(cm2·s)。每天定時(shí)搖勻藻液 1 次, 以防細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

1.2 藻株的耐高溫測(cè)試

本實(shí)驗(yàn)設(shè) A(33°C)、B(40°C)兩組溫度, 對(duì)分離藻株的耐高溫性能進(jìn)行測(cè)試。每組每藻株設(shè)三個(gè)平行。將分離培養(yǎng)后達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的藻株分別取100 mL藻液至250 mL 三角瓶。將A、B 組分別置于溫度為33°C、40°C 的恒溫光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 光暗周期為24 h/0 h, A、B 兩組有效光強(qiáng)均為 16 μmol/(cm2·s)。采用681 nm 吸光光度值表征其細(xì)胞數(shù)目。

1.3 藻株P(guān)HY7004 培養(yǎng)基的優(yōu)化

PHY7004 是33°C 條件下生長(zhǎng)速度最快的藻株。本實(shí)驗(yàn)對(duì) PHY7004 進(jìn)行培養(yǎng)基的優(yōu)化, 優(yōu)化的指標(biāo)為 pH 值和氮磷比(NaNO3∶Na2HPO4), 其中 NaNO3的濃度為 75 g/L; Na2HPO4·2H2O 的濃度為 5.65 g/L。pH 值設(shè)置三個(gè)梯度: pH=7, pH=8, pH=9, N/P 比設(shè)置三個(gè)梯度: 12∶1, 13∶1, 14∶1, 對(duì) pH 值和 N/P 進(jìn)行交叉實(shí)驗(yàn), 共9 個(gè)梯度。

將PHY7004 置于33°C 的恒溫振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng),光暗周期為 24 h/0 h, 光強(qiáng)為 12 μmol/(cm2·s)。

1.4 藻株鮮重總蛋白含量的測(cè)定

用BCA 總蛋白濃度檢測(cè)試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)對(duì)所篩選出的耐高溫餌料微藻進(jìn)行鮮重下蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。用Origin 軟件線性擬合得到蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線: A=13.50C+0.1170, R2=0.9937。其中: A 為 562 nm 的吸光度值; C 為總蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)。

1.5 單環(huán)刺螠幼苗飼喂實(shí)驗(yàn)

選取 4 月齡, 體重為 0.32—0.90 g, 體長(zhǎng)為2.1—3.9 cm 的單環(huán)刺螠幼苗200 尾, 從中挑選出生長(zhǎng)狀態(tài)良好的150 尾幼苗, 隨機(jī)分為5 組, 1 組30 尾單環(huán)刺幼苗, 每組設(shè) 3 個(gè)平行重復(fù)。分別置于 5 0 L養(yǎng)殖容器中, 底部鋪設(shè)15 cm 干凈海沙; 采用過(guò)濾海水每天6:00am 換水1 次, 充氣暫養(yǎng)7—10 d。分別用PHY7001、PHY7002、PHY7003、PHY7004 的新鮮培養(yǎng)液, 于每天 5:30pm 定時(shí)飼喂單環(huán)刺螠幼苗, 投喂的餌料微藻的初始濃度為2×106—3.5×106CFU/mL。不放單環(huán)刺螠幼苗為對(duì)照組。飼喂實(shí)驗(yàn)持續(xù) 5 d, 于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第3 天開(kāi)始取樣。飼喂后2 h 在養(yǎng)殖池的不同位置分別取3 次海水樣品, 測(cè)試海水濁度。根據(jù)公式計(jì)算單環(huán)刺螠幼苗對(duì)所篩選出耐高溫餌料微藻的攝食強(qiáng)度(Fi)(孫濤等, 2017)。

式中, ΔN1表示試驗(yàn)組投餌1 h 后因單環(huán)刺螠攝食和沉降造成濁度的改變值(NTU); ΔN2表示對(duì)照組投餌1 h后因沉降造成濁度的改變值(NTU)。

2 結(jié)果與討論

2.1 藻株的分離

通過(guò)顯微操作技術(shù)分離出4 株球等鞭金藻。分別命名為: PHY7001、PHY7002、PHY7003、PHY7004。單細(xì)胞培養(yǎng)48 h 后, 觀察各藻株顏色為綠色, 顏色純正, 鏡檢細(xì)胞大小一致, 無(wú)原生動(dòng)物污染。

利用倒置顯微鏡拍攝各藻株的細(xì)胞照片后, 用Digimizer 軟件測(cè)量細(xì)胞直徑(圖1)。計(jì)算各藻株細(xì)胞的平均直徑為 5.5—7.5 μm, 與常規(guī)的球等鞭金藻(5—7 μm)相比, 大小差別不明顯。

圖1 分離的4 株耐高溫球等鞭金藻Fig.1 Four isolated strains of I. galbana resistant to high temperature

在培養(yǎng)微藻過(guò)程中, 與控制溫度相比, 光照條件易控制且控制成本較低, 因此本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑楹Y選耐高溫藻種, 對(duì)光照強(qiáng)度的設(shè)置條件為不抑制球等鞭金藻正常生長(zhǎng)即可。本實(shí)驗(yàn)微藻培養(yǎng)與耐高溫測(cè)試實(shí)驗(yàn)的光照條件分別為 12 和 16 μmol/(cm2·s), 均在球等鞭金藻可正常生長(zhǎng)的光照強(qiáng)度范圍內(nèi)(郭兵等, 2011)。

2.2 耐高溫性能測(cè)試

將分離的藻株在 33°C 水溫中進(jìn)行培養(yǎng), 發(fā)現(xiàn)分離的藻株均可在33°C 水溫下存活。其中從接種開(kāi)始到第7 天, 各藻株的細(xì)胞數(shù)目均有增加; 與第7 天相比, 第 9 天的 PHY7001、CHY7004 的細(xì)胞數(shù)量繼續(xù)增加, PHY7002、CHY7003 的細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有大的變化;根據(jù)生長(zhǎng)曲線的走勢(shì), PHY7001 和PHY7004 的細(xì)胞數(shù)目可能繼續(xù)增長(zhǎng)。在培養(yǎng)周期內(nèi), PHY7004 的細(xì)胞數(shù)目幾乎呈線性增長(zhǎng), 生長(zhǎng)狀態(tài)最優(yōu), 推測(cè)該藻株對(duì)高水溫的適應(yīng)能力較好。其他藻株也展示出了較好的生長(zhǎng)能力, 存在不同的生長(zhǎng)滯后過(guò)程, 提示其對(duì)高水溫的適應(yīng)能力需要進(jìn)一步馴化(圖2)。

將分離的藻株在 40°C 水溫中進(jìn)行培養(yǎng)時(shí), 藻株的生長(zhǎng)狀態(tài)與在 33°C 時(shí)完全不同。由圖 3 所示,PHY7001、PHY7002、PHY7003、PHY7004 均不能耐受40°C。與第1 天相比, 第3 天的4 株球等鞭金藻的細(xì)胞數(shù)量大幅減少, 第3 天的細(xì)胞數(shù)目約為第1 天的1/3—1/6 倍。在培育的第3—9 天, 雖然細(xì)胞數(shù)目中間有小幅度的上升, 但是最終的細(xì)胞數(shù)目仍普遍呈下降趨勢(shì), 這可能是由于球等鞭金藻最終無(wú)法適應(yīng)高溫造成的。

圖2 球等鞭金藻的存活及生長(zhǎng)性能(33°C)Fig.2 Analysis of the survival and growth capability of I.galbana (33°C)

圖3 球等鞭金藻的存活及生長(zhǎng)性能(40°C)Fig.3 Survival and growth of I. galbana (40°C)

2.3 球等鞭金藻的優(yōu)化

對(duì)可耐受33°C 且生長(zhǎng)速率最快的PHY7004 繪制其在33°C 下的生長(zhǎng)曲線。用Origin 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合, 擬合出的方程為: A=0.1097-0.0015T+0.0048T2-0.0003T3, R2=0.9920。由圖 4 可見(jiàn), 當(dāng)PHY7004 起始接種量 OD681值為 0.1007 時(shí), 第 1—2天為 PHY7004 的適應(yīng)期; 第 2—9 天為 PHY7004 的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期; 第 9—11 天為 PHY7004 的平穩(wěn)期; 第11—12 天為 PHY7004 的衰退期。培育第 9 天時(shí)PHY7004 的OD681值為0.2491, 細(xì)胞濃度達(dá)到起始濃度的1.37 倍。梁英等(2011)對(duì)球等鞭金藻進(jìn)行生長(zhǎng)曲線的繪制, 第 10 天生長(zhǎng)達(dá)到平穩(wěn)期, 與本研究結(jié)果基本一致。叢超等(2017)研究的5 株球等鞭金藻均在培養(yǎng)第 4—5 天后便進(jìn)入穩(wěn)定期, 與本研究中的PHY7004 相比, 其生長(zhǎng)周期要短得多。這可能與培養(yǎng)條件和株系不同有關(guān)。

圖4 球等鞭金藻PHY7004 的生長(zhǎng)曲線(33°C)Fig.4 Growth curve of I. galbana PHY7004 (33°C)

目前微藻培養(yǎng)的生長(zhǎng)速度普遍較快, 微藻的生長(zhǎng)速度與接種濃度、培養(yǎng)方法和培養(yǎng)條件等有很大關(guān)系(Moheimani et al, 2011; 孫春曉等, 2014)。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)僅限于實(shí)驗(yàn)室條件下測(cè)出, 藻株應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)的繁殖速度還有待進(jìn)一步研究。

從圖5 和圖6 可以看出, pH 值范圍為7—9, 氮、磷比例分別為12:1、13:1、14:1 時(shí), PHY7004 的細(xì)胞數(shù)量和生長(zhǎng)速率均呈增長(zhǎng)趨勢(shì), 這可能是因?yàn)?pH 值和氮、磷比例均在球等鞭金藻耐受范圍內(nèi)。球等鞭金藻在pH 值為3—9 的條件下均能生長(zhǎng), 研究發(fā)現(xiàn)金藻生長(zhǎng)的最適pH 范圍為7.0—9.0, 當(dāng)偏離這個(gè)范圍時(shí),藻體生長(zhǎng)和體內(nèi)代謝活動(dòng)都將會(huì)受到抑制(王珺等,2008)。在氮、磷比等于 16:1 的條件下, 球等鞭金藻的生長(zhǎng)速度最快(劉東艷等, 2002)。

在培育第2 天時(shí), 各條件下的藻生長(zhǎng)速率均增長(zhǎng)最快; 與第2 天相比, 培育第3 天各條件下的藻生長(zhǎng)速率明顯降低; 培育第 3—8 天藻生長(zhǎng)速率均穩(wěn)步上升。據(jù)圖 5 可知實(shí)驗(yàn)期為球等鞭金藻的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,后期還會(huì)增長(zhǎng)。

圖5 球等鞭金藻PHY7004 在不同優(yōu)化條件的生長(zhǎng)曲線(40°C)Fig.5 The growth curve of I. galbana PHY7004 in different optimum conditions (40°C)

圖6 PHY7004 在不同優(yōu)化條件下的生長(zhǎng)速率(40°C)Fig.6 The growth rate of PHY7004 in different optimum conditions (40°C)

通常海水中的 pH 比較穩(wěn)定(pH≈8.2), 但受自然因素影響, 海水pH 值會(huì)產(chǎn)生波動(dòng), pH 會(huì)影響脂質(zhì)生產(chǎn)率, 對(duì)細(xì)胞代謝具有廣泛影響(Ren et al, 2013)。氮磷營(yíng)養(yǎng)鹽在藻類(lèi)生長(zhǎng)過(guò)程中是重要的影響因子。磷對(duì)于生物質(zhì)生產(chǎn)至關(guān)重要。因此本實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基中的氮磷比和 pH 值進(jìn)行優(yōu)化, 結(jié)果表明, 在 N/P=14:1,pH=7 的狀態(tài)下, 藻細(xì)胞的生長(zhǎng)速率最快, 細(xì)胞數(shù)量最高, 因此, PHY7004 在 33°C 下最適的培養(yǎng)基N/P=14:1, pH=7。在 33°C 下, 當(dāng)培養(yǎng)基 N/P=12:1 時(shí)PHY7004 較適pH=9; 當(dāng)培養(yǎng)基N/P=13:1 時(shí)PHY7004較適 pH=9; 當(dāng)培養(yǎng)基 N/P=14:1 時(shí) PHY7004 較適pH=7; 當(dāng)培養(yǎng)基 pH=7 時(shí) PHY7004 較適 N/P=14:1; 當(dāng)培養(yǎng)基 pH=8 時(shí) PHY7004 較適 N/P=12:1; 當(dāng)培養(yǎng)基pH=9 時(shí) PHY7004 較適 N/P=12:1。

2.4 4 株球等鞭金藻蛋白質(zhì)的含量

球等鞭金藻平均蛋白質(zhì)含量為 34.29 mg/L, 分離的4 株球等鞭金藻蛋白質(zhì)含量差異較大, PHY7003蛋白質(zhì)含量最高, 見(jiàn)表1。飼料蛋白質(zhì)含量對(duì)動(dòng)物消化酶影響顯著, 在魚(yú)蝦等水產(chǎn)動(dòng)物中均有報(bào)道(黃凱等, 2003; 趙東海, 2004)。宋萍萍等(2015)研究的球等鞭金藻的蛋白質(zhì)含量可達(dá)到 110 mg/L, 其蛋白含量遠(yuǎn)高于本實(shí)驗(yàn)藻株。蛋白質(zhì)的含量與微藻的品系、培養(yǎng)條件和培養(yǎng)方式有關(guān)(Wang et al, 2004; 張躍群等, 2009)。

表1 耐高溫餌料微藻蛋白質(zhì)含量Tab.1 Protein content of high-temperature-resistant microalgae bait

總蛋白含量是評(píng)價(jià)微藻營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)之一, 但不是唯一標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于餌料微藻而言, 脂肪含量,特別是所含不飽和脂肪酸的總量和組成也是評(píng)價(jià)微藻是否適合海水養(yǎng)殖生物應(yīng)用的重要指標(biāo)。微藻飼養(yǎng)動(dòng)物的效果不因微藻蛋白質(zhì)水平而異, 微藻所含的必需脂肪酸能否滿足動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)需求才是評(píng)定微藻營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)(Brown et al, 1997)。高蛋白飼料或餌料對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物體內(nèi)的消化道、酶系、微生態(tài)平衡都會(huì)有顯著影響, 有時(shí)也會(huì)損害養(yǎng)殖動(dòng)物的健康。

藻類(lèi)蛋白的研發(fā)正在迅速發(fā)展, 小球藻、柵藻、螺旋藻等蛋白產(chǎn)品開(kāi)發(fā)已吸引了眾多的目光, 在保健品和飼料行業(yè)小有市場(chǎng), 然而其他72000 種微藻資源還未得到研究和開(kāi)發(fā)。本文研究的球等鞭金藻藻株,為微藻蛋白的開(kāi)發(fā)提供了一個(gè)新的原料。球等鞭金藻蛋白質(zhì)含量在已經(jīng)研究的微藻中含量較高。以這幾株藻為基礎(chǔ)進(jìn)行微藻工業(yè)開(kāi)發(fā), 在生物能源、微藻餌料、單細(xì)胞蛋白等方面均有巨大的應(yīng)用潛力, 值得對(duì)其進(jìn)行更多的研究和應(yīng)用發(fā)掘。

2.5 單環(huán)刺螠的攝食強(qiáng)度

在篩選出的耐33°C 的球等鞭金藻中, 4 月齡單環(huán)刺螠幼苗(體重0.32—0.90 g, 體長(zhǎng)2.10—3.90 cm)對(duì)篩選出的四株耐高溫球等鞭金藻的攝食強(qiáng)度無(wú)顯著性差異(P＞0.05), 單環(huán)刺螠幼苗對(duì)PHY7002 的攝食強(qiáng)度最大, 見(jiàn)表 2 。一般認(rèn)為餌料顆粒的大小是判斷其是否適合育苗生產(chǎn)的關(guān)鍵要素。由表 2 可知,PHY7002 的細(xì)胞大小跟濾食性動(dòng)物 4 月齡單環(huán)刺幼苗的口徑相一致。值得注意的是, 本實(shí)驗(yàn)中的單環(huán)刺螠幼苗對(duì)蛋白含量最少的PHY7002 攝食強(qiáng)度最大,對(duì)蛋白含量最多的 P HY7003 攝食強(qiáng)度最小。這說(shuō)明藻株的蛋白含量與單環(huán)刺螠對(duì)其攝食強(qiáng)度不一定成正比, 這與前人研究結(jié)果一致, 飼料蛋白含量與增重率并不呈正比(朱偉等, 2005)。

表2 單環(huán)刺螠幼苗對(duì)球等鞭金藻的平均攝食強(qiáng)度Tab.2 Feeding intensity of larval U. unicinctus on Days 1—3

最新研究表明, 在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中, 許多海洋生物幼體擁有選擇適合自身生長(zhǎng)所需的藻類(lèi)的“特異功能”, 可利用其尚未明確的“嗅覺(jué)”等方式選擇自己喜歡的餌料(麥康森, 2020)。球等鞭金藻(I. galbana Parke)是一種金黃色的金藻, 個(gè)體小、繁殖速度快、營(yíng)養(yǎng)豐富, 并且沒(méi)有細(xì)胞壁, 容易被動(dòng)物幼蟲(chóng)消化吸收(王珺等, 2002), 可作為優(yōu)質(zhì)餌料。已有研究(Kain et al, 1958; 陳椒芬等, 1985; 周汝倫等, 1994)報(bào)道,球等鞭金藻(I. galbana Parke)是貽貝、牡蠣、泥蚶等雙殼類(lèi)貝苗和對(duì)蝦幼體的優(yōu)良餌料。但目前還沒(méi)有用球等鞭金藻飼喂單環(huán)刺螠的報(bào)道。單環(huán)刺螠人工養(yǎng)殖正處于摸索起步階段, 目前用餌料微藻飼養(yǎng)中國(guó)對(duì)蝦, 牙鲆等水產(chǎn)動(dòng)物較多, 對(duì)于單環(huán)刺螠攝食餌料微藻的研究甚少。有研究表明, 使用微綠擬球藻和三角褐指藻的混合餌料投喂單環(huán)刺螠幼苗會(huì)取得比較明顯的促生長(zhǎng)效果(常林瑞等, 2018)。因此, 在今后單環(huán)刺螠人工配合飼料的研發(fā)中可適當(dāng)添加球等鞭金藻。

3 結(jié)論

通過(guò)顯微操作技術(shù)分離出4 株球等鞭金藻。經(jīng)耐高溫測(cè)試, 分離出的 4 株球等鞭金藻均可耐受 33°C,且 PHY7004 生長(zhǎng)速率最快, 分離出的各藻株細(xì)胞的平均直徑為 5.5—7.5 μm; 經(jīng)培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn)得, 可耐受 33°C 且生長(zhǎng)速率最快的一株球等鞭金藻(PHY7004)在 33°C 下較適的培養(yǎng)基條件為 N/P=14:1,pH=7。通過(guò)耐高溫藻的單環(huán)刺螠幼苗飼喂實(shí)驗(yàn), 發(fā)現(xiàn)單環(huán)刺螠幼苗對(duì)PHY7002 攝食強(qiáng)度較高, 這兩株藻后期可以作為單環(huán)刺螠育苗期間的餌料微藻備選。人們對(duì)單環(huán)刺螠的攝食生理學(xué)還未開(kāi)展系統(tǒng)的研究, 本實(shí)驗(yàn)可為單環(huán)刺螠的池塘養(yǎng)殖技術(shù)提供一定的參考。