NF-E1b、CD276的表達(dá)與散發(fā)性結(jié)直腸癌（SCC）患者預(yù)后的關(guān)系分析

劉軍，歐金清，唐麗艷，雷平光

（1.深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 深圳 518105；2.深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院病理科，廣東 深圳 518105）

近年來(lái)隨著人們生活方式、飲食習(xí)慣的改變，各類惡性腫瘤疾病患病人數(shù)明顯增加且呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，結(jié)直腸癌就是其中最具代表性的一種[1]。流行病學(xué)調(diào)查顯示，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率在全國(guó)范圍內(nèi)均較高，在我國(guó)的發(fā)病率居第3位，患者5年生存率約為32%，該疾病的具體發(fā)病機(jī)制尚未明確，分析原因可能與遺傳、環(huán)境、飲食及老齡化社會(huì)進(jìn)程加快有關(guān)[2]。SCC 是結(jié)直腸癌的主要發(fā)病類型，而臨床對(duì)其具體的病因、發(fā)病機(jī)制尚未完全掌握，轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)及基因調(diào)控成為實(shí)體腫瘤的研究重要方向[3]。本研究旨在探究NFE1b 與CD276 在SCC 患者中的表達(dá)意義，并分析患者臨床發(fā)展、預(yù)后結(jié)局的提示價(jià)值，以期為臨床診療提供有效參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年3月至2018年2月本院收治的95例SCC確診患者為研究對(duì)象，所有患者均于手術(shù)后采集石蠟標(biāo)本。其中男59 例，女36 例；年齡37～75 歲，平均年齡（58.4±6.5）歲；病變部位結(jié)腸71例，直腸24例；依照美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)分期標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行分期，其中Ⅱ期54例，Ⅲ期41例；腺癌79例，其他類型癌癥16例。患者均未合并其他腫瘤發(fā)生，8周內(nèi)給予FOLFOX化療方案。

1.2 方法 對(duì)95 例患者的石蠟標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，首先選取40 g/L的甲醛對(duì)標(biāo)本進(jìn)行固定及石蠟包埋，標(biāo)本切片厚度為3 μm，切片標(biāo)本完成后放至恒溫烤箱中進(jìn)行烤片處理。常規(guī)進(jìn)行脫蠟及脫水操作，應(yīng)用PBS對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重新洗滌并采用檸檬酸高壓修復(fù)，CD276 抗體購(gòu)自美國(guó)CST公司，NF-E1b抗體購(gòu)自美國(guó)SANTA CRUZ公司，滴加后放置于4 ℃冰箱中過(guò)夜保存，再經(jīng)PBS沖洗并滴加對(duì)應(yīng)抗體，經(jīng)室溫培育后PBS沖洗，標(biāo)本中加入DAB顯色處理，采用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，復(fù)染成功后即采用中性樹(shù)脂封片。以正常的病理染色結(jié)果作為參考，對(duì)照判定陽(yáng)性檢出情況[5]。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)與隨訪 ①NF-E1b陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核中可見(jiàn)棕黃色或黃褐色顆粒物狀即可判定為陽(yáng)性細(xì)胞；CD276陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)與其一致；陽(yáng)性細(xì)胞≤10% 評(píng)分為1 分，＞10%且≤50%評(píng)分為2分，＞50%且≤75%為3分，＞75%評(píng)分為4分，陰性結(jié)果為1分，結(jié)合染色程度累計(jì)總得分，當(dāng)評(píng)分＞3分時(shí)即可判定檢出結(jié)果為陽(yáng)性；②從術(shù)后化療開(kāi)始進(jìn)行3 年隨訪，分析NF-E1b和CD276的表達(dá)與患者臨床病例特征及預(yù)后生存時(shí)間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“±s”表示，經(jīng)t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NF-E1b與CD276陽(yáng)性檢出情況 95例患者石蠟標(biāo)本中共計(jì)檢出81 例NF-E1b 陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為85.3%（81/95），CD276 共計(jì)檢出66 例陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為69.5%（66/95），免疫組化檢出結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 NF-E1b 與CD276 表達(dá)與患者臨床病理特征與預(yù)后的關(guān)系 NF-E1b 陽(yáng)性表達(dá)患者具有分期較晚、分化程度相對(duì)較低的特點(diǎn)，同時(shí)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高；CD276 陽(yáng)性表達(dá)患者臨床病理特征與前者較一致，且在腫瘤體積小的患者中更易出現(xiàn)，較高幾率出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，數(shù)據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

圖1 NF-E1b與CD276的表達(dá)情況

表1 NF-E1b與CD276同臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

3 討論

結(jié)直腸癌主要起源于結(jié)腸或直腸上皮黏膜組織，是一種臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤疾病，在全球范圍內(nèi)均具有較高的發(fā)病率[6]。結(jié)直腸癌患者早期無(wú)特征性癥狀表現(xiàn)，便血癥狀與痔瘡類似，難以鑒別，診斷檢出率較低，容易延誤最佳治療時(shí)機(jī)。當(dāng)出現(xiàn)典型癥狀時(shí)病情往往已進(jìn)展至中后期，增加治療難度，患者預(yù)后質(zhì)量欠佳，5年生存率較低[7]。結(jié)直腸癌臨床患者中SCC 約占90% 以上[8]，目前國(guó)內(nèi)外研究均未完全掌握結(jié)直腸癌的具體病因和相關(guān)發(fā)病機(jī)制，這也是導(dǎo)致臨床治療方案實(shí)施受阻的主要因素。

近年來(lái)，大量學(xué)者研究致力于轉(zhuǎn)錄因子在癌癥患者參與細(xì)胞增殖、分化及凋亡的機(jī)制探討，發(fā)現(xiàn)NF-E1b 與CD276 在諸多癌癥患者中有明顯的異常表達(dá)，懷疑同生物學(xué)行為有較大的相關(guān)性[9]。NF-E1b 是轉(zhuǎn)錄因子中的重要成員[10]，而CD276則主要參與免疫調(diào)節(jié)[11]，臨床中針對(duì)兩者作用機(jī)制及表達(dá)意義的研究較少。

本研究結(jié)果顯示，分化程度和TNM分期越高者陽(yáng)性表達(dá)檢出率相應(yīng)上調(diào)，中低分化病灶組織中NF-E1b與CD276陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高度分化病灶，進(jìn)一步說(shuō)明NF-E1b、CD276與SCC患者病情發(fā)展和惡性程度密切相關(guān)[12]，同時(shí)隨訪3年存活情況顯示，NF-E1b與CD276陽(yáng)性表達(dá)SCC患者近3年的存活率明顯低于陰性表達(dá)患者，提示NF-E1b與CD276的陽(yáng)性表達(dá)能夠預(yù)測(cè)患者近期的存活質(zhì)量，為臨床及早干預(yù)提供研究的新思路。

綜上所述，NF-E1b 與CD276 陽(yáng)性表達(dá)參與SCC 患者的病情發(fā)展與預(yù)后，兩者在SCC 患者中均具有較高的陽(yáng)性檢出率，值得進(jìn)一步探究其具體作用機(jī)制，以達(dá)到掌握相關(guān)機(jī)制并改善患者存活質(zhì)量的目的。