酶標(biāo)儀在艾滋病血液檢驗(yàn)上的應(yīng)用探討

遼寧省撫順市疾病預(yù)防控制中心 （遼寧 撫順 113006）

內(nèi)容提要：目的：探討分析酶標(biāo)儀在艾滋病血液檢驗(yàn)上的應(yīng)用效果。方法：2019年11月～2019年12月選取本中心獲取的艾滋病血液為研究對(duì)象，采用酶標(biāo)儀對(duì)艾滋病血液進(jìn)行檢驗(yàn)，以血液分析儀的檢測(cè)結(jié)果做對(duì)比，分析檢驗(yàn)效果。結(jié)果：選取3份血清，分別采用酶標(biāo)儀、血液分析儀進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行20次的批內(nèi)、批間重復(fù)檢測(cè)。其中酶標(biāo)儀檢測(cè)的批內(nèi)精密度、批間精密度均大于血液分析儀（P＜0.05）。艾滋病血清的活性升高至160卡門單位時(shí)，檢測(cè)結(jié)果非線性關(guān)系。顯色10min～90min內(nèi)，比色相對(duì)穩(wěn)定，其中顯色10min時(shí)時(shí)比色最理想的時(shí)候。標(biāo)本回收率分別是93.8%、97.7%、102.1%，平均97.9%。結(jié)論：艾滋病血液檢驗(yàn)采用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定效果相對(duì)理想，可穩(wěn)定、準(zhǔn)確、快速、微量的提升檢測(cè)效率，可有效減少檢測(cè)成本，再者酶標(biāo)儀檢測(cè)簡(jiǎn)單好操作。

艾滋病屬于臨床常見(jiàn)性病，主要傳播方式性傳播。截止至2019年12月31日，我國(guó)約有100萬(wàn)艾滋病患者[1]。有研究[2]指出，若艾滋病患者不能及時(shí)確診疾病、及時(shí)進(jìn)行有效治療，有可能誘發(fā)疾病，也有可能會(huì)將艾滋病傳染他人，增加艾滋病的發(fā)病率，威脅公共衛(wèi)生健康，也會(huì)對(duì)患者自身的生命健康造成嚴(yán)重影響。現(xiàn)今，臨床尚未推出有效且理想的艾滋病診斷手段，多數(shù)患者在確診疾病后，由國(guó)家免費(fèi)治療，但治療效果不佳。且臨床現(xiàn)今應(yīng)用的診斷方法有比較嚴(yán)重的誤診、漏診現(xiàn)象[3]。隨著醫(yī)學(xué)檢測(cè)技術(shù)的飛速進(jìn)步，很多簡(jiǎn)單、先進(jìn)、有效、準(zhǔn)確的檢測(cè)手段在臨床得到推廣應(yīng)用。本研究主要分析酶標(biāo)儀在艾滋病血液檢驗(yàn)上的應(yīng)用效果，現(xiàn)研究報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

2019年11月～2019年12月選取本中心獲取的艾滋病血液為研究對(duì)象。

1.2 儀器與試劑

Anthos 2010型酶標(biāo)儀、UBA微量加樣器、離心管（0.2mL聚苯乙烯規(guī)格）、酶標(biāo)版、edp-2自動(dòng)加樣器。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)準(zhǔn)備。酶標(biāo)儀按照要求編制程序，并按照程序打印分吸光度值與測(cè)定值。并且，酶標(biāo)儀需根據(jù)本次試驗(yàn)的檢測(cè)內(nèi)容校準(zhǔn)相應(yīng)的波長(zhǎng)，并做好比色檢測(cè)。在選中酶標(biāo)儀中添加空白試劑，并在儀器上比色，打印不同孔洞的吸光度值、測(cè)定值。校準(zhǔn)自動(dòng)加樣器、微量加樣器，保證加樣器的準(zhǔn)確度無(wú)差異小于等于±1%，變異系數(shù)均小于1%。

1.3.2 采血方法。本試驗(yàn)需要的血樣不多，可在患者的耳垂、手指末梢部位常規(guī)刺入采血，使用微量吸管將血吸住，并將血液注入小離心管（0.2mL規(guī)格）中，在血液充分凝固后進(jìn)行離心分離，連續(xù)離心分離5min，離心分離的速度為3000r/min。然后在96孔規(guī)格的酶標(biāo)板上將第一孔、第二孔作為本次試驗(yàn)的空白對(duì)照組，將第三孔、第四孔作為標(biāo)準(zhǔn)孔，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔都是雙控，其余孔均為測(cè)量孔。本次試驗(yàn)的測(cè)定總量是300μL，操作孔的每個(gè)步驟均需按照試劑盒、儀器的說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 SPSS19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 酶標(biāo)儀的批內(nèi)精密度、批間精密度

選取3份血清，分別采用酶標(biāo)儀、血液分析儀進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)行20次的批內(nèi)、批間重復(fù)檢測(cè)。其中酶標(biāo)儀檢測(cè)的批內(nèi)精密度、批間精密度均大于血液分析儀（P＜0.05），詳情見(jiàn)表1。

表1.酶標(biāo)儀的批內(nèi)精密度、批間精密度(%)

2.2 線性范圍

通過(guò)等滲鹽水將具有高活性的艾滋病血清作為試驗(yàn)標(biāo)本，測(cè)定相應(yīng)的線性范圍。線性范圍測(cè)定結(jié)果顯示：艾滋病血清的活性升高至160卡門單位時(shí)，檢測(cè)結(jié)果非線性關(guān)系。此時(shí)，應(yīng)該使用等滲鹽水充分稀釋標(biāo)本后，再進(jìn)行檢測(cè)，才可獲得有效檢測(cè)效果。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

選取1份血清測(cè)定艾滋病的生成量，并添加NaOH（濃度是0.4mmol/L），在顯色后不同時(shí)間點(diǎn)（5min、10min、15min、30min、60min、120min）進(jìn)行比色，結(jié)果顯示，顯色10min～90min內(nèi)，比色相對(duì)穩(wěn)定，其中顯色10min時(shí)時(shí)比色最理想的時(shí)候。

2.4 回收率

充分混合后按照艾滋病檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)定。回收結(jié)果顯示，標(biāo)本回收率分別是93.8%、97.7%、102.1%，平均97.9%。

3.討論

上世紀(jì)七十年代，在酶聯(lián)免疫組織化學(xué)的基礎(chǔ)上衍生了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，該試驗(yàn)迅速在臨床應(yīng)用，并在應(yīng)用過(guò)程中不斷發(fā)展革新，逐步完善，如今酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)已經(jīng)是一種比較成熟、檢測(cè)準(zhǔn)確性有一定保障的檢測(cè)手段[4]。再者，隨著酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在臨床多個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用，臨床逐步發(fā)現(xiàn)了該試驗(yàn)用于檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，并在疾控中心、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、檢疫部門、血站等機(jī)構(gòu)廣泛應(yīng)用。因?yàn)榇蠖鄶?shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)都需要應(yīng)用比色測(cè)定，所以酶標(biāo)儀逐步成為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中最重要的一項(xiàng)工具。

艾滋病一直以來(lái)都是嚴(yán)重危害公眾身心健康的一種傳染性疾病，艾滋病的篩查工作一直未曾停止，篩查范圍逐步擴(kuò)大，篩查手段逐步優(yōu)化，篩查出艾滋病患者逐步增加。而酶標(biāo)儀檢測(cè)在艾滋病的篩查中起到了非常重要的作用。酶標(biāo)儀的軟件功能、光學(xué)系統(tǒng)都比較精密，其中軟件功能可有效控制檢驗(yàn)程序的整機(jī)測(cè)量處理，并且可以顯示或打印檢測(cè)結(jié)果。而光學(xué)系統(tǒng)是一種基于朗伯比爾定律基礎(chǔ)的系統(tǒng)，可在高檢測(cè)速度與高精密度基礎(chǔ)上完成批量檢測(cè)工作。再者，酶標(biāo)儀還是一個(gè)具有多用優(yōu)勢(shì)的儀器，不僅可以進(jìn)行單純的免疫學(xué)試驗(yàn)，還可以進(jìn)行多種化學(xué)檢驗(yàn)。臨床大量研究指出，酶標(biāo)儀用于臨床檢測(cè)，具有采血量少、檢測(cè)方法穩(wěn)定、節(jié)約試劑等優(yōu)點(diǎn)。本研究按照酶標(biāo)儀的操作步驟說(shuō)明一一進(jìn)行，不僅完成了精密的比色，還配置了相應(yīng)的附件，按照標(biāo)準(zhǔn)操作要求、檢驗(yàn)項(xiàng)目程序完成采血、離心、檢測(cè)等工作。最后得出結(jié)果，相較于血液分析儀，酶標(biāo)儀測(cè)定的批內(nèi)精密度、批間精密度更為理想，臨床應(yīng)用價(jià)值更高。

由上可知，艾滋病血液采用酶標(biāo)儀檢測(cè)，檢測(cè)效果理想，精密度高。