氣相色譜法測定硫酸阿扎那韋中殘留溶劑的含量

周 潔，高 衎，李春剛，唐祁勻

(上?，F(xiàn)代制藥海門有限公司，江蘇 南通 226100)

硫酸阿扎那韋是一種艾滋病病毒(HIV)蛋白酶抑制劑，主要與其他抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物聯(lián)用治療HIV病毒感染[1]. 當(dāng)前，常見的硫酸阿扎那韋生產(chǎn)工藝路線中，都需要使用醇類及其他溶劑[2-6]，而殘留溶劑是產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中不可或缺的關(guān)鍵指標(biāo)之一. 不過，目前硫酸阿扎那韋的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)在中國在藥典 Chp2015中未收錄，在國外藥典中，也鮮有關(guān)于殘留溶劑研究的記載[7].

硫酸阿扎那韋具有多種晶型，分別是晶型A、晶型I、晶型II[8]、C及E3型[9-10]、晶型H1[11]、晶型B、晶型P和無定型[12]. 其中，E3型是一種三乙醇溶劑合物(結(jié)構(gòu)如圖1所示)，系阿扎那韋游離堿在乙醇、硫酸共存條件下加熱生成[13].

圖1 三乙醇溶劑合物結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Structure of Azanavir sulfate E3

由于在測定硫酸阿扎那韋殘留溶劑乙醇的過程中，阿扎那韋與乙醇、硫酸共存且受熱(頂空加熱)，因此可能會產(chǎn)生溶劑合物，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果的回收率偏低. 硫酸阿扎那韋的合成與結(jié)晶工藝存在較多差異，文獻(xiàn)[14]雖然報道了其殘留溶劑的測定方法，但因其底物硫酸阿扎那韋原料藥晶型不同，某些晶型不會發(fā)生溶劑合物效應(yīng)，因此未做溶劑合物影響醇類測定結(jié)果的研究. 本文建立了氣相色譜法測定硫酸阿扎那韋中殘留溶劑的方法，改進(jìn)了樣品前處理方式，使用過量的其他醇類對樣品進(jìn)行預(yù)處理以消除溶劑合物效應(yīng). 該方法為其他具有相似結(jié)構(gòu)、相似溶劑合物效應(yīng)的品種的殘留溶劑研究提供了新的思路，具有較大的實用價值.

1 儀器與試劑

安捷倫e7890型氣相色譜儀(美國Agilent公司)；Empower色譜工作站(美國waters公司)；梅特勒mL240型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；色譜柱Agilent DB-624(30 m×0.32 mm×1.8 μm，美國Agilent公司).

乙醇(德國默克，K49984727811批，色譜級)；異丙醇(沃凱，18050263批，色譜級)；正庚烷(德國默克，I754190442批，色譜級)；N,N-二甲基甲酰胺(德國默克，I0956783820批，色譜級)；N,N-二甲基乙酰胺(德國默克，I0970399832批，色譜級)；二甲基亞砜(德國默克，I0954400820批，色譜級)；甲醇(德國默克，I0951907818批，色譜級)；正丁醇(國藥試劑，20170312批，分析純)；硫酸阿扎那韋(自制，201801011批)；

稀釋液A：N,N-二甲基乙酰胺；稀釋液B：甲醇-正丁醇(體積比1∶1).

2 試驗部分

2. 1 色譜條件

6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱，起始溫度為35 ℃，維持3 min，以2 ℃/min的速率升至70 ℃，再以20 ℃/min的速率升至220 ℃，維持2 min. 進(jìn)樣口溫度200 ℃，分流比20∶1；檢測器(FID)溫度為240 ℃；流速為1 mL/min.

2. 2 溶液配制

2. 2. 1 對照儲備液的配制

對照儲備溶液A：取丙酮5.0 g、二氯甲烷 0.6 g、甲基叔丁基醚5.0 g、正庚烷5.0 g、精密稱定，置于預(yù)置適量稀釋液A的100 mL容量瓶中，以稀釋液A定容至刻度，搖勻即得.

對照儲備溶液B：取乙醇5.0 g、異丙醇5.0 g，精密稱定，同法配制.

2. 2. 2 對照溶液的配制

對照溶液A：精密量取對照儲備溶液A 1.0 mL，置于預(yù)置適量稀釋液A的100 mL容量瓶中，以稀釋液A定容至刻度，搖勻即得.

對照溶液B：精密量取對照儲備溶液B 1.0 mL，置于預(yù)置適量稀釋液B的100 mL容量瓶中，以稀釋液B定容至刻度，搖勻即得.

2. 2. 3 供試品溶液的配制

供試品溶液A：取硫酸阿扎那韋約1.0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，以稀釋液A溶解、定容至刻度，搖勻即得(0.1 g/mL). 用于檢測樣品中丙酮、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正庚烷的溶劑含量.

供試品溶液B：取硫酸阿扎那韋約1.0 g，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，以稀釋液B溶解、定容至刻度，搖勻即得(0.1 g/mL). 用于檢測樣品中的乙醇、異丙醇的溶劑含量.

2. 2. 4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

線性溶液A組：精密量取對照儲備液A 0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，置于不同的100 mL容量瓶中，用稀釋液A定容至刻度，搖勻即得.

線性溶液B組：精密量取對照儲備液B 0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，置于不同的100 mL容量瓶中，用稀釋液B定容至刻度，搖勻即得.

3 結(jié)果與討論

3. 1 稀釋液篩選

在2.1節(jié)色譜條件下，分別考察不同稀釋液對待測組分的影響，結(jié)果如表1～2所列.

表1 不同稀釋液對待測組分的干擾情況Table 1 Interference results of different diluents

表2 溶劑合物效應(yīng)對不同醇類的選擇性Table 2 Selectivityof solvent complexes to different alcohols /%

由表1可知，在該方法下，N,N-二甲基乙酰胺對溶劑干擾最小. 因此選擇N,N-二甲基乙酰胺作為稀釋液A.

由表2可知，結(jié)構(gòu)越接近的醇，相互之間的替代性越強(qiáng)，消除溶劑效應(yīng)的效果越好. 以甲醇-正丁醇(體積比1∶1)為稀釋液，能最好地同時消除對乙醇、異丙醇的影響. 因此選擇甲醇-正丁醇(體積比1∶1)為稀釋液B.

3. 2 專屬性

取空白溶劑、對照溶液、供試品溶液分別依法測定. 試驗結(jié)果表明，空白溶劑及供試品均不干擾測定，殘留溶劑峰之間分離度大于2.0，方法專屬性良好. 試驗結(jié)果如表3所列.

表3 專屬性、定量限與檢測限試驗結(jié)果Table 3 Results of specificity test and LOD&LOQ

3. 3 檢測限、定量限

取配制的對照溶液，逐步稀釋，使S/N約分別為10、3左右，記錄此時的濃度分別為定量限、檢測限. 試驗結(jié)果表明，各殘留溶劑的檢測限、定量限如表3所列. 方法靈敏度良好，滿足定量分析的要求.

3. 4 線性關(guān)系

取不同濃度水平的線性溶液，分別依法測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線. 試驗結(jié)果表明，各殘留溶劑在一定范圍內(nèi)，濃度與峰面積的線性關(guān)系良好，r均大于0.999 0，滿足定量分析的要求. 結(jié)果如表4所列.

表4 線性試驗結(jié)果Table 4 Results of linear test

3. 5 重復(fù)性

試驗結(jié)果表明，同一均質(zhì)樣品(201801011批)平行測定6份，按外標(biāo)法計算，各殘留溶劑含量的RSD均低于5.0%，方法重復(fù)性良好，如表5所列.

表5 重復(fù)性試驗結(jié)果Table 5 Results of repetitive test /%，n=6

3. 6 回收率

回收率溶液A組：取硫酸阿扎那韋適量，精密稱定，加入對照儲備液A適量，用稀釋液A溶解并稀釋. 回收率溶液B組：取硫酸阿扎那韋適量，精密稱定，加入對照儲備液B適量，用稀釋液B溶解并稀釋.

試驗結(jié)果表明：不同濃度水平的加樣回收率溶液中，各殘留溶劑的回收率均在90%～110%范圍內(nèi)，RSD均低于5.0%，由表6可見，本方法準(zhǔn)確度良好，滿足定量測定的要求.

3. 7 樣品中醇類溶劑回收率偏低的原因分析

專利報道的硫酸阿扎那韋的三乙醇溶劑合物是一種E3型晶型，其差示掃描量熱(DSC)和熱重分析(TGA)圖譜如圖2所示[9]. 受熱硫酸阿扎那韋樣品的TGA和DSC圖譜如圖3所示.

由上述圖譜分析可知：受熱樣品的TGA和DSC圖譜與E3型基本一致. 由此推測，乙醇的加樣回收率偏低是由于與樣品在氣相色譜儀中受熱形成了溶劑合物. 回收率同樣偏低的異丙醇，也可能產(chǎn)生了相似的效應(yīng).

表6 回收率試驗結(jié)果Table 6 Results of recovery test

圖2 E3型TGA和DSC[9]Fig. 2 TGA/DSC of E3 type standard[9]

圖3 受熱樣品的TGA和DSCFig. 3 TGA/DSC results of treated samples

4 結(jié)論

本研究建立了一種采用氣相色譜法測定硫酸阿扎那韋中殘留溶劑的方法，特別是找到了一種能夠消除乙醇、異丙醇溶劑合物效應(yīng)的樣品前處理方式. 經(jīng)驗證，本方法專屬、靈敏，且在LOQ至限度濃度的1.5倍范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，方法的RSD均低于5.0%，回收率結(jié)果均介于90%～110%之間，方法重復(fù)性及準(zhǔn)確度較好. 因此，本方法滿足定量分析的要求，具有較高的參考意義和實用價值.