超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定鹽酸米諾環(huán)素的含量

胡光華，徐 皓，陳 銳，李蘭蘭，彭秀麗（長(zhǎng)春市食品藥品檢驗(yàn)中心，吉林 長(zhǎng)春 130000）

鹽酸米諾環(huán)素，又名鹽酸去甲基四環(huán)素，是半合成的四環(huán)素類衍生物抗生素，通過(guò)抑制敏感微生物的蛋白合成而產(chǎn)生抗菌效果，抗菌譜與四環(huán)素類藥物相似，但抗菌效果更強(qiáng)[1-2]。鹽酸米諾環(huán)素具有吸收迅速、完全、脂溶性高、半衰期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，臨床上主要用于痤瘡和牙周炎癥治療，能抑制大部分病原菌，具有抗菌和抗炎的雙重作用。鹽酸米諾環(huán)素緩釋片是鹽酸米諾環(huán)素與適當(dāng)?shù)妮o料羥丙基甲基纖維素制成的親水型骨架緩釋片。目前中國(guó)藥典采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸米諾環(huán)素的含量，但是對(duì)鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的檢驗(yàn)方法未見(jiàn)收載，采用液質(zhì)聯(lián)用的方法檢測(cè)鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量的文獻(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道。因此，本作者建立液質(zhì)聯(lián)用方法對(duì)鹽酸米諾環(huán)素緩釋片進(jìn)行含量測(cè)定。經(jīng)驗(yàn)證使用本法操作簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可快速測(cè)定鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的含量。

1 材料與檢測(cè)條件

1.1 藥品、試劑及儀器

鹽酸米諾環(huán)素緩釋片（丹東醫(yī)創(chuàng)藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：191011，每片45 mg）；米諾環(huán)素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：130514-200912，含量：88.05%）；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，水為去離子水。

AB Sciex QTRAP? 4500液質(zhì)聯(lián)用儀（AB Sciex）；XA-205電子天平（Mettler Toledo）。

1.2 檢測(cè)條件

色譜柱：Spherisorb C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：0.2 mol/L醋酸銨-乙腈（80：20），流速為0.4 mL/min，進(jìn)樣溫度為室溫，進(jìn)樣方式為自動(dòng)進(jìn)樣。

質(zhì)譜部分：離子源為ESI離子源，正離子掃描，3.0 kV的電離電壓，電噴霧接口干燥氣（N2）流速為300 L/h，離子源溫度為150℃；錐孔電壓為30V，脫溶劑氣溫為130℃，定量分析離子：m/z 458（M-1+1，C23H27N3O7），441[（M-1+1）-OH，C23H26N3O6]。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液和供試液的制備

對(duì)照品儲(chǔ)備液：取米諾環(huán)素對(duì)照品約50 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加80 mL去離子水溶解后稀釋至刻度，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，定容，備用。

對(duì)照品溶液：取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置于25 mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，即得。

供試品溶液：取鹽酸米諾環(huán)素緩釋片10片，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于米諾環(huán)素50 mg），加80 mL去離子水進(jìn)行溶解，超聲處理（功率：250 W，頻率：60 kHz）30 min，定容至刻度；過(guò)濾，精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，稀釋至刻度；取1 mL，置于25 mL容量瓶中，定容，即得。

2.2 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、4、6、8、10 mL分別置100 mL容量瓶中，定容，加去離子水稀釋至刻度，共制得6個(gè)濃度梯度的系列對(duì)照品溶液，在上述質(zhì)譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以相應(yīng)的對(duì)照品溶液濃度對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=26968X+80552×C，r=0.9998，線性50～500 ng/mL。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一批次鹽酸米諾環(huán)素緩釋片20片，研細(xì)，取細(xì)粉適量，按照供試品溶液的配制方法配制低中高三個(gè)濃度（相當(dāng)于米諾環(huán)素160 ng/mL、200 ng/mL、240 ng/mL），每個(gè)濃度平行配制5份溶液，按照上述色譜及質(zhì)譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，并計(jì)算峰面積的RSD為1.20%，符合方法學(xué)要求。

2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取同一份供試品溶液，在放置1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、24 h的不同時(shí)間點(diǎn)分別進(jìn)樣，記錄峰面積并計(jì)算峰面積的RSD為1.07%，說(shuō)明米諾環(huán)素在水溶液中保存的峰面積幾乎沒(méi)有變化，供試品溶液的穩(wěn)定性較好。

2.5 加樣回收實(shí)驗(yàn)

精密稱定含米諾環(huán)素相同量的對(duì)照品和供試品，加水溶解制成200 ng/mL濃度的溶液，在供試品溶液中加入濃度含量為80%、100%、120%的對(duì)照品溶液，按上述色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，各濃度含量分別測(cè)定3次，計(jì)算回收率，平均回收率為98.6%，RSD=0.65%。

2.6 含量測(cè)定

將2.1中對(duì)照品溶液和供試液按上述質(zhì)譜條件進(jìn)樣（進(jìn)樣量5 μL），使用外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討 論

本研究對(duì)鹽酸米諾緩釋片進(jìn)行研究，根據(jù)精確相對(duì)分子質(zhì)量、相關(guān)文獻(xiàn)以及對(duì)照品色譜保留時(shí)間及二級(jí)譜圖，得到對(duì)照品的質(zhì)譜參數(shù)，建立鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量的快速檢測(cè)方法，平均用時(shí)為5 min，與相關(guān)文獻(xiàn)相比較可有效快速的檢測(cè)藥品含量，且還可用于藥品中其他成分的測(cè)定，通過(guò)圖譜分析可確定藥品中其他成分的含量，為鹽酸米諾環(huán)素緩釋片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立及評(píng)價(jià)提供研究依據(jù)。

表1 鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量測(cè)定結(jié)果（n=5）（%）

實(shí)驗(yàn)中對(duì)色譜條件和質(zhì)譜條件都進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)不同批次、不同濃度及不同溶解方式進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，以實(shí)現(xiàn)色譜峰信息量穩(wěn)定作為指標(biāo)，最終確定超聲處理（功率：250 W，頻率：60 kHz）30 min，藥液濃度為200 ng/mL為供試品的配制方法。因考慮到鹽酸米諾環(huán)素可在空氣及各種氧化劑中發(fā)生氧化還原反應(yīng)，通過(guò)對(duì)各種溶劑進(jìn)行對(duì)比考察，發(fā)現(xiàn)米諾環(huán)素在流動(dòng)相中放置一定時(shí)間后藥液顏色發(fā)生改變，最終確定采用去離子水作為溶劑溶解藥品。對(duì)色譜條件進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)色譜柱Spherisorb C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）的分離效果較好，流動(dòng)相0.2 mol/L醋酸銨-乙腈（80：20）的分離效果較好，柱溫和流速的微小差異造成的影響可忽略不計(jì)。

本研究發(fā)現(xiàn)，采用HPLC-MS方法測(cè)定鹽酸米諾環(huán)素緩釋片含量，操作簡(jiǎn)便快速，靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。