早期生長反應(yīng)蛋白1參與肝病發(fā)生主要病理機(jī)制研究進(jìn)展

曾偉蘭 ，汪 艷

（南方醫(yī)科大學(xué)1.藥學(xué)院，2.中心實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510515；3.廣東省肝纖維化工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510515）

早期生長反應(yīng)蛋白1（early growth response factor protein 1，EGR1）屬于即刻早期基因家族成員之一，是參與調(diào)控細(xì)胞生長、分化以及凋亡的重要轉(zhuǎn)錄因子［1］，在肝、心、腦、肺、脾、骨骼肌、腎、卵巢和前列腺等組織均可檢測到其表達(dá)［2］，但在大多數(shù)正常組織的表達(dá)水平較低［1-3］。EGR1在轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）、肝細(xì)胞核因子 4α（hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4α）、轉(zhuǎn)錄因子E2F1（E2F transcription factor 1，E2F1）以及小異二聚體伴侶（small heterodimer partner，SHP）等調(diào)控分子的作用下，通過多種機(jī)制參與肝再生、肝纖維化、酒精性脂肪肝和肝細(xì)胞癌等生理和病理進(jìn)程。現(xiàn)有綜述文獻(xiàn)主要集中于EGR1與各種腫瘤性疾病的相關(guān)性，關(guān)于EGR1參與調(diào)控肝生理病理等過程的系統(tǒng)綜述尚較少報(bào)道。本文針對(duì)EGR1主要生物學(xué)功能及其參與肝病理發(fā)生機(jī)制等研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，并討論其潛在的臨床意義。

1 EGR1分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與功能調(diào)控

EGR1也稱為Zif268，NGFI-A，Krox24或TIS8等，是一種Cys2-His2型核轉(zhuǎn)錄因子，普遍存在于從酵母到人類的真核細(xì)胞。人類EGR1編碼基因位于染色體5q23-q31上。EGR1蛋白分子含543個(gè)氨基酸殘基，包括鋅指DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、反式激活結(jié)構(gòu)域、NGFI-A結(jié)合蛋白（NGFI-A binding protein，NAB）相互作用結(jié)構(gòu)域及核定位序列。NAB1和NAB2相互作用結(jié)構(gòu)域，可抑制EGR1的轉(zhuǎn)錄活性［4-5］。NAB2的表達(dá)本身可以由EGR1控制，當(dāng)EGR1過表達(dá)時(shí)，EGR1的鋅指結(jié)構(gòu)識(shí)別NAB2和NAB1結(jié)合位點(diǎn)，而NAB結(jié)構(gòu)域使EGR1無法識(shí)別特異DNA序列，抑制EGR1轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程，最終對(duì)EGR1表達(dá)水平發(fā)生負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用［5］。因此，EGR1能夠通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制調(diào)節(jié)自身的活性水平。

人EGR1基因啟動(dòng)子含有5個(gè)血清反應(yīng)元件，可被血清反應(yīng)因子及三元復(fù)合因子（ternary complex factor）所識(shí)別。EGR1激活受MAPK家族調(diào)控，包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signalregulated protein kinase，ERK）、c-Jun NH2-末端激酶和P38 MAPK。EGR1是MAPK家族信號(hào)通路的下游靶點(diǎn)。磷酸化的ERK由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核可直接激活EGR1，使其參與細(xì)胞信號(hào)相關(guān)的生理調(diào)控［6］。

與其他即刻早期基因一樣，由于激動(dòng)劑性質(zhì)和細(xì)胞類型的不同，EGR1動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)錄在誘導(dǎo)時(shí)間方面有所差異［7］。EGR1的表達(dá)與環(huán)境性刺激因素有關(guān)，包括生長因子類、細(xì)胞因子類、激素、凝血酶、剪切應(yīng)力和機(jī)械力、神經(jīng)遞質(zhì)、紫外線以及缺氧等［8-11］，其活性調(diào)控的修飾途徑包括乙?；呢?fù)調(diào)控、磷酸化以及泛素化的正調(diào)控［12-13］。

2 EGR1的下游靶基因信號(hào)通路及其分子機(jī)制

EGR1的鋅指結(jié)構(gòu)能高度識(shí)別富含G-C的核苷酸序列，以鋅指依賴方式激活或抑制相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。EGR1下游靶基因主要涉及了參與細(xì)胞生長或分化、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等過程的基因，如與細(xì)胞周期停滯和凋亡相關(guān)的第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten，PTEN），P53，P21，P73及Bcl-2家族的促凋亡蛋白等［14-15］。此外，EGR1不僅調(diào)控炎癥介質(zhì)分子的表達(dá)，如細(xì)胞間黏附分子1、單核細(xì)胞趨化蛋白1、巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2等；還調(diào)控纖維化發(fā)生相關(guān)分子的表達(dá)，如促纖維化細(xì)胞因子、血小板衍生生長因子、結(jié)締組織生長因子和血管內(nèi)皮生長因子等［16-17］。在調(diào)控腫瘤細(xì)胞功能方面，EGR1通過調(diào)節(jié)各種生長因子、抑癌基因、細(xì)胞周期蛋白或凋亡相關(guān)因子，介導(dǎo)細(xì)胞生長和腫瘤的發(fā)生，如EGR1直接誘導(dǎo)的PTEN可抑制肝癌細(xì)胞的遷移與侵襲［18］，活性氧（reactive oxygen species，ROS）激活的 EGR1可經(jīng) ROS/MAPK/EGR1/Bax信號(hào)通路與靶基因Bax結(jié)合，誘導(dǎo)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞凋亡［19］。綜上，EGR1調(diào)控的靶基因種類豐富，提示EGR1具有重要的生物學(xué)功能。

3 EGR1的主要生物學(xué)功能

3.1 肝生理學(xué)功能

3.1.1 肝再生

肝具有強(qiáng)大的再生能力。在大鼠模型，正常肝進(jìn)行部分肝葉切除后，在術(shù)后5～9 d即可恢復(fù)原肝體積。研究發(fā)現(xiàn)［20］，肝切除1/3術(shù)后48和72 h，EGR1表達(dá)水平在傷口相鄰區(qū)域最高，提示EGR1可能參與肝損傷修復(fù)過程。EGR1在肝再生起始階段被顯著誘導(dǎo)，并調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)分子表達(dá)，如細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞分裂周期蛋白20等［21-22］。如用腺病毒特異性地抑制肝EGR1的轉(zhuǎn)錄，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白D1和E表達(dá)水平均降低，香葉基香葉基二磷酸合酶（geranylgeranyl diphosphate synthase，GGPPS）和下游RAS/MAPK途徑的活性均受到抑制［22］。故EGR1可能通過激活GGPPS/RAS/MAPK下游通路，或促進(jìn)G1/S期細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)以調(diào)節(jié)肝再生過程。

然而，EGR1相關(guān)肝再生作用在肝毒素模型與部分肝切除模型可能存在差異。如果敲除EGR1，CCl4介導(dǎo)的肝損傷會(huì)發(fā)生G1/S期阻滯，而部分肝切除的小鼠表現(xiàn)為G2/M期阻滯［21］。P38 MAPK可在G2期促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程。EGR1敲除的部分肝切除模型表現(xiàn)出P38 MAPK異常磷酸化，故可能是引起G2/M期阻滯的部分原因。另外，不同肝損傷模型之間線粒體狀態(tài)的差異，細(xì)胞能量狀態(tài)和氧化還原狀態(tài)不同，也可能會(huì)影響到不同的細(xì)胞周期進(jìn)程［23］。CCl4誘導(dǎo)的EGR1敲除小鼠的肝損傷模型抗氧化功能比部分肝切除的小鼠弱，故CCl4肝損傷模型可能延遲了細(xì)胞周期階段DNA的合成，最后造成該差異［23］。

值得注意的是，在肝再生過程中，調(diào)控EGR1表達(dá)的特異性分子機(jī)制仍尚不清楚。細(xì)胞外ATP［24］和P2Y2嘌呤能受體［25］等可能有重要作用。但至今相對(duì)明確的是，EGR1可通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)分子的表達(dá)，提高肝細(xì)胞存活，促進(jìn)肝再生進(jìn)程。EGR1也許可以作為肝再生過程的新治療靶標(biāo)。

3.1.2 肝膽固醇合成代謝

EGR1是膽固醇合成相關(guān)基因的直接調(diào)控因子，如3-羥基-3-甲基戊二酰-CoA還原酶（3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase，HMGCR）和角鯊烯環(huán)氧酶等。HMGCR活性是膽固醇合成的限速步驟。在HMGCR啟動(dòng)子-130位點(diǎn)具有一段富含GC的EGR1結(jié)合序列，EGR1與該序列結(jié)合可促進(jìn)HMGCR的轉(zhuǎn)錄［26］，提示EGR1與膽固醇合成存在密切聯(lián)系。另外，生物信息學(xué)分析顯示，EGR1可激活生長因子來誘導(dǎo)膽固醇生物合成。EGR1可與甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2（sterol regulatory element binding protein-2，SREBP-2）發(fā)生協(xié)同作用，介導(dǎo)胰島素誘導(dǎo)肝膽固醇的合成［26-27］。綜上，EGR1可能是肝調(diào)節(jié)膽固醇生物合成途徑的手段之一。

3.2 細(xì)胞的生長、分化和凋亡

EGR1的生物學(xué)功能一般涉及胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、分化和凋亡等。EGR1可能在小鼠胚胎植入過程刺激環(huán)氧合酶2和血管內(nèi)皮生長因子等基因的表達(dá)，促進(jìn)新血管生成，參與胚胎發(fā)育過程［28］。在細(xì)胞周期的G0/G1期，EGR1發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化的作用。在部分肝切除的野生型小鼠中，EGR1 mRNA表達(dá)水平在肝細(xì)胞進(jìn)入G0/G1期時(shí)顯著增加；敲除EGR1小鼠肝細(xì)胞有絲分裂進(jìn)程發(fā)生延遲［21］。另外，EGR1在新生小鼠腹側(cè)的表達(dá)處于高水平；當(dāng)小鼠生長至21 d，EGR1水平降低至基線［20］。由此提示，EGR1高表達(dá)主要集中在細(xì)胞生長增殖活躍時(shí)期，對(duì)細(xì)胞的生長增殖可能具有促進(jìn)作用。據(jù)報(bào)道，EGR1通過激活Wnt/β聯(lián)蛋白下游通路的支架蛋白，參與小鼠小腸上皮細(xì)胞的分化［29］。此外，EGR1可以線粒體依賴性方式，經(jīng)NF-κB下游信號(hào)通路促進(jìn)卵泡閉鎖的顆粒細(xì)胞凋亡［30］。

3.3 肝纖維化

肝纖維化是細(xì)胞外基質(zhì)的彌漫性過度沉積及瘢痕形成［31］。肌成纖維細(xì)胞通過促進(jìn)膠原合成、分泌以及細(xì)胞外基質(zhì)累積過程是纖維化形成的基礎(chǔ)。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells，HSC）是肝肌成纖維細(xì)胞的重要來源，數(shù)量約占所有肝細(xì)胞的15%，是參與肝纖維化的主要細(xì)胞類型。

HSC通常處于“靜止”狀態(tài)。TGF-β1可促使HSC轉(zhuǎn)分化成肌纖維細(xì)胞，并使其合成過量的基質(zhì)蛋白（如纖連蛋白、膠原蛋白和彈性蛋白等），促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生［32］。對(duì)乙酰氨基酚低劑量（200 mg·kg-1）造模6周的EGR1敲除小鼠，HSC活化、膠原蛋白以及TGF-β1表達(dá)水平均增強(qiáng)［33］。但另有報(bào)道，EGR1可增加體外培養(yǎng)HSC激活標(biāo)志物的表達(dá)，如α-平滑肌肌動(dòng)蛋白和Ⅰ型膠原蛋白［34］。目前導(dǎo)致EGR1對(duì)HSC活化具有不同表現(xiàn)的原因尚不清楚。

肝細(xì)胞通過上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）可促進(jìn)成纖維細(xì)胞活化［35］。ELK3（ETS致癌基因家族成員）可促進(jìn)肝纖維化EMT過程［36］。EGR1是組織損傷誘導(dǎo)下ELK3的下游靶基因［37］。在TGF-β1誘導(dǎo)的EMT 體外模型，抑制ELK3表達(dá)可使EGR1和波形蛋白表達(dá)下調(diào)；抑制P38 MAPK磷酸化水平可抑制ELK3及EGR1的表達(dá)水平，甚至可能逆轉(zhuǎn)EMT［36］。因此，MAPK/ELK3/EGR1信號(hào)途徑可能參與肝纖維化EMT過程（圖1）。

EGR1參與肝纖維化的機(jī)制具有模型依賴性。各種肝纖維化EGR1敲除小鼠模型肝組織損傷的表現(xiàn)可能不同。α-萘酯（α-naphthylisothiocyanate）飲食模型敲除EGR1，肝炎癥反應(yīng)及肝損傷無顯著變化，但Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平顯著增加［38］；CCl4模型肝組織的腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNF-α）mRNA和蛋白表達(dá)水平降低，膠原蛋白沉積水平升高，且肝損傷加重［37-39］；對(duì)乙酰氨基酚模型肝組織的膠原蛋白表達(dá)和分布水平增加［33］。與以上模型相反，膽管結(jié)扎（bile duct ligation，BDL）模型肝組織的膠原蛋白沉積未受影響，炎癥反應(yīng)和肝損傷反而減輕［40］。

圖1 早期生長反應(yīng)蛋白1（EGR1）在肝纖維化的肝星狀細(xì)胞活化通路.MAPK：絲裂原活化蛋白激酶；ELK3：ETS轉(zhuǎn)錄因子；TGF-β1：轉(zhuǎn)化生長因子β1；EMT：上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化；HSC：肝星狀細(xì)胞.

這些不同表現(xiàn)的原因可能是EGR1在不同模型的作用機(jī)制不同。如在α-萘酯模型，EGR1缺乏可抑制促纖維化基因整合素β6 mRNA的表達(dá)，該基因可結(jié)合并激活TGF-β1，故EGR1敲除在一定程度上抑制纖維化發(fā)展［38］。而CCl4模型可能與TNF-α表達(dá)水平減少或肝傷口愈合失調(diào)有關(guān)，這削弱了肝的保護(hù)機(jī)制［37］。

3.4 膽汁淤積性肝病

膽汁淤積是指在肝細(xì)胞或膽管水平發(fā)生的膽汁生成、分泌或流動(dòng)障礙，引起細(xì)胞內(nèi)膽汁酸積聚，造成肝細(xì)胞損傷。若持續(xù)發(fā)生肝細(xì)胞損傷，可發(fā)展成膽汁纖維化或肝硬變［40］。膽汁酸大量積累引起肝細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子表達(dá)水平增強(qiáng)與膽汁酸激活EGR1有關(guān)［41］。目前報(bào)道，膽汁酸經(jīng)MAPK下游信號(hào)通路，激活EGR1，促進(jìn)促炎介質(zhì)釋放，肝細(xì)胞炎癥細(xì)胞因子表達(dá)水平提高，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷［42］。另外，在膽汁淤積性肝病患者［43］、BDL模型［40］的肝組織以及小鼠原代肝細(xì)胞［38］均發(fā)現(xiàn)EGR1水平升高。因此推測，EGR1與膽汁淤積的肝纖維化可能具有重要聯(lián)系。

SHP由于缺乏保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，不能直接進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。但活化的SHP可在特定組織抑制轉(zhuǎn)錄因子的活性。SHP對(duì)參與肝代謝過程的基因具有負(fù)調(diào)控作用［44］，對(duì)膽汁淤積的肝纖維化還有預(yù)防作用［45］。EGR1和SHP基因啟動(dòng)子均可被HNF4α直接激活；活化的SHP可抑制EGR1啟動(dòng)子的活性及其基因的轉(zhuǎn)錄水平［46］。雖然BDL小鼠膽汁淤積肝纖維化模型和人肝硬變組織中HNF4α和EGR1表達(dá)增加，SHP表達(dá)降低，但HNF4α敲除小鼠肝組織EGR1 mRNA和蛋白水平仍升高。由此推測，EGR1表達(dá)增加的原因，除SHP表達(dá)降低減少對(duì)EGR1抑制及HNF4α表達(dá)升高增加對(duì)EGR1激活外，可能還有其他分子激活了EGR1。

肝再生增強(qiáng)劑（augmenter of liver regeneration）是一種抗凋亡因子，既可減少游離脂肪酸引起的脂肪細(xì)胞凋亡［47］，也可改善膽管結(jié)扎后大鼠的線粒體和肝功能。EGR1可與肝再生增強(qiáng)劑啟動(dòng)子的反應(yīng)元件特異性結(jié)合，增加肝再生增強(qiáng)劑的表達(dá)。但在膽汁淤積的肝病中，EGR1被膽汁酸激活的同時(shí)削弱了與肝再生增強(qiáng)劑啟動(dòng)子結(jié)合能力，使肝再生增強(qiáng)劑啟動(dòng)子活性降低，可能導(dǎo)致膽汁淤積的肝功能恢復(fù)受阻［48］。

E2F1可促進(jìn)肝細(xì)胞的糖酵解和脂質(zhì)生成［49］，并且E2F1基因敲除小鼠膽汁淤積肝纖維化減少。而在膽汁淤積過程E2F1直接激活EGR1轉(zhuǎn)錄，但這一過程可被SHP抑制［3］。綜上所述，EGR1在膽汁淤積性肝組織被HNF4α，SHP或E2F1等激活表達(dá)，可能進(jìn)一步引起肝細(xì)胞損傷或肝纖維化（圖2）。

3.5 酒精性肝病

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）可發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化或肝硬變，導(dǎo)致肝功能衰竭或死亡的危險(xiǎn)性增加。

3.5.1 酒精誘導(dǎo)的肝脂肪變性

EGR1可能是酒精引起ALD發(fā)生脂肪變性的主要因素［17］。EGR1可與脂肪變性相關(guān)基因啟動(dòng)子結(jié)合，如 TNF-α［50］、甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白 1c（sterol regulatory element binding protein-1，SREBP-1c）［50-51］。例如，EGR1誘導(dǎo)TNF-α的高表達(dá)可促使SREBP-1c成熟，促進(jìn)肝脂質(zhì)的合成［52］。EGR1敲除小鼠僅部分阻斷酒精引起的甘油三酯積累，并不能阻止肝脂肪變性，而EGR1和SREBP-1c雙重敲除小鼠可消除肝脂肪變性［50］。這些研究表明，EGR1不是影響SREBP-1c表達(dá)的唯一分子通路（圖2）。

圖2 早期生長反應(yīng)蛋白1在膽汁淤積性肝病、酒精肝及病毒性肝炎的上下游通路模式.BA：膽汁酸；CYP2E1：細(xì)胞色素P450 2E1；ADH：醇脫氫酶；HCV：丙型肝炎病毒；HBV：乙型肝炎病毒；MAPK：絲裂原活化蛋白激酶；ERK1/2：細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2；HBX：乙型肝炎病毒X；P：磷酸化；E2F1：E2F1轉(zhuǎn)錄因子；SHP：小異二聚體伴侶；HNF4α：肝細(xì)胞核因子4α；Alr：肝再生增強(qiáng)劑；SREBP-1：甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1；SPHK1：鞘氨醇激酶1；SP1：鞘氨醇-1-磷酸.

蛋白酶體（proteasome）是一種大分子復(fù)合物，可選擇性降解細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)［53］，其活性降低可提高EGR1在細(xì)胞內(nèi)的穩(wěn)定性，可能引起酒精誘導(dǎo)肝組織EGR1表達(dá)水平升高［54］。但有研究發(fā)現(xiàn)，在酒精誘導(dǎo)的急性肝損傷肝組織，EGR1表達(dá)水平升高，蛋白酶體活性卻無明顯變化。因此，EGR1表達(dá)水平增加可能不是由蛋白酶體活性下降引起的［55］。多數(shù)研究認(rèn)為，酒精氧化生成的乙醛可能是激活EGR1啟動(dòng)子、增強(qiáng)EGR1基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平的主要原因［55-56］。

3.5.2 酒精誘導(dǎo)的慢性或急性肝損傷

在酒精刺激下，脂多糖刺激巨噬細(xì)胞（如庫普弗細(xì)胞）產(chǎn)生各種炎癥因子（如TNF-α和白細(xì)胞介素1等），加劇肝損傷［57］。另外，脂多糖刺激引起ERK1/2磷酸化，有助于提高EGR1在庫普弗細(xì)胞的表達(dá)水平，并增加產(chǎn)生TNF-α［58］。在4周的慢性酒精脂肪肝病模型，EGR1敲除小鼠既未表現(xiàn)出肝脂肪變性，也未出現(xiàn)TNF-α表達(dá)水平升高［51］。因此推測，EGR1敲除可能對(duì)慢性酒精性肝損傷具有預(yù)防作用。然而，在造模18個(gè)月的LE（Long-Evans）大鼠肝組織中EGR1表達(dá)水平顯著提高；EGR1還促進(jìn)促纖維化基因表達(dá)以及增強(qiáng)SREBP-1c蛋白的轉(zhuǎn)錄活性［59］。因此，慢性酒精性肝損傷模型經(jīng)長期酒精誘導(dǎo)，EGR1表達(dá)水平可能升高，并通過與SREBP-1c啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)肝組織脂肪變性（圖2）。

此外，在急性酒精性肝病EGR1敲除小鼠與野生型小鼠中，前者肝組織中甘油三酯水平低30%，脂質(zhì)過氧化物水平以及血清的酒精含量二者相當(dāng)，但前者谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平更高且肝損傷較嚴(yán)重［55］。因此，EGR1敲除在急性酒精性肝損傷可能不影響酒精代謝但可能部分阻止脂肪變性。

綜上所述，EGR1表達(dá)可能促進(jìn)脂肪變性甚至纖維化的發(fā)展，但在急性酒精性肝病，缺乏EGR1可能會(huì)加劇肝損傷。

3.6 病毒性肝炎（乙型肝炎和丙型肝炎）

EGR1與病毒性肝炎的相關(guān)研究主要集中在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）和丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）。一種非環(huán)狀維A酸（peretinoin）可抑制HBV或HCV的復(fù)制［60-61］。EGR1在HBV復(fù)制的Huh7細(xì)胞被誘導(dǎo)，但peretinoin可阻斷EGR1下游通路，如EGR1-鞘氨醇激酶1（sphingosine kinase 1，SPHK1）-鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate，SP1）信號(hào)通路，最終抑制HBV復(fù)制［60］。此外，HCV無包膜顆粒的內(nèi)吞作用可激活ERK1/2，磷酸化ERK1/2激活EGR1，可能參與HCV感染細(xì)胞的過程［62］。EGR1上調(diào)可促進(jìn)鼠肝炎病毒進(jìn)入小鼠星形細(xì)胞瘤的細(xì)胞，并提高感染的持續(xù)性［63］。綜上可見，下調(diào)EGR1也許有助于抑制肝炎病毒的復(fù)制。

3.7 肝癌

肝癌（肝細(xì)胞癌，hepatocellular carcinoma，HCC）是肝最常見的惡性腫瘤，也是第三大致死性癌癥。EGR1與HCC相關(guān)機(jī)制的報(bào)道存有分歧，如有些發(fā)現(xiàn)EGR1在HCC中過表達(dá)，有些則發(fā)現(xiàn)表達(dá)下調(diào)［64］。

3.7.1 EGR1可作為抑癌基因

EGR1可抑制HHCC細(xì)胞生長速度，減少S期細(xì)胞，降低其致瘤性。但EGR1未抑制SMMC7721細(xì)胞的惡性表型，其機(jī)制尚不清楚［65］。另外，YANG等［64］運(yùn)用［125I］UdR放射性核素聯(lián)合干擾素γ的基因治療手段，激活EGR1啟動(dòng)子活性可有效減少腫瘤的增殖，提高H22細(xì)胞存活率。EGR1抑制腫瘤的機(jī)制主要通過激活腫瘤抑制因子，包括P53、P73、纖連蛋白和PTEN等（圖3）。ZHAO等［66］發(fā)現(xiàn)，沉默EGR1，3′-疊氮基-3′-脫氧胸苷（3′-azido-3′-deoxythymidine）聯(lián)合 As2O3治療HCC 效果減弱，癌細(xì)胞凋亡標(biāo)志物（如P53）表達(dá)減少。

3.7.2 EGR1可作為癌基因

激活EGR1可能增加HCC細(xì)胞生長、侵襲和遷移的能力［67］或促進(jìn)HCC細(xì)胞自噬作用，導(dǎo)致HCC細(xì)胞耐藥性增強(qiáng)［68］（圖3）。如紅外線刺激EGR1表達(dá)的快速上調(diào)，可降低HCC細(xì)胞對(duì)紅外線治療的敏感性，促進(jìn)HCC細(xì)胞遷移［69］。自噬可清除受損的細(xì)胞器，抑制癌癥發(fā)生；但在輻射、化療和氧化應(yīng)激等應(yīng)激下，自噬也可促進(jìn)癌細(xì)胞的存活［70］。如在低氧條件下，EGR1可與微管相關(guān)蛋白1輕鏈3的啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)HCC細(xì)胞自噬體形成［68］；或通過促進(jìn)低氧誘導(dǎo)的自噬來降低腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的化學(xué)敏感性，增強(qiáng)HCC細(xì)胞的耐藥能力［71］。故推測抑制EGR1的表達(dá)水平可能會(huì)提高抗癌藥物在低氧下的藥效作用。EGR1在肝細(xì)胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞侵襲時(shí)過表達(dá)，并激活HGF/c-Met的下游靶點(diǎn)基質(zhì)金屬肽酶，提高HCC細(xì)胞侵襲能力［72］。

3.7.3 EGR1與病毒性肝炎相關(guān)HCC

目前研究主要集中在HBV或HCV相關(guān)HCC。乙型肝炎病毒X（hepatitis B virus X，HBX）蛋白的表達(dá)可提高病毒啟動(dòng)子和增強(qiáng)子的活性，促進(jìn)HBV的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程［73］。早期抑制HBV感染肝細(xì)胞的炎癥介質(zhì)（如前列腺素E2）產(chǎn)生，可減輕肝細(xì)胞惡性病變和減少肝癌的發(fā)生［74］。HBX可促進(jìn)EGR1與微粒體前列腺素E合酶1啟動(dòng)子區(qū)域特定位點(diǎn)結(jié)合，激活微粒體前列腺素E合酶1啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，增加HBV感染肝細(xì)胞的炎癥介質(zhì)產(chǎn)生，促進(jìn)HCC 的發(fā)生。ZHANG等［75］認(rèn)為，HBX 在NF-κB/EGR1通路中上調(diào)EGR1，并通過促進(jìn)miR-3928v（一種小分子RNA）的表達(dá)來抑制腫瘤抑制基因的表達(dá)，加速HCC的發(fā)展。另外研究發(fā)現(xiàn)，HCV核心蛋白可激活胰島素樣生長因子Ⅱ（insulinlike growth factor Ⅱ，IGF-Ⅱ）；IGF-Ⅱ的過表達(dá)可刺激HCV感染的肝癌細(xì)胞的生長［76］。故EGR1作為IGF-Ⅱ基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的直接靶標(biāo)，可能參與HCV相關(guān)HCC的發(fā)生和發(fā)展。

圖3 早期生長反應(yīng)蛋白1在肝細(xì)胞癌的上下通路模式.HGF：肝細(xì)胞生長因子；UV：紫外線；IR：紅外線；p-ERK1/2：磷酸化的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2；LC3：微管相關(guān)蛋白1輕鏈3；PTEN：第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因；HCC：肝細(xì)胞癌.

綜上所述，也許基于HCC發(fā)生存在復(fù)雜的異質(zhì)性，EGR1既可能表現(xiàn)抑癌作用，也可能表現(xiàn)促癌作用。EGR1在HCC的表達(dá)水平可能可以作為臨床HCC復(fù)發(fā)的生物學(xué)標(biāo)志分子。另外，嘗試通過抑制EGR1表達(dá)來增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性可能可提供治療HCC的新方法。

4 結(jié)語

一方面，MAPK，SHP，E2F1，HNF4α及TGF-β1等多種上游分子可調(diào)控EGR1的表達(dá)；另一方面，EGR1可與下游不同靶基因的啟動(dòng)子（如與細(xì)胞凋亡或纖維化發(fā)生等相關(guān)基因）特異性結(jié)合，誘導(dǎo)靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。通過上下游分子相互作用，EGR1不僅參與肝再生、細(xì)胞生長分化以及凋亡等作用，也參與肝纖維化、酒精性肝病、肝癌以及病毒性肝炎等的病變。在不同的生理、病理?xiàng)l件下，EGR1既可能參與阻止肝組織病理改變，也可能加速肝病發(fā)展，其原因尚不清楚，推測可能與EGR1具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制或EGR1調(diào)控各類下游靶基因及促進(jìn)細(xì)胞生長和凋亡的生物學(xué)功能有關(guān)。目前，EGR1研究主要集中在非臨床模型，如繼續(xù)在臨床研究中觀察其調(diào)控機(jī)制，將有助于進(jìn)一步闡明EGR1對(duì)肝病治療的重要意義。