• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    酸漿豆腐中產(chǎn)酸菌的耐高溫紫外誘變

    2021-02-02 10:51:06高若珊范洪臣石彥國朱秀清呂銘守
    關(guān)鍵詞:產(chǎn)酸量酸漿株菌

    高若珊,王 冰,范洪臣,石彥國,朱秀清,呂銘守

    (哈爾濱商業(yè)大學(xué) 食品工程學(xué)院/黑龍江省普通高校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/黑龍江省谷物食品與谷物資源綜合加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,黑龍江 哈爾濱 150076)

    豆腐是中國的特產(chǎn),歷史悠久。據(jù)《本草綱目》記載:“豆腐之法,始于淮南王劉安”。相傳,在2000多年前,在安徽淮南境內(nèi),西漢淮南王劉安煉丹時(shí)的一次失誤,讓瑩白細(xì)膩、鮮嫩綿滑的豆腐意外誕生。不同于鹵水豆腐、內(nèi)酯豆腐,酸漿豆腐是用豆腐漿水經(jīng)乳酸菌發(fā)酵而成的酸漿點(diǎn)成的豆腐。酸漿豆腐以其滑嫩的口感、濃郁的豆香、獨(dú)特的制作工藝等特點(diǎn),入選了我國山東省非物質(zhì)文化遺產(chǎn)名錄。

    酸漿是豆腐黃漿水在自然環(huán)境中發(fā)酵而成的,以乳酸菌為主要菌群。豆腐點(diǎn)漿需要在75 ℃以上的高溫進(jìn)行,普通乳酸菌無法耐受此溫度會(huì)大量失活。如果能研究出耐高溫的乳酸菌,使豆腐在后熟階段依然保持較高的菌活性,通過乳酸菌自然代謝的產(chǎn)物分解蛋白質(zhì),從而改變蛋白質(zhì)凝膠結(jié)構(gòu),可達(dá)到提高豆腐品質(zhì)的目的且可以改良豆腐的風(fēng)味[1-3]。

    近年來,人們對(duì)乳酸菌的耐溫性進(jìn)行了大量探究,已有人運(yùn)用紫外誘變、激光誘變、化學(xué)試劑誘變和常壓室溫等離子體(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)誘變等技術(shù)選育出遺傳性能穩(wěn)定、產(chǎn)酸量高的菌株。有研究運(yùn)用紫外誘變的方法得到了更耐高溫且產(chǎn)酸性能好的菌株[4-6]。然而,迄今為止的研究成果中獲得的乳酸菌,均未達(dá)到可耐75 ℃以上高溫的特性。發(fā)酵工業(yè)及眾多食品加工過程在操作時(shí)無法避免高溫,因此選育耐高溫菌株[7-8]具有重要的理論意義和廣闊的應(yīng)用前景。本研究以課題組前期自云南建水酸漿豆腐中分離的菌株為出發(fā)菌株,通過紫外誘變的方法篩選耐高溫菌株,對(duì)其產(chǎn)酸性能及耐熱性進(jìn)行測定。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1實(shí)驗(yàn)菌種

    誘變出發(fā)菌株為4株本課題組前期保存菌株(哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院糧油學(xué)科實(shí)驗(yàn)室保藏),編號(hào)為HCUL 1.1801-1912(誘變后菌株的CGMCC保藏編號(hào)為19309)、HCUL 1.1802-1912、HCUL 1.1706-1912、HCUL 1.1707-1912。

    1.1.2培養(yǎng)基

    MRS液體培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g,酵母粉4.0 g,牛肉粉5.0 g,葡萄糖20.0 g,乙酸鈉5.0 g,磷酸氫二鉀2.0 g,檸檬酸三銨2.0 g,吐溫80 1 mL,硫酸鎂0.2 g,硫酸錳0.5 g,蒸餾水1 000 mL。121 ℃滅菌20 min。

    MRS固體培養(yǎng)基:在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.5 %的瓊脂粉。121 ℃滅菌20 min。

    1.2 儀器與設(shè)備

    直管-20W型紫外燈,江蘇巨光光電科技有限公司;DHP-9052型培養(yǎng)箱,上海合恒儀器設(shè)備有限公司;HWS型水浴鍋,紹興萬力儀器有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1菌種的活化

    分別從凍藏的HCUL 1.1801-1912、HCUL 1.1802-1912、HCUL 1.1706-1912、HCUL 1.1707-1912原菌株保藏管中蘸取一環(huán)菌液,劃線涂布于MRS固體培養(yǎng)基。37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h后,挑取培養(yǎng)基上的單菌落接種于MRS 液體培養(yǎng)基,37 ℃條件下恒溫培養(yǎng)24 h,得到活化二代的種子液,備用。

    1.3.2生長曲線的測定

    通過測定4株原菌液的生長曲線,確定適宜的培養(yǎng)時(shí)間和紫外誘變時(shí)間。種子液以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的接種量接入到MRS液體培養(yǎng)基中,250 mL三角瓶中裝液量為100 mL。37 ℃靜置培養(yǎng),每隔2 h取樣,采用比濁法,測定4株原菌的OD600值,繪制生長曲線。

    1.3.3紫外誘變

    分別將4株培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中后期的原菌液離心收集,用生理鹽水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的NaCl水溶液)洗滌2次后,稀釋成OD600值在0.6~0.8的菌懸液備用,開啟紫外燈,在燈預(yù)熱20 min后,將菌懸液滴加在培養(yǎng)皿中直至完全浸沒培養(yǎng)皿且菌懸液高約1 mm,放置于20 W紫外燈下0、20、25、30、35 cm處,用磁力攪拌器,在攪拌狀態(tài)下分別照射0、10、20、30、40、50、60 s。

    1.3.4致死率計(jì)算

    將經(jīng)過誘變處理后的菌懸液按10倍梯度稀釋6次,分別記為10-1~10-6。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)各個(gè)稀釋梯度進(jìn)行計(jì)數(shù),得出稀釋10-4、10-5、10-6時(shí)計(jì)數(shù)效果較好。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)將10-4、10-5、10-6的稀釋菌懸液涂布在MRS固體培養(yǎng)基上,37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h,每個(gè)梯度做3組平行實(shí)驗(yàn),未經(jīng)誘變的菌懸液作對(duì)照組,在相同條件下培養(yǎng),進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)。通過平板菌落數(shù)來計(jì)算誘變致死率[9-10],并獲得致死率曲線。

    1.3.5耐高溫篩選

    將紫外誘變得到的突變株接種于MRS液體培養(yǎng)基中37 ℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期,轉(zhuǎn)移至60 ℃水浴鍋中培養(yǎng)30 min,再轉(zhuǎn)接至MRS液體培養(yǎng)基,同時(shí)平板計(jì)數(shù)其存活率。在60 ℃水浴30 min條件下反復(fù)傳代5代,并篩選連續(xù)2~3代的存活率達(dá)90%以上的菌株,再繼續(xù)提高水浴溫度至75 ℃,以此循環(huán)逐漸提高水浴溫度對(duì)菌株進(jìn)行梯度耐高溫篩選[11-12]。

    1.3.6菌株富集培養(yǎng)

    將紫外誘變得到的耐高溫突變株富集培養(yǎng)。取1 mL菌液,加入9 mL的無菌水,得到稀釋10倍的菌液,然后以稀釋10倍的菌液為母液建立稀釋100倍的菌液。重復(fù)上述步驟,直到得到稀釋6個(gè)梯度倍數(shù)。用MRS培養(yǎng)基分別將上述6個(gè)梯度的菌株在無菌條件下培養(yǎng),分別記為1號(hào),2號(hào),3號(hào),4號(hào),5號(hào),6號(hào)。37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察鏡檢,選用最適合的菌落進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),在37 ℃條件下培養(yǎng)24 h,測OD600值。重復(fù)上述操作連續(xù)傳代5次以上,得到富集培養(yǎng)[13]后活性好的菌株。

    1.3.7產(chǎn)酸量測定

    將5 mL待測液放入250 mL的錐形瓶中用排CO2后的蒸餾水稀釋適當(dāng)倍數(shù),滴3滴酚酞指示液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%)并搖勻,用0.1 mol/L NaOH的標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)試液進(jìn)行滴定,滴定終點(diǎn)為微紅色且30 s不褪色,記錄消耗標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的體積并計(jì)算其總產(chǎn)酸量[14-16]。

    (1)

    式(1)中,c2為產(chǎn)酸量,mol/L;c1為標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液濃度,mol/L;F為試液稀釋倍數(shù);V1為滴定發(fā)酵液所消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;V2為滴定空白對(duì)照組所消耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL;V3為待測發(fā)酵液體積,mL。

    1.3.8不同階段菌株編號(hào)

    將經(jīng)過紫外誘變處理后未耐高溫前篩選的菌株分別編號(hào)為:HCUL 1.1801-1912Y、HCUL 1.1802-1912Y、HCUL 1.1706-1912Y、HCUL 1.1707-1912Y;將經(jīng)過紫外誘變處理后且經(jīng)過高溫溫度梯度篩選的菌株分別編號(hào)為:HCUL 1.1801-1912X、HCUL 1.1802-1912X、HCUL 1.1706-1912X、HCUL 1.1707-1912X;將經(jīng)過紫外耐高溫選育后富集培養(yǎng)的菌株分別編號(hào)為:HCUL 1.1801-1912Z、HCUL 1.1802-1912Z、HCUL 1.1706-1912Z、HCUL 1.1707-1912Z。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    使用Origin Pro 2019軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差并繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 培養(yǎng)時(shí)間的確定

    測定HCUL 1.1801-1912、HCUL 1.1802-1912、HCUL 1.1706-1912、HCUL 1.1707-1912 4株菌的生長曲線見圖1。

    圖1 4株原菌生長曲線

    由圖1可知,培養(yǎng)3 h后,菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)期;培養(yǎng)12 h后,菌體進(jìn)入穩(wěn)定期。由于在對(duì)數(shù)期,菌體生長代謝旺盛,適合正向突變,所以選取培養(yǎng)至第8 h的培養(yǎng)液進(jìn)行紫外誘變。

    2.2 紫外誘變適宜照射條件的確定

    紫外誘變對(duì)菌株致死率的影響研究結(jié)果見圖2。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn),選取30 s為紫外照射時(shí)間,在照射強(qiáng)度為20 W的紫外光下,改變紫外照射距離,根據(jù)菌株的致死率繪制致死率曲線,見圖2(a)。選取30 cm為紫外照射距離,在照射強(qiáng)度為20 W的紫外光下,改變紫外照射時(shí)間,見圖2(b)。

    圖2 紫外誘變對(duì)菌株致死率的影響

    由圖2(a)可知,隨著照射距離增加致死率減小,在紫外距離30 cm時(shí),菌株的致死率為75.99%;由圖2(b)可知,隨著照射時(shí)間增加致死率增大,在紫外照射時(shí)間30 s時(shí),菌株的致死率為83.79%。近年研究發(fā)現(xiàn),稍低的誘變劑量有利于正向突變,一般采用75%~85%致死率的劑量[17-18]。故取紫外距離30 cm、紫外照射時(shí)間30 s為紫外誘變條件。

    2.3 突變菌株耐高溫篩選結(jié)果

    為確定篩選的菌株是突變菌株,將4株原菌在75 ℃水浴鍋下進(jìn)行水浴,見圖3。隨著水浴時(shí)間的增加,菌株的致死率增加,4株原菌都無法在75 ℃高溫下耐受超過10 min。

    圖3 4株原菌在75 ℃水浴下致死率

    篩選生長速度最快,菌液濃度最高、pH值最低的菌株,分別命名為HCUL 1.1801-1912Y、HCUL 1.1802-1912Y、HCUL 1.1706-1912Y、HCUL 1.1707-1912Y,培養(yǎng)24 h測得的OD600見圖4。由于酸漿豆腐在75 ℃高溫下點(diǎn)漿、蹲腦過程需持續(xù)20~30 min,因此以30 min為高溫處理時(shí)間,將菌株HCUL 1.1801-1912Y、HCUL 1.1802-1912Y、HCUL 1.1706-1912Y、HCUL 1.1707-1912Y其依次在60、65、70、75 ℃水浴鍋中水浴30 min進(jìn)行耐高溫篩選,最終分別獲得可在75 ℃下耐受30 min并生長的菌株,命名為HCUL 1.1801-1912X、HCUL 1.1802-1912X、HCUL 1.1706-1912X、HCUL 1.1707-1912X,培養(yǎng)24 h測得的OD600見圖4。

    圖4 4株菌耐高溫前后生長曲線對(duì)比

    由圖4可知,HCUL 1.1801-1912Y在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值OD600值為2.015,HCUL 1.1801-1912X在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值為1.655,培養(yǎng)24 h后對(duì)比,HCUL 1.1801-1912Y耐高溫后OD600值下降0.360;1.1802-1912Y在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值OD600值為1.975,HCUL 1.1802-1912X在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值為1.617,培養(yǎng)24 h后對(duì)比,HCUL 1.1801-1912Y耐高溫后OD600值下降0.358;HCUL 1.1706-1912Y在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值OD600值為1.960,HCUL 1.1706-1912X在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值為1.516,培養(yǎng)24 h后對(duì)比,HCUL 1.1801-1912Y耐高溫后OD600值下降0.444;HCUL 1.1707-1912Y在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值OD600值為1.960,HCUL 1.1707-1912X在培養(yǎng)12 h時(shí)到達(dá)峰值為1.749,培養(yǎng)24 h后對(duì)比,HCUL 1.1707-1912Y耐高溫后OD600值下降0.211。由此對(duì)比可知,耐高溫后4株菌活力均有所下降,HCUL 1.1801-1912Y菌活力下降最多,HCUL 1.1707-1912Y菌活力下降最少,耐高溫前1.1801-1912Y的菌活力最好,耐高溫后HCUL 1.1707-1912X的菌活力最好,為進(jìn)一步探討4株菌的生長情況,提高菌活性,對(duì)菌株進(jìn)行富集培養(yǎng)。

    2.4 突變菌株富集培養(yǎng)結(jié)果

    由于豆腐點(diǎn)漿溫度在75 ℃以上,且經(jīng)過較低溫梯度60、65、70、75 ℃,耐高溫30 min一次實(shí)驗(yàn)后,為避免實(shí)驗(yàn)偶然性,再分別進(jìn)行溫度梯度耐高溫30 min兩次,觀察菌種生長情況,最終得到經(jīng)75 ℃耐高溫30 min三次,篩選出的菌株仍生長且長勢較優(yōu)。經(jīng)對(duì)比發(fā)現(xiàn)4株菌耐高溫后其生長活力均有所降低,為得到活力較好的菌株,將耐高溫后的菌株分別進(jìn)行富集培養(yǎng),并命名為HCUL 1.1801-1912Z、HCUL 1.1802-1912Z、HCUL 1.1706-1912Z、HCUL 1.1707-1912Z,其生長曲線如圖5。

    圖5 4株菌富集培養(yǎng)后生長曲線對(duì)比

    由圖5可知,HCUL 1.1801-1912Z培養(yǎng)12 h時(shí)達(dá)到峰值OD600為1.915,培養(yǎng)24 h后OD600為1.775;HCUL 1.1802-1912Z的OD600最大為1.906培養(yǎng)24 h后OD600為1.775;HCUL 1.1706-1912Z整體活力在4株菌中最弱,但較富集前有所提高,OD600最大為1.617培養(yǎng)24 h后OD600為1.434;HCUL 1.1707-1912Z最早到達(dá)峰值,OD600最大為1.774培養(yǎng)24 h后OD600為1.559。對(duì)比圖4可得培養(yǎng)24 h后,HCUL 1.1801-1912Z比富集培養(yǎng)前OD600提高了0.277;HCUL 1.1802-1912Z比富集培養(yǎng)前OD600提高了0.329;HCUL 1.1706-1912Z比富集培養(yǎng)前OD600提高了0.094;HCUL 1.1707-1912Z比富集培養(yǎng)前OD600提高了0.010。HCUL 1.1802-1912Z經(jīng)過富集培養(yǎng)后菌活力提高最為顯著,HCUL 1.1801-1912Z菌活力雖然提高沒有HCUL 1.1802-1912Z多,但在4株菌里菌活性最高,且生長曲線穩(wěn)定。

    2.5 菌株在不同階段的產(chǎn)酸能力比較

    分別測定4株菌在3個(gè)不同階段(紫外誘變處理前、紫外誘變處理后耐高溫篩選前、紫外誘變耐高溫篩選后)培養(yǎng)48 h的產(chǎn)酸量,每隔4 h測定產(chǎn)酸量如圖6。

    圖6 4株菌不同階段產(chǎn)酸情況對(duì)比

    產(chǎn)酸量是乳酸菌發(fā)酵酸漿的重要指標(biāo),產(chǎn)酸好的酸漿可制備更優(yōu)質(zhì)的酸漿豆腐。結(jié)合圖6可知在3個(gè)不同階段4株菌培養(yǎng)48 h內(nèi)產(chǎn)酸量均隨時(shí)間增加而增多。在發(fā)酵初期的24 h內(nèi),菌株處于對(duì)數(shù)生長期,產(chǎn)酸能力強(qiáng),隨著發(fā)酵時(shí)間的延長,產(chǎn)酸速率有所下降,48 h后產(chǎn)酸量趨于平穩(wěn)。誘變耐高溫后篩選的4株菌產(chǎn)酸量均較原菌株顯著提高,富集培養(yǎng)后產(chǎn)酸量均有所增加。其中培養(yǎng)48 h后,HCUL 1.1801-1912的產(chǎn)酸量為26.01 g/L,HCUL 1.1801-1912Y的產(chǎn)酸量為45.72 g/L,HCUL 1.1801-1912Z的產(chǎn)酸量為57.06 g/L,HCUL 1.1801-1912Z比原菌種產(chǎn)酸量提高了31.05 g/L是4株菌中產(chǎn)酸量最高的。高的產(chǎn)酸量使發(fā)酵液的pH值降低,對(duì)于酸漿來說pH的下降可抑制其他微生物的生長,對(duì)酸漿的安全性具有重要意義。由此選擇菌株HCUL 1.1801-1912Z作為這4株菌中的最優(yōu)菌。

    3 結(jié) 論

    通過紫外誘變方法對(duì)4株目標(biāo)菌進(jìn)行誘變,紫外誘變條件為紫外照射強(qiáng)度20 W、照射距離30 cm、照射時(shí)間30 s。用耐高溫溫度梯度的方法篩選獲得4株耐75 ℃高溫30 min的菌,溫度梯度誘變是一種有效的育種技術(shù),具有方向性好和遺傳性穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。高溫誘變后的菌株活力、產(chǎn)酸均較之前有所降低,將其培養(yǎng)富集,得到可在75 ℃高溫30 min的條件下依然保持較好的活力和產(chǎn)酸能力的菌。乳酸菌在自然代謝過程中產(chǎn)生有機(jī)酸、蛋白酶等產(chǎn)物[19-20],在豆腐后熟階段能繼續(xù)水解脂肪和蛋白質(zhì)。乳酸菌發(fā)酵降解脂肪為游離脂肪酸,在乳酸菌蛋白酶的作用下大分子蛋白質(zhì)降解為小分子肽和必需氨基酸,改變蛋白質(zhì)的凝膠結(jié)構(gòu), 從而達(dá)到改變產(chǎn)品品質(zhì)的目的。因此誘變耐高溫的菌株應(yīng)用于酸漿豆腐當(dāng)中,將大大提高豆腐后熟階段中的菌活性。通過乳酸菌自然發(fā)酵的代謝產(chǎn)物對(duì)酸漿豆腐蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行改變,可得到品質(zhì)更好的酸漿豆腐,為酸漿豆腐制作提供更優(yōu)的生物材料。由于傳統(tǒng)的酸漿豆腐工藝多為小作坊、家庭式工藝,豆腐品質(zhì)往往因?yàn)椴煌牡乩憝h(huán)境、生活環(huán)境、季節(jié)變化等因素產(chǎn)生較大差異,想要更好進(jìn)行酸漿豆腐工業(yè)化生產(chǎn)的推廣,就需要培育出更優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定的菌株來發(fā)酵酸漿。因此,耐高溫的乳酸菌可以為豆腐酸漿的發(fā)酵提供優(yōu)質(zhì)菌種,更有利于酸漿豆腐的工業(yè)化生產(chǎn)。乳酸菌是研究分類、生化、遺傳、分子生物學(xué)和基因工程的理想材料(在理論上具有重要的學(xué)術(shù)價(jià)值),其通過發(fā)酵產(chǎn)生的有機(jī)酸、特殊酶系、酸菌素等物質(zhì)具有特殊生理功能。豆腐酸漿水[21]中主要包括乳酸菌、醋酸菌、酵母菌等菌種,其中乳酸菌為主要菌種[22-23]。本研究通過紫外誘變、不同溫度梯度篩選出耐高溫且高產(chǎn)酸的乳酸菌,更適用于酸漿豆腐的制作工藝[24],可在豆腐點(diǎn)漿后保持較高的菌活性,在豆腐后熟階段更好發(fā)揮作用,提高豆腐質(zhì)構(gòu)。本研究通過紫外誘變和溫度梯度篩選手段獲得4株耐高溫且產(chǎn)酸好的突變株,其中HCUL 1.1801-1912Z的效果最優(yōu),是4株突變菌中單位時(shí)間生長最快、產(chǎn)酸能力最強(qiáng)的菌,為發(fā)酵酸漿、制作酸漿豆腐提供了更優(yōu)選擇。

    猜你喜歡
    產(chǎn)酸量酸漿株菌
    十二碳二元酸菌種發(fā)酵工藝優(yōu)化
    酸漿草
    卷柏素對(duì)唑類藥物體外抗念株菌的增效作用
    酸漿苦素B的研究進(jìn)展
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:14
    3株耐鹽細(xì)菌對(duì)萘、菲、惹烯和苯并[α]芘的降解性能
    產(chǎn)D-乳酸的德氏乳桿菌保加利亞亞種發(fā)酵工藝研究
    酸漿苦味素B對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用
    中成藥(2017年7期)2017-11-22 07:33:54
    Clustering of Virtual Network Function Instances Oriented to Compatibility in 5G Network
    熱帶醋酸桿菌B104發(fā)酵條件的優(yōu)化研究
    中國釀造(2015年5期)2015-04-24 11:31:40
    酸漿最適自然發(fā)酵條件優(yōu)化
    亚洲最大成人中文| 亚洲av片天天在线观看| 91国产中文字幕| 免费高清视频大片| 男人舔女人的私密视频| 国产精品国产高清国产av| 欧美国产日韩亚洲一区| 午夜免费激情av| 在线免费观看的www视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲中文字幕日韩| 怎么达到女性高潮| 国产激情久久老熟女| 久久香蕉激情| 久久中文字幕一级| 丁香欧美五月| 免费在线观看影片大全网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 我的亚洲天堂| 色av中文字幕| 好男人在线观看高清免费视频 | 成年版毛片免费区| 一级毛片女人18水好多| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品二区激情视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一二三四在线观看免费中文在| 制服人妻中文乱码| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产三级黄色录像| 午夜a级毛片| 999久久久国产精品视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲精品国产一区二区精华液| 99香蕉大伊视频| 日韩大码丰满熟妇| a级毛片在线看网站| 欧美在线一区亚洲| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 九色亚洲精品在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 88av欧美| 久久精品成人免费网站| 午夜福利,免费看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲精华国产精华精| 操美女的视频在线观看| 久久青草综合色| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲自拍偷在线| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产伦人伦偷精品视频| 操美女的视频在线观看| 精品国产国语对白av| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 国产黄a三级三级三级人| 母亲3免费完整高清在线观看| 午夜老司机福利片| 精品一区二区三区av网在线观看| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲 国产 在线| 99热只有精品国产| 一级片免费观看大全| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 性欧美人与动物交配| 午夜久久久久精精品| 老司机深夜福利视频在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产亚洲av嫩草精品影院| 色av中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲专区中文字幕在线| 黄色视频不卡| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美精品啪啪一区二区三区| 97碰自拍视频| 精品国产乱码久久久久久男人| 久9热在线精品视频| 正在播放国产对白刺激| 岛国在线观看网站| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 免费人成视频x8x8入口观看| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲五月色婷婷综合| 91成人精品电影| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一级作爱视频免费观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产精品免费视频内射| 国产av一区二区精品久久| 国产一区二区在线av高清观看| 久9热在线精品视频| 9色porny在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲情色 制服丝袜| 波多野结衣巨乳人妻| 嫩草影视91久久| 99国产精品免费福利视频| 日本 欧美在线| 国产亚洲欧美精品永久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲国产看品久久| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 手机成人av网站| 久久狼人影院| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲欧美精品综合久久99| 在线播放国产精品三级| 又紧又爽又黄一区二区| 1024香蕉在线观看| 在线观看日韩欧美| 99精品在免费线老司机午夜| 一进一出抽搐gif免费好疼| a在线观看视频网站| 日本一区二区免费在线视频| 丁香六月欧美| 韩国精品一区二区三区| 视频区欧美日本亚洲| 日本一区二区免费在线视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产91精品成人一区二区三区| 久久亚洲真实| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲一区二区三区色噜噜| 99精品欧美一区二区三区四区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品一区二区精品视频观看| 两个人免费观看高清视频| 制服丝袜大香蕉在线| 久久这里只有精品19| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产av在哪里看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 波多野结衣一区麻豆| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 欧美成人性av电影在线观看| 精品久久久久久成人av| 午夜两性在线视频| 久久精品影院6| 一区二区三区精品91| 首页视频小说图片口味搜索| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 精品国产一区二区三区四区第35| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 极品人妻少妇av视频| 国产1区2区3区精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| av有码第一页| e午夜精品久久久久久久| 一区二区三区国产精品乱码| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品精品国产色婷婷| 国产成人av教育| 啦啦啦韩国在线观看视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲中文av在线| 在线观看日韩欧美| 丝袜美足系列| 丰满的人妻完整版| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久青草综合色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲人成77777在线视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 麻豆一二三区av精品| 97碰自拍视频| 欧美在线一区亚洲| 亚洲欧美精品综合久久99| 日本黄色视频三级网站网址| 啦啦啦 在线观看视频| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲伊人色综图| 叶爱在线成人免费视频播放| 伦理电影免费视频| 午夜福利高清视频| 免费观看人在逋| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲av熟女| 校园春色视频在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 午夜老司机福利片| 国产亚洲精品一区二区www| 精品久久久久久,| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 在线永久观看黄色视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲专区字幕在线| 精品国产美女av久久久久小说| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久香蕉精品热| 国产精品一区二区三区四区久久 | 国产精品99久久99久久久不卡| 美女大奶头视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩成人在线观看一区二区三区| √禁漫天堂资源中文www| bbb黄色大片| 99香蕉大伊视频| 亚洲五月婷婷丁香| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美久久黑人一区二区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产一区二区在线av高清观看| 日本a在线网址| 女警被强在线播放| 精品日产1卡2卡| 操美女的视频在线观看| 久久草成人影院| 91精品国产国语对白视频| 天堂影院成人在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 我的亚洲天堂| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线观看一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影 | 看免费av毛片| 日韩国内少妇激情av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 久久这里只有精品19| 精品日产1卡2卡| 99精品在免费线老司机午夜| 女性被躁到高潮视频| 激情视频va一区二区三区| 亚洲少妇的诱惑av| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久热这里只有精品99| 男女床上黄色一级片免费看| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美成人a在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲图色成人| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产毛片a区久久久久| 动漫黄色视频在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产精品女同一区二区软件 | 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品野战在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品人妻熟女av久视频| 中文在线观看免费www的网站| 黄色日韩在线| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品一及| 99久国产av精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 午夜福利在线观看吧| 欧美人与善性xxx| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品永久免费网站| 精品久久久久久,| 一本久久中文字幕| 亚洲图色成人| 国产高清不卡午夜福利| 婷婷色综合大香蕉| 久久久久久久精品吃奶| 桃色一区二区三区在线观看| 直男gayav资源| 精品不卡国产一区二区三区| 99热只有精品国产| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲人成网站在线播| 国产成人一区二区在线| 久久久成人免费电影| 一进一出抽搐动态| 看十八女毛片水多多多| 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜福利成人在线免费观看| 免费在线观看影片大全网站| or卡值多少钱| 久久久国产成人精品二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 淫秽高清视频在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美在线一区亚洲| 联通29元200g的流量卡| 黄片wwwwww| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品国产高清国产av| 日韩精品有码人妻一区| 日韩高清综合在线| 搞女人的毛片| 精品久久久久久久久av| 高清在线国产一区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产在线精品亚洲第一网站| 一区二区三区激情视频| 亚洲av成人av| 久久草成人影院| 伦理电影大哥的女人| 99久久中文字幕三级久久日本| aaaaa片日本免费| 国产一级毛片七仙女欲春2| 精品免费久久久久久久清纯| 免费人成在线观看视频色| 国内揄拍国产精品人妻在线| 少妇人妻精品综合一区二区 | 男人和女人高潮做爰伦理| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 99精品久久久久人妻精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日韩欧美精品v在线| 日韩欧美精品免费久久| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 高清毛片免费观看视频网站| 欧美日韩国产亚洲二区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲精品456在线播放app | 国模一区二区三区四区视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美日本亚洲视频在线播放| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产成人一区二区在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久午夜欧美精品| 春色校园在线视频观看| 少妇高潮的动态图| 欧美一区二区亚洲| 成人美女网站在线观看视频| 久久亚洲精品不卡| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产91精品成人一区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 成人av一区二区三区在线看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产在线男女| 草草在线视频免费看| 色视频www国产| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜日韩欧美国产| 国产成年人精品一区二区| 91麻豆av在线| 亚洲av中文av极速乱 | 久久久久久久久久成人| 色哟哟·www| 日韩欧美在线二视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 熟女电影av网| 最近最新免费中文字幕在线| 国产午夜精品论理片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 深夜a级毛片| 日韩 亚洲 欧美在线| 中文亚洲av片在线观看爽| 色播亚洲综合网| 天天一区二区日本电影三级| or卡值多少钱| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲乱码一区二区免费版| 桃红色精品国产亚洲av| 在线观看66精品国产| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 色5月婷婷丁香| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲不卡免费看| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久精品国产亚洲网站| 22中文网久久字幕| 亚洲最大成人手机在线| 少妇高潮的动态图| 露出奶头的视频| 久久久精品大字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 欧美zozozo另类| 国产精品乱码一区二三区的特点| 欧美日韩乱码在线| 99热这里只有是精品50| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 免费看av在线观看网站| 久久精品人妻少妇| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲经典国产精华液单| 毛片一级片免费看久久久久 | 动漫黄色视频在线观看| 69av精品久久久久久| 亚洲,欧美,日韩| 极品教师在线免费播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产亚洲91精品色在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 日本 av在线| 91精品国产九色| 亚洲真实伦在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 久99久视频精品免费| 黄色配什么色好看| 日韩欧美三级三区| 国产美女午夜福利| 欧美精品啪啪一区二区三区| 九色成人免费人妻av| 99热这里只有是精品50| 深夜精品福利| 免费人成在线观看视频色| 日韩欧美三级三区| 亚洲在线自拍视频| 一进一出好大好爽视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 午夜福利成人在线免费观看| 黄色女人牲交| 特大巨黑吊av在线直播| 草草在线视频免费看| 色av中文字幕| 亚洲av中文av极速乱 | 日本一本二区三区精品| 久久中文看片网| 中文在线观看免费www的网站| 久久久久久久久大av| 久久久精品大字幕| 黄色视频,在线免费观看| 黄片wwwwww| 国产日本99.免费观看| av在线老鸭窝| 成人av一区二区三区在线看| 99热只有精品国产| 高清毛片免费观看视频网站| av在线老鸭窝| 精品人妻1区二区| 九九热线精品视视频播放| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品亚洲美女久久久| 我的女老师完整版在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久久久久大精品| 亚洲avbb在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产一区二区激情短视频| 日本三级黄在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品久久久久久av不卡| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 日本在线视频免费播放| 免费在线观看影片大全网站| 最近中文字幕高清免费大全6 | 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲av美国av| bbb黄色大片| 国内精品一区二区在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产日本99.免费观看| av.在线天堂| 我要搜黄色片| 美女被艹到高潮喷水动态| 村上凉子中文字幕在线| 久久久久国内视频| 波多野结衣巨乳人妻| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 一级a爱片免费观看的视频| 久久九九热精品免费| 国产亚洲精品av在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 桃色一区二区三区在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产成人a区在线观看| 亚洲美女黄片视频| 欧美在线一区亚洲| 欧美高清成人免费视频www| 高清日韩中文字幕在线| 三级毛片av免费| 国产老妇女一区| 观看美女的网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久国产乱子免费精品| 久9热在线精品视频| 波多野结衣巨乳人妻| 日日撸夜夜添| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久久久久黄片| 干丝袜人妻中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 久久久久久久久久成人| 亚洲美女视频黄频| 国产日本99.免费观看| 麻豆成人av在线观看| 岛国在线免费视频观看| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲综合色惰| 又爽又黄无遮挡网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲黑人精品在线| 91在线观看av| 国产av不卡久久| 国产综合懂色| 日本 av在线| 国产亚洲欧美98| 中文字幕av成人在线电影| 久久九九热精品免费| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品免费久久久久久久清纯| 少妇的逼水好多| 深夜精品福利| 九九爱精品视频在线观看| 美女免费视频网站| 精品无人区乱码1区二区| 三级国产精品欧美在线观看| 99riav亚洲国产免费| 国产黄片美女视频| 男女之事视频高清在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲国产欧美人成| 久久久精品大字幕| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲av成人精品一区久久| 日日撸夜夜添| 欧美国产日韩亚洲一区| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美xxxx性猛交bbbb| 成人特级黄色片久久久久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲性久久影院| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 99久久精品热视频| 中出人妻视频一区二区| 无遮挡黄片免费观看| 一级黄片播放器| 12—13女人毛片做爰片一| 免费观看的影片在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国内精品一区二区在线观看| 岛国在线免费视频观看| 亚洲欧美日韩东京热| 听说在线观看完整版免费高清| 麻豆一二三区av精品| 国产成人福利小说| 可以在线观看毛片的网站| 波多野结衣高清作品| 九色国产91popny在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 97碰自拍视频| 久久亚洲真实| 黄色配什么色好看| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产高潮美女av| 国产亚洲精品久久久com| 国产视频一区二区在线看| 18禁在线播放成人免费| 免费观看精品视频网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美极品一区二区三区四区| 国产精品无大码| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久国产乱子免费精品| 久久99热6这里只有精品| 日韩一本色道免费dvd| 一进一出抽搐动态| 22中文网久久字幕| 毛片女人毛片| 不卡一级毛片| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲国产高清在线一区二区三| 性色avwww在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 久久久久久久精品吃奶| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 看黄色毛片网站| 色综合站精品国产| 国产伦精品一区二区三区四那| 精品久久久久久久久av| 免费人成在线观看视频色|