三味拳參口服液中氧化苦參堿、苦參堿薄層鑒別檢測(cè)方法研究

郭艷欽，王夢(mèng)雪，李云波，杜西翠，李澤庭，張 趁，劉格格，武 珊，位壽朋，李瑩潔，肖亞彬，李淑娜，邊青巖

（1.河北錦坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司，河北 辛集 052360；2.河北省獸用中藥制劑技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 辛集 052360；3.河北省獸藥監(jiān)察所，石家莊 050035；4.辛集市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河北 辛集 052360；5.樂亭縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 樂亭 063600；6.饒陽縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局留楚動(dòng)物防疫站，河北 饒陽 053900）

中藥苦參為豆科植物苦參（Sophora flavescens Ait.）的干燥根。春、秋二季采挖，除去根頭和小支根，洗凈，干燥。性苦、寒。歸心、肝、胃、大腸、膀胱經(jīng)。具有清熱燥濕、殺蟲去積、利水的功效。主治濕熱瀉痢、黃疸、水腫、疥癬[1]。

苦參中含有大量的生物堿，其中苦參堿和氧化苦參堿含量最高，加起來占苦參藥材根總干重的2%，其中大部分以氧化苦參堿形式存在，同時(shí)還有其他相近的生物堿[2]。

三味拳參口服液為獸藥成方制劑，收載于《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2017 年版）中藥卷。由拳參、穿心蓮、苦參三味中藥提取濃縮而成。具有清熱解毒、燥濕止痢的功效，主治濕熱泄瀉[3]?！东F藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定了氧化苦參堿薄層鑒別方法，但在實(shí)際檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，按照該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法進(jìn)行薄層檢測(cè)時(shí)，氧化苦參堿對(duì)照品斑點(diǎn)在原點(diǎn)位置，無法根據(jù)氧化苦參堿對(duì)照品斑點(diǎn)判定樣品是否合格。通過多次試驗(yàn)摸索，對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法進(jìn)行了改進(jìn)：在三氯甲烷加入前調(diào)節(jié)pH 對(duì)電極損傷比較??；樣品制備過程中用超聲提取代替加熱回流提取；展開過程用極性比較大的甲醇代替丙酮。改進(jìn)后的方法可以達(dá)到比較滿意的檢測(cè)結(jié)果，現(xiàn)介紹如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

AUW220D 型十萬分之一電子分析天平，感量為0.000 01 g，島津國(guó)際貿(mào)易有限公司生產(chǎn)；KH-500E 型超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司生產(chǎn)；DK-98-Ⅱ型恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)；硅膠G薄層板，青島海洋化工廠生產(chǎn)；層析缸，上海信誼儀器廠有限公司生產(chǎn)。

1.2 試劑

苦參堿對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，含量為98.7%，產(chǎn)品批號(hào)為110805-201709；氧化苦參堿對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，含量為92.9%，產(chǎn)品批號(hào)為110780-201909；三味拳參口服液樣品，河北錦坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司生 產(chǎn)， 產(chǎn) 品 批 號(hào) 為 20191201、 20191202、20191203；三氯甲烷、濃氨溶液、乙醇、苯、丙酮、甲醇、乙酸乙酯等均為分析純；試驗(yàn)用水為高純水。

2 方 法

2.1 改進(jìn)前方法

2.1.1 溶液的制備

（1）氧化苦參堿對(duì)照品溶液：精密稱取氧化苦參堿對(duì)照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）供試品溶液：取三味拳參口服液10 mL，加三氯甲烷25 mL，搖勻，然后加濃氨溶液調(diào)pH至9.5，加熱回流1 h，放冷，取三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，即得。

2.2 改進(jìn)后方法

2.2.1 溶液的制備

（1）氧化苦參堿對(duì)照品溶液：精密稱取氧化苦參堿對(duì)照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）苦參堿對(duì)照品溶液：精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（3）供試品溶液：取三味拳參口服液10 mL，先加濃氨溶液調(diào)pH 至9.5，再加三氯甲烷25 mL，搖勻，超聲（220 V/50 Hz）提取30 min，放冷，取三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)右掖? mL 使溶解，即得。

3 結(jié) 果

3.1 改進(jìn)前薄層色譜層析結(jié)果

吸取2.1.1 中氧化苦參堿對(duì)照品溶液和供試品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2）為展開劑，展開，展距為10.5 cm，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。顯色結(jié)果見圖1。

3.2 改進(jìn)后薄層色譜層析結(jié)果

吸取氧化苦參堿對(duì)照品溶液、苦參堿對(duì)照品溶液、供試品溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-甲醇-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2）為展開劑，展開，展距為10.5 cm，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。顯色結(jié)果見圖2，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)。

圖1 改進(jìn)前薄層色譜層析結(jié)果

4 討 論

4.1 pH調(diào)節(jié)

在實(shí)際檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)，樣品加入三氯甲烷后調(diào)節(jié)pH，對(duì)電極損傷非常大，認(rèn)為先調(diào)節(jié)pH后再加三氯甲烷更為合理，改變方法后對(duì)試驗(yàn)結(jié)果沒有影響。

4.2 樣品制備過程

原標(biāo)準(zhǔn)是加熱回流1 h，其過程可能會(huì)造成氧化苦參堿轉(zhuǎn)化成苦參堿。陸蘊(yùn)如等[4]研究了苦參在復(fù)方中化學(xué)成分的變化，結(jié)果表明，含苦參的復(fù)方制作成制劑時(shí)，受水、加熱等因素及與共存的還原性成分的作用，使氧化苦參堿含量逐漸降低直至消失，苦參堿含量逐漸增加。室溫超聲提取[5]時(shí)，薄層色譜法可以檢出明顯的氧化苦參堿斑點(diǎn)。因此將樣品制備方法加熱回流1 h 改為超聲（220 V/50 Hz）提取30 min，效果更好。

4.3 展開劑選擇

原標(biāo)準(zhǔn)展開劑為苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2），展開顯色后，氧化苦參堿對(duì)照品在原點(diǎn)位置形成一個(gè)橙紅色斑點(diǎn)，沒有得到上行展開的斑點(diǎn)，根據(jù)對(duì)照品無法判定樣品斑點(diǎn)中是否有氧化苦參堿斑點(diǎn)，從而無法得出產(chǎn)品是否合格的結(jié)論。經(jīng)過多次試驗(yàn)摸索，將展開劑[6]中的丙酮用極性比較大的甲醇代替，其他色譜條件不變，展開顯色后，氧化苦參堿和苦參堿都可以得到清晰的斑點(diǎn)。

圖2 改進(jìn)后薄層色譜層析結(jié)果

5 結(jié) 論

綜上所述，三味拳參口服液氧化苦參堿薄層鑒別法在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，經(jīng)過改進(jìn)，樣品制備方法更加簡(jiǎn)單、快捷，可在很大程度上減小對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。薄層展開結(jié)果比較理想，可以得到清晰的氧化苦參堿和苦參堿斑點(diǎn)，從而可以對(duì)氧化苦參堿和苦參堿兩種成分進(jìn)行質(zhì)量控制。希望本研究結(jié)果可對(duì)以后該標(biāo)準(zhǔn)修訂提供有價(jià)值的參考。