羅非魚寄生嗜麗魚蟲的形態(tài)描述及系統(tǒng)發(fā)育研究

容夢(mèng)婕，喀迪爾丁·艾爾肯，張文潤(rùn)，岳 城，郝翠蘭

(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052 )

羅非魚(Oreochromis)屬鱸形目、慈鯛科，又稱“非洲鯽魚”，自然分布遍及非洲內(nèi)陸及中東大西洋沿岸咸淡水地區(qū)，向北分布至以色列及約旦等地，因其適應(yīng)性強(qiáng)、生長(zhǎng)快、繁殖力高和食性廣等特點(diǎn)，現(xiàn)已成為世界上養(yǎng)殖最廣、推廣最快的溫水性魚類。目前作為全球最大的羅非魚養(yǎng)殖和出口國(guó)家[1-2]，中國(guó)最初于1957年從越南引進(jìn)了莫桑比克羅非魚(O.mossambicus)，隨后引入其他羅非魚進(jìn)行養(yǎng)殖以及品種改良[3]。羅非魚耐低氧、抗病力強(qiáng)，又多數(shù)屬粗放養(yǎng)殖，因此與其他養(yǎng)殖魚類相比發(fā)病較少。但隨著密養(yǎng)與精養(yǎng)的出現(xiàn)，魚病問題逐漸顯露，而寄生蟲性疾病是影響羅非魚養(yǎng)殖發(fā)展的主要限制因素之一，尤其是單殖吸蟲。

嗜麗魚蟲屬(Cichlidogyrus)屬錨首蟲亞科，是寄生在慈鯛科魚類中的主要單殖吸蟲。據(jù)報(bào)道，世界上目前已知的嗜麗魚蟲有87種[4-9]，其中75種寄生于慈鯛科魚類[10]。在中國(guó)，對(duì)該屬種的記錄相對(duì)較晚。2006年吳相云等[11]在廣東養(yǎng)殖的羅非魚鰓上發(fā)現(xiàn)了2種單殖吸蟲，分別為嗜麗魚蟲屬的幾丁嗜麗魚蟲(C.sclerosus)及盾形片蟲屬(Scutogyrus)的長(zhǎng)角盾形片蟲(S.longicornis)，該記錄在我國(guó)是新紀(jì)錄屬種。隨后，在珠江[12]、瀾滄江[13-15]及南方的天然水系[16]等地均有羅非魚感染嗜麗魚蟲屬的報(bào)道。這些報(bào)道均以鑒定單殖吸蟲的后吸器和交接器等幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)的形態(tài)鑒定為主，然而由于蟲體個(gè)體較小，種類多，且常受到各種客觀或主觀因素的影響，如生長(zhǎng)的生態(tài)環(huán)境和宿主不同，試驗(yàn)方法及觀察角度不同等[17]，僅依據(jù)形態(tài)學(xué)的特征難以對(duì)蟲體進(jìn)行正確的鑒別。隨著分子生物學(xué)的日臻成熟，將DNA分子作為遺傳標(biāo)記的系統(tǒng)學(xué)彌補(bǔ)了傳統(tǒng)分類學(xué)的不足，對(duì)蟲種鑒定予以輔助，并且能為種間親緣關(guān)系提供證據(jù)[18]。筆者旨在通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法，對(duì)在烏魯木齊市市售羅非魚鰓中采集到的2種錨首蟲進(jìn)行物種鑒定，以期明確該蟲體的種類，并為該蟲在分子系統(tǒng)進(jìn)化方面積累資料。

1 材料與方法

1.1 樣品的來源與處理

2018年11月—2019年5月，對(duì)新疆烏魯木齊北園春市場(chǎng)市售魚做寄生蟲學(xué)調(diào)查期間，先后采集到羅非魚82尾。將新鮮的魚標(biāo)本及時(shí)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，經(jīng)拍照、測(cè)量和稱量質(zhì)量等記錄后，用常規(guī)的解剖法處死魚類。而后取出完整的魚鰓，置于培養(yǎng)皿中，將魚鰓分離成單片，并用解剖針輕輕刮取黏液。在解剖鏡下逐一檢查，挑取蟲體。發(fā)現(xiàn)寄生蟲后將其吸取到盛有清水的小皿中，沖洗干凈后，將其吸取到1.5 mL的EP管中，滴加體積分?jǐn)?shù)75%和95%的乙醇溶液保存，分別用于標(biāo)本制作和DNA提取。

1.2 形態(tài)學(xué)鑒定

在解剖鏡下挑取形態(tài)完整的35只蟲體逐一放置在載玻片上，制成水封片或用4%聚乙烯乳酸酚固定封片。在光學(xué)顯微鏡(Nikon E2000)下觀察其幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)，參照文獻(xiàn)[19]的測(cè)量方法，通過EZ-MET軟件測(cè)定后吸器及交接器中的幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)，度量單位以微米計(jì)(括號(hào)前的數(shù)值為所測(cè)量標(biāo)本的平均值，括號(hào)中為量度變化范圍)。利用t檢驗(yàn)比較測(cè)量結(jié)果平均數(shù)的差異是否顯著。最后繪制特征圖。所制蟲體標(biāo)本保存在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院寄生蟲教研室。

1.3 DNA提取

取95%乙醇固定的蟲體樣本若干只，再次沖洗后置于TE緩沖液(pH 8.0)中浸泡過夜后，吸去TE緩沖液，分別裝入1.5 mL的EP管中，用TransGen動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒提取蟲體DNA，在冰箱中-20 ℃保存，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.4 目的基因的PCR擴(kuò)增及測(cè)序

3個(gè)基因的PCR反應(yīng)體系相同，總體積為25 μL，2×Easy Taq PCR SuperMix 12.5 μL，1 pmol/μL上下游引物各1 μL，10 ng/μL的模板2 μL，ddH2O 8.5 μL。同時(shí)，以雙蒸水代替模板DNA作為陰性對(duì)照。相關(guān)引物信息及PCR反應(yīng)條件見表1。

表1 PCR引物及反應(yīng)條件

PCR反應(yīng)結(jié)束后，將擴(kuò)增的產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖電泳分析，切取目的條帶，并用TransGen Biotech(全氏金)膠回收試劑盒進(jìn)行純化。純化產(chǎn)物連接到pMD18-T載體上，再轉(zhuǎn)入大腸桿菌(Escherichiacoli)DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，LB平板培養(yǎng)，經(jīng)PCR檢測(cè)后每個(gè)樣品選取2個(gè)陽(yáng)性克隆送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.5 序列比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育分析

測(cè)序結(jié)果，用DNASTAR軟件包中的 SeqMan 軟件對(duì)獲得的基因序列進(jìn)行校對(duì)和編輯，在DNAMAN 6.0軟件中進(jìn)行序列比對(duì)，計(jì)算序列間的差異百分比。在美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫(kù)中選取相似度較高的嗜麗魚蟲屬28S rDNA及18S-ITS1-5.8S序列，并分別以Euryhaliotremafastig-atum和相似指環(huán)蟲(Dactylogyrussimilis)為外類群，運(yùn)用MEGA 7.0軟件篩選出28S rRNA和18S-ITS1-5.8S rDNA的最大似然樹最佳替換模型分別為K2+I+G和K2+G，根據(jù)其模型構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并計(jì)算遺傳距離進(jìn)行分析。嗜麗魚蟲的COⅠ序列信息較少，因此未進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析，所得的測(cè)序結(jié)果直接上傳至GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)。

2 結(jié) 果

羅非魚共采集82尾，除了在鰓絲上檢出嗜麗魚蟲外，在其他內(nèi)部的臟器組織和體表皮膚上，均未發(fā)現(xiàn)其他的病原體存在。嗜麗魚蟲的感染率為86.5%，每尾魚感染1～35枚蟲體，每片鰓感染1～10枚，平均感染強(qiáng)度為12.5。

2.1 形態(tài)學(xué)結(jié)果

2.1.1 幾丁嗜麗魚蟲

形態(tài)描述：基于 12 個(gè)封片標(biāo)本進(jìn)行描述及測(cè)量。蟲體體型較大(圖1a)，大小862.2(616.9～1185.9) μm×186.6(141.4～228.2) μm，頭腺發(fā)達(dá)，具有1對(duì)眼點(diǎn)，后吸器與體前部區(qū)分不明顯。后吸器含2對(duì)中央大鉤、2根聯(lián)結(jié)片及7對(duì)邊緣小鉤(圖1b)。背中央大鉤與腹中央大鉤的形狀、大小相近，內(nèi)外突分化不明顯，鉤體深度彎曲且附有鍵帶。背中央大鉤(DG)：全長(zhǎng)a=31.8(29.2～33.3) μm，鉤基部長(zhǎng)b=32.2(34.2～29.8) μm，外突長(zhǎng)c=4.5(3.5～5.0) μm，內(nèi)突長(zhǎng)d=2.3 μm，鉤尖長(zhǎng)e=12.1(9.6～15.7) μm。腹中央大鉤(VG)：全長(zhǎng)a=31.6(29.8～34.3) μm，鉤基部長(zhǎng)b=32.7(30.4～34.3) μm，外突長(zhǎng)c=5.4 μm，內(nèi)突長(zhǎng)d=3 μm，鉤尖長(zhǎng)e=12.8(10.3～15.7) μm。背聯(lián)結(jié)片(DB)具2個(gè)“梨形”的耳狀突起，中空：x=43.4(35.5～60.0) μm，y=15.6(10.1～18.6) μm，h=23.5(20.7～28.0) μm，w=13.7(11.7～14.9) μm。腹聯(lián)結(jié)片(VB)呈“V”形，兩端鈍圓：x=45.3(37.2～54.2) μm，w=10.7(7.8～15.0) μm。邊緣小鉤(U)7對(duì)，大小基本一致，U=16.5(14.9～17.5) μm。

交接器(MA)較大，由交接管與支持器組成(圖1c)。交接管長(zhǎng)而圓拱，末端逐漸變得尖細(xì)，基部呈鋸齒板狀結(jié)構(gòu)，近“扇形”。支持器膨大，有明顯的肩部，末端“指狀”彎曲。交接管(Pe)長(zhǎng)63.9(51.9～73.4) μm，交接管基部(He)長(zhǎng)13.8(11.3～16.0) μm，支持器(Ap)長(zhǎng)67.9(55.8～92.1) μm。陰道不易見，輕微幾丁質(zhì)化。

圖1 幾丁嗜麗魚蟲整蟲(a)、后吸器(b、d)、交接器(c、e)Fig.1 Whole view of parasite C. sclerosusa (a), haptor (b and d), and copulatory organ(c and e) a、b、c.鏡下圖；d、e.手繪圖；d.比例尺=50 μm; e.比例尺=25 μm. a, b and c.image under a microscope; d and e.hand drawing; d.scale bar=50 μm; e.scale bar=25 μm.

2.1.2 彼麗嗜麗魚蟲(C.mbirizei)

形態(tài)描述：基于23個(gè)封片標(biāo)本進(jìn)行描述及測(cè)量。蟲體呈“紡錘形”(圖2a)，大小660.5(305.8～855.5) μm×96.3(49.8～152.8) μm，頭腺有3～4對(duì)，眼點(diǎn)一對(duì)。咽部球形，后吸器為圓形，有2對(duì)中央大鉤、2根聯(lián)結(jié)片和7對(duì)邊緣小鉤(圖2b)。背、腹中央大鉤大小相近，內(nèi)外突分化明顯，鉤尖彎曲。背中央大鉤(DG)：全長(zhǎng)a=48.7(45.1～54.3) μm，鉤基部長(zhǎng)b=45.4(37.7～55.4) μm，外突長(zhǎng)c=6.3(3.7～13.7) μm，內(nèi)突長(zhǎng)d=10.1(3.7～18.4) μm，鉤尖長(zhǎng)e=15.9(13.2～18.2) μm。腹中央大鉤(VG)：全長(zhǎng)a=46.2(40.5～51.1) μm，鉤基部長(zhǎng)b=40.2(34.8～47.4) μm，外突長(zhǎng)c=4.8(2.1～10.0) μm，內(nèi)突長(zhǎng)d=10.5(2.4～18.2) μm，鉤尖長(zhǎng)e=14.7(11.3～17.5) μm。背聯(lián)結(jié)片(DB)拱形，具2個(gè)耳狀突起，中空：x=48.8(38.4～62.7) μm，y=21.5(17.1～27.2) μm，h=24.9(19.9～31.6) μm，w=13.9(10.1～17.3) μm。腹聯(lián)結(jié)片(VB)呈“V”形，彎曲程度大，近銳角，兩側(cè)末端鈍圓且在前緣有凹陷：x=32.2(24.8～63.2) μm，w=8.6(5.6～11.1) μm。邊緣小鉤(U)7對(duì)，其中第4、5對(duì)邊緣小鉤相對(duì)較大U(Ⅳ～Ⅴ)=24.6(16.5～31.2) μm，其他的大小基本一致，U(Ⅰ～Ⅲ、Ⅵ～Ⅶ)=18.3(12.6～26.2) μm。

交接器(MA)由交接管與支持器組成(圖2c)，交接管非常長(zhǎng)且細(xì)，基部球形并有橢圓形的膜狀腺體。管狀支持器，遠(yuǎn)端分裂出兩個(gè)明顯的鈍圓凸起，基部結(jié)構(gòu)寬而扁，形同“麻葉”。交接管(Pe)長(zhǎng)177.7(80.2～255.0) μm，交接管基部(He)長(zhǎng)17.2(9.1～19.4) μm，支持器(Ap)長(zhǎng)48.4(35.5～68.5) μm。陰道(Vg)可見，細(xì)且呈螺旋狀卷曲。

圖2 彼麗嗜麗魚蟲整蟲(a)、后吸器(b、d)、交接器(c、e)Fig.2 Whole view of parasite C. mbirizei (a), haptor (b and d), and copulatory organ(c and e) a、b、c.鏡下圖； d、e.手繪圖； d.比例尺=50 μm; e.比例尺=25 μm. a, b and c.image under a microscope; d and e.hand drawing; d.scale bar=50 μm; e.scale bar=25 μm.

2.2 分子生物學(xué)結(jié)果

2.2.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果

幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)和彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23、MJ 33)樣品的3個(gè)基因區(qū)段全部擴(kuò)增成功。其中，28S基因片段長(zhǎng)度均為863 bp，18S-ITS1-5.8S擴(kuò)增片段長(zhǎng)度分別為1019 bp和1005 bp，COⅠ基因擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度分別為592 bp和572 bp。2種嗜麗魚蟲的基因序列均已上傳至GenBank(MN078042、MN078060、MN905938、MN905939、MN905506)。

2.2.2 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)結(jié)果

對(duì)樣品幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)和彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23、MJ 33)的28S rDNA序列進(jìn)行BLAST分析比對(duì)，結(jié)果幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)與GenBank上發(fā)表的來自中國(guó)(DQ157660.1)、捷克(MH767401.1)的幾丁嗜麗魚蟲序列的相似性分別為99.8%和100%，GC含量為49.6%；彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23、MJ 33)與來自巴西(MG030378.1)的彼麗嗜麗魚蟲序列的相似性達(dá)99.6%，與刀莖嗜麗魚蟲(C.cirratus)相似性為99.3%，GC含量為50.6%。18S-ITS1-5.8S基因序列經(jīng)BLAST比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)與來自巴西(KX869722.1)、捷克(MH767390.1)及中國(guó)(DQ537359.1)的幾丁嗜麗魚蟲的相似性均在99.5%以上，彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23)與巴西(MG030376.1)、芬蘭(MG973076.1)的彼麗嗜麗魚蟲序列相似性分別為100%和94%，與捷克(HE792784.1)采集的刀莖嗜麗魚蟲相似性為99.6%。

2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育分析

在基于28S rDNA序列的最大似然樹(圖3)中，所有種類的嗜麗魚蟲都獨(dú)立形成一個(gè)分支，幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)與其他幾丁嗜麗魚蟲聚為一支，自舉值為99%；彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23、MJ 33)與彼麗嗜麗魚蟲及刀莖嗜麗魚蟲聚為一支，且拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)穩(wěn)定。遺傳距離矩陣顯示，分析所用的嗜麗魚蟲種間的遺傳距離在0.005～0.079，種與種之間較為相近，與盾形片蟲屬的屬間距離為0.044～0.084。本試驗(yàn)所得的幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)的28S rDNA序列與來自兩個(gè)地區(qū)的幾丁嗜麗魚蟲之間的距離均為0.000。彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23、MJ 33)與彼麗嗜麗魚蟲、刀莖嗜麗魚蟲兩兩之間的遺傳距離也均為0.000，而與其他種的遺傳距離為0.021～0.064。

圖3 基于28S rDNA序列構(gòu)建的羅非魚寄生嗜麗魚蟲最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.3 Phylogenetic tree of parasitic Cichlidogyrus in tilapia based on 28S rDNA sequences by the ML method

基于18S-ITS1-5.8S rDNA序列所構(gòu)建的最大似然樹(圖4)，其結(jié)果與28S 序列的結(jié)果相一致。同時(shí)，從遺傳距離矩陣可以看出，嗜麗魚蟲的種間距離為0.010～0.152，幾丁嗜麗魚蟲(MJ 12)與幾丁嗜麗魚蟲間的距離為0.000，彼麗嗜麗魚蟲(MJ 23)與彼麗嗜麗魚蟲和刀莖嗜麗魚蟲之間的遺傳距離分別為0.000和0.003。這與形態(tài)學(xué)結(jié)果相同，并且彼麗嗜麗魚蟲和刀莖嗜麗魚蟲可能是同一種。

圖4 基于18S-ITS1-5.8S rDNA序列構(gòu)建的羅非魚寄生嗜麗魚蟲最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.4 Phylogenetic tree of parasitic Cichlidogyrus in tilapia based on 18S-ITS1-5.8S rDNA sequences and the ML method

3 討 論

3.1 羅非魚上寄生兩種嗜麗魚蟲的形態(tài)鑒定

嗜麗魚蟲屬是寄生在慈鯛科魚類中物種最豐富的單殖吸蟲。一般來說，單殖吸蟲具有較強(qiáng)的宿主特異性，但該屬對(duì)寄生宿主的專一性不強(qiáng)，在大多數(shù)情況下，屬于廣泛性寄生(寄生在多種宿主上)，也存在在單一宿主上寄生多種嗜麗魚蟲的現(xiàn)象。其中羅非魚是其廣泛寄生的宿主，約有1～20種蟲子寄生于同一種宿主上[10]。因此，宿主的分類地位不能作為嗜麗魚蟲分類鑒定的依據(jù)。與一般的單殖吸蟲一樣，嗜麗魚蟲屬的種間分類依據(jù)主要是幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)(包括后吸器和交接器)的形態(tài)學(xué)特征。

幾丁嗜麗魚蟲分布廣泛，在很多國(guó)家或地區(qū)均有羅非魚感染該蟲的報(bào)道，如南非[23]、肯尼亞[24]、烏干達(dá)[25]、日本[26]、墨西哥[27]等。本試驗(yàn)所發(fā)現(xiàn)的幾丁嗜麗魚蟲在形態(tài)和測(cè)量值上與Paperna等[28]的原始記錄一致，并且基于28S和18S-ITS1-5.8S序列的進(jìn)化樹及遺傳矩陣均表明，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的蟲體之一為幾丁嗜麗魚蟲。

彼麗嗜麗魚蟲最早由Bukinga等[7]在非洲坦噶尼喀湖的羅非魚鰓部采集并記錄，而后在泰國(guó)[29]進(jìn)行了重新描述。本試驗(yàn)通過直觀的形態(tài)圖比較，發(fā)現(xiàn)在新疆采集的彼麗嗜麗魚蟲(圖5a)與原始記錄中(圖5b)的部分結(jié)構(gòu)略有不同，主要表現(xiàn)在：前者腹連接片的彎曲程度大，呈現(xiàn)出弧度約75°的銳角，而后者腹連接片較平，呈鈍角的“V形”；新疆采集的彼麗嗜麗魚蟲支持器基部扁而寬，而在原始記錄里，該蟲的支持器基部較窄，并附著在交接管“球狀”的基部上。這些結(jié)構(gòu)的差異可能是因?yàn)榘l(fā)育和寄生蟲對(duì)宿主或局部環(huán)境的適應(yīng)而發(fā)生的變化[30]，也可能是由于蟲子處在不同的伸縮狀態(tài)，造成連接片的彎曲差異。

圖5 彼麗嗜麗魚蟲(a、b)和刀莖嗜麗魚蟲(c)的幾丁質(zhì)結(jié)構(gòu)比較Fig.5 The comparison of chitinous structure between C. mbirizei (a and b) and C. cirratus (c) DB.背聯(lián)結(jié)片；DA.背中央大鉤；VB.腹聯(lián)結(jié)片；VA.腹中央大鉤；MA.交接器；Ap.支持器；He.基部；Pe.交接管. DB.dorsal transverse bar; DA.dorsal anchor; VB.ventral transverse bar; VA.ventral anchor; MA.male apparatus; Ap.accessory piece; He.heel; Pe.penis.

在彼麗嗜麗魚蟲的原始描述中，提出了該蟲形態(tài)與刀莖嗜麗魚蟲(圖5c)形態(tài)相似，但通過交接器的形態(tài)易區(qū)分二者，主要體現(xiàn)在支持器和陰道的部分結(jié)構(gòu)不同。而Zhang等[16]通過電鏡下掃描觀察，提出刀莖嗜麗魚蟲和彼麗嗜麗魚蟲之間，支持器的形態(tài)差異可能是由于觀察的角度不同所造成的，刀莖嗜麗魚蟲與彼麗嗜麗魚蟲可能為同物異名。筆者對(duì)兩者的結(jié)構(gòu)圖及其形態(tài)測(cè)量值做了對(duì)比(表2)，結(jié)果形態(tài)相近，測(cè)量值除交接管及支持器有略微差異外(P<0.05)，其余結(jié)構(gòu)的測(cè)量值基本一致(P>0.05)，這與Zhang等[16]的結(jié)果一致。

表2 已報(bào)道羅非魚寄生彼麗嗜麗魚蟲及刀莖嗜麗魚蟲的形態(tài)測(cè)量結(jié)果比較 μm

(續(xù)表2)

3.2 羅非魚上寄生兩種嗜麗魚蟲的分子生物學(xué)鑒定

本試驗(yàn)選取了常用來解決屬內(nèi)種間系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[18]的28S及用于種間鑒定的18S-ITS1-5.8S核糖體RNA，進(jìn)一步進(jìn)行蟲種鑒定。美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹的結(jié)果表明，所采集的兩種嗜麗魚蟲樣品分別為幾丁嗜麗魚蟲和彼麗嗜麗魚蟲，其結(jié)果與形態(tài)學(xué)結(jié)果相一致。與此同時(shí)，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果進(jìn)一步探究了彼麗嗜麗魚蟲與刀莖嗜麗魚蟲之間的關(guān)系。兩個(gè)分子遺傳標(biāo)記均顯示，本試驗(yàn)采集的彼麗嗜麗魚蟲與巴西的彼麗嗜麗魚蟲的同源性在99.5%以上，與捷克的刀莖嗜麗魚蟲的同源性達(dá)99%，且遺傳距離非常近，而與其他的嗜麗魚蟲遺傳距離較遠(yuǎn)，這與形態(tài)學(xué)特點(diǎn)相符。因此，筆者支持彼麗嗜麗魚蟲與刀莖嗜麗魚蟲為同物異名的說法。

4 結(jié)論與展望

本試驗(yàn)結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法，鑒定出采自烏魯木齊市周邊市場(chǎng)及養(yǎng)殖場(chǎng)的羅非魚上寄生的兩種嗜麗魚蟲分別為幾丁嗜麗魚蟲和彼麗嗜麗魚蟲。同時(shí)，經(jīng)證明彼麗嗜麗魚蟲與刀莖嗜麗魚蟲為同物異名。

近年來，隨著羅非魚產(chǎn)量逐年增長(zhǎng)以及國(guó)際市場(chǎng)需求量不斷擴(kuò)大，我國(guó)羅非魚進(jìn)、出口量飛速增加[32]。羅非魚因其味美價(jià)廉，深受消費(fèi)者和養(yǎng)殖者的喜愛。然而，單殖吸蟲病是淡水魚類水產(chǎn)養(yǎng)殖中引起魚類死亡的原因之一。嗜麗魚蟲主要利用其后吸器附著在魚類的鰓部，吮吸魚鰓部血液、黏液，導(dǎo)致魚類鰓組織局部或全面損傷，從而引入其他病原生物的入侵而形成炎癥，宿主食欲下降，生長(zhǎng)遲緩，嚴(yán)重時(shí)可致魚類大批死亡。據(jù)報(bào)道，原產(chǎn)地羅非魚鰓上寄生的單殖吸蟲種類較多[12]。我國(guó)自2006年在廣東養(yǎng)殖的羅非魚鰓上發(fā)現(xiàn)了兩種嗜麗魚蟲之后，陸續(xù)在珠江、瀾滄江等不同水系均有不同嗜麗魚蟲感染羅非魚的報(bào)道，并且有些優(yōu)勢(shì)蟲種的感染率高達(dá)100%。此外，當(dāng)引進(jìn)的魚中攜帶有寄生蟲，在養(yǎng)殖過程中羅非魚誤入或投放到天然水域中，其所攜帶的寄生蟲也隨著宿主進(jìn)入到相應(yīng)的水域環(huán)境里，這有可能影響和感染本地的其他魚類，造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，并且極有可能影響和改變當(dāng)?shù)佤~類的寄生蟲區(qū)系，這一問題是非常值得關(guān)注的。