縫隙連接蛋白CX43表達(dá)下降導(dǎo)致EPCs功能減退

徐穎佳，朱振華，吳春城，任國慶，孫文文

（1.吳江區(qū)第五人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，江蘇 蘇州 215200；2.吳江區(qū)第五人民醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 蘇州 215200；3.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院急診科，江蘇 鎮(zhèn)江 212001）

當(dāng)前，經(jīng)動(dòng)脈粥樣硬化疾病已經(jīng)嚴(yán)重影響到人們的身體健康，對(duì)于該疾病需要進(jìn)一步研究分析，從而能在身體出現(xiàn)不適的時(shí)候能夠及時(shí)去醫(yī)院接受治療，利于疾病能早發(fā)現(xiàn)和有效治療，患者預(yù)后效果好；在患者診斷分析病情期間，臨床醫(yī)生需要充分的掌握縫隙連接通道，這樣才能有效的把握患者神經(jīng)系統(tǒng)傳遞信號(hào)情況，有效掌握患者的病情情況，因此，該文的研究將著重討論縫隙連接蛋白CX43表達(dá)水平的變化情況與EPCs功能減退的相關(guān)性，研究內(nèi)容具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

挑選了我院從2016年—2017年診斷治療經(jīng)動(dòng)脈粥樣硬化的50名患者作為研究對(duì)象，根據(jù)研究對(duì)象的縫隙連接蛋白CX43的表達(dá)水平將患者劃分為A、B兩組。A組患者為縫隙連接蛋白CX43高表達(dá)，B組患者為縫隙連接蛋白CX43低表達(dá)。A組病例共計(jì)25例，其中男性患者13例，女性患者12例，年齡中位數(shù)為（78.29±2.56）歲；B組病例總計(jì)為25例，男性患者14名、女性患者11名，年齡中位數(shù)為（76.90±2.25）歲，這對(duì)兩組患者的疾病資料進(jìn)行研究總結(jié)分析并進(jìn)行比較，差異較小，可以比較兩組的數(shù)據(jù)，且文中的研究已與患者及家屬溝通，并簽署了知情同意書，醫(yī)院的倫理委員會(huì)審核了該試驗(yàn)，可以實(shí)施。

1.2 方法

予以患者肘部靜脈采血處理，通過密度梯度離心法獲取單核細(xì)胞，培養(yǎng)采集貼壁細(xì)胞，予以激光共聚焦顯微鏡鑒定，評(píng)估兩組的增殖能力、遷移能力、粘附能力。①增殖能力實(shí)驗(yàn)：收集貼壁細(xì)胞并進(jìn)行消化，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板使用纖維來與蛋白連接，接種內(nèi)皮細(xì)胞，每個(gè)標(biāo)本會(huì)將3個(gè)復(fù)孔設(shè)置為對(duì)照，采用CO2培養(yǎng)箱來運(yùn)轉(zhuǎn)培養(yǎng)板，然后在37℃、5%CO2且濕度適宜的環(huán)境下培養(yǎng)24小時(shí)，再在每一個(gè)孔中添加20μL二苯基四氮唑溴鹽液體，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后清除上清液，滴加150μL二甲基亞砜到每個(gè)孔中，使用振蕩器充分震蕩10 min后，下490 nm波長的酶標(biāo)儀下進(jìn)行檢測吸光度。②遷移能力試驗(yàn)：收集貼壁細(xì)胞并進(jìn)行消化，將50μg/L血管內(nèi)皮生長因子、200μL培養(yǎng)液添加到Boyden小室的下室，數(shù)量一致的內(nèi)皮細(xì)胞注入上室，然后在37℃、5%CO2且濕度適宜的環(huán)境下培養(yǎng)24小時(shí)；刮去濾膜上沒有移動(dòng)的細(xì)胞，在使用甲醇3～5 min來固定，DAPI染色10分鐘，清洗蒸餾水，晾干后放在200倍顯微鏡下觀察遷徙到低層的細(xì)胞。③粘附能力實(shí)驗(yàn)：收集貼壁細(xì)胞并進(jìn)行消化，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板使用纖維來與蛋白連接，接種數(shù)量一致的內(nèi)皮細(xì)胞，然后在37℃、5%CO2且濕度適宜的環(huán)境下培養(yǎng)半小時(shí)，隨機(jī)挑選9個(gè)貼壁細(xì)胞，然后放在200倍熒光顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本文中獲得的所有研究數(shù)據(jù)信息均使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件來分析，計(jì)量資料是t檢驗(yàn)，采用±s表示；計(jì)數(shù)資料x2檢驗(yàn)，如果結(jié)果為P＜0.05，則說明研究數(shù)據(jù)之間的差異較大，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

依據(jù)患者縫隙連接蛋白CX43的表達(dá)水平將入選患者劃分為A、B兩組。A組患者為縫隙連接蛋白CX43高表達(dá)，B組患者為縫隙連接蛋白CX43低表達(dá)。對(duì)兩組患者的增殖細(xì)胞數(shù)目、遷移細(xì)胞數(shù)目、黏附細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行對(duì)比分析，數(shù)據(jù)結(jié)果差別較大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），A、B兩組的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行比較后，可以清楚看到B組增殖細(xì)胞數(shù)目、遷移細(xì)胞數(shù)目、黏附細(xì)胞數(shù)目明顯下降（P＜0.05）。如表1所示。

表1 兩組患者的EPCs功能對(duì)比

3 討 論

針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展存在的危險(xiǎn)因素實(shí)施歸納，包含的主要有：血流動(dòng)力學(xué)紊亂，高血脂、炎癥因子等，患者的機(jī)體在這些因素的作用下，就會(huì)出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化，可能還會(huì)出現(xiàn)其他疾病，因此，臨床醫(yī)生在對(duì)患者實(shí)施診斷治療的時(shí)候，還要重點(diǎn)分析研究這些影響因素，看能否找到一種或多種造成動(dòng)脈粥樣硬化的因素，以便制定更加科學(xué)有效的治療方案，讓患者的病情可以獲得有效的干預(yù)和控制。正常的血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的主要方式為CX37和CX40，CX43一般位于血管中特殊的位置，比如血管連接處，伴隨AS的發(fā)展，內(nèi)皮細(xì)胞的表現(xiàn)形式會(huì)慢慢失去CX37和CX40，而CX43表達(dá)卻不斷增加。CX43有間接造成動(dòng)脈粥樣硬化的作用；CX43表達(dá)降低50%能夠明顯的將有LDL受體缺陷小鼠粥樣斑塊處的巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞數(shù)目減少，阻止斑塊形成，內(nèi)皮細(xì)胞GJIC不僅能選擇性的抑制CX43，還能抑制白細(xì)胞的粘附。選擇性的將CX43基因的內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行剔除，就會(huì)表現(xiàn)出VCAM-1、ICAM-1低表達(dá)的情況，從而降低單核與內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和黏附。這次研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)兩組患者的增殖細(xì)胞數(shù)目、遷移細(xì)胞數(shù)目、黏附細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行組間對(duì)比，差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與A組相比較，B組增殖細(xì)胞數(shù)目、遷移細(xì)胞數(shù)目、黏附細(xì)胞數(shù)目明顯下降。

綜上所述，縫隙連接蛋白CX43表達(dá)下降導(dǎo)致EPCs功能減退。