牛、羊包蟲病及其實驗室診斷技術

烏云花

（新疆博爾塔拉蒙古自治州博樂市畜牧獸醫(yī)站，新疆博樂 833400）

1 牛、羊包蟲病分析

包蟲病是由棘球?qū)傧x種的幼蟲所致的疾病。目前被公認的蟲種有細粒棘球穎蟲、多房棘球絳蟲、少節(jié)棘球絳蟲、伏氏棘球絳蟲。其形態(tài)、宿主和分布地區(qū)的不同，以細粒棘球絳蟲最為常見。本病的主要傳染源為狗、狼、狐、豺等。在包蟲病疫區(qū)的牛、羊群中常有包蟲病存在，而居民常以羊、牛等家畜內(nèi)臟不經(jīng)處理喂狗，使狗有吞食包蟲囊的機會，造成感染。腸內(nèi)感染蟲數(shù)有時可達數(shù)百至數(shù)千，其妊娠節(jié)片具有活動能力，可污染在皮毛上，并引起肛門發(fā)癢。當狗舐咬時把節(jié)片壓碎，糞便中蟲卵常污染狗的全身皮毛，如與其密切接觸，則很容易造成感染。人直接感染主要由于與狗親密接觸，若狗糞中蟲卵污染蔬菜或水源，尤其人畜共飲同一水源，可造成間接感染。羊、牛、人感染主要與環(huán)境衛(wèi)生及不良衛(wèi)生習慣有關。

2 實驗室診斷技術

2.1 試驗材料

2.1.1 檢測樣品來源

某縣某鎮(zhèn)家養(yǎng)牛、羊新鮮糞便共180份（每個鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集40份）。

2.1.2 試驗試劑

牛、羊糞包蟲抗原檢測試劑盒（生產(chǎn)廠家：深圳市康百得生物科技有限公司提供，批號：20180309）。

2.2 試驗儀器

潔凈工作臺（生產(chǎn)廠家：青島海爾特種電器有限公司，型號：HR40-IIA2）、酶標儀（生產(chǎn)廠家：北京拓普分析儀器有限公司，型號：ZS-3）、37oC恒溫箱（生產(chǎn)廠家：太倉精宏儀器設備公司，型號：PSH-200）、可調(diào)單道移液器（生產(chǎn)廠家：北京青云航空儀表設備公司，型號：4500020）、多道微量移液器（生產(chǎn)廠家：北京青云航空儀表設備公司，型號：4610020）、電子天平（北京賽多利斯公司，型號：BS224S）、電子顯微鏡（生產(chǎn)廠家：重慶光電公司，型號：H-6000）、離C，J0L（生產(chǎn)廠家：湖南湘立科學儀器有限公司，型號：TG16-WS）、純凈水機（生產(chǎn)廠家：上海優(yōu)普實業(yè)有限公司，型號：uPT優(yōu)普）、超低溫保存箱（生產(chǎn)廠家：青島海爾特種電器有限公司，型號：DW-86L338）、外科剖檢儀器、鑷子、燒杯、燒瓶、試管、試管架、載玻片、膠頭滴管、食鹽、玻璃棒。

2.3 試驗方法

2.3.1 檢測原理

本試劑盒采用夾心ELISA方法定性檢測牛、羊糞中包蟲抗原，如果待檢樣品中含有包蟲抗原，就會與包被板上的包蟲抗體及第二部加入的包蟲抗體酶標結合物特異性結合，間接結合在包被板上的包蟲抗體酶標結合物與底物反應的顯色狀況即可反映出樣品中是否有包蟲抗原。

2.3.2 洗滌液配置

準備500ml的錐形瓶2個，用蒸餾水將洗滌液10X（2號液）按l：10稀釋（例如，取100ml洗滌液10X加900ml蒸餾水混合），充分混合即為T作濃度洗滌液。

2.3.3 樣品稀釋液配置

用蒸餾水將樣品稀釋液2X（5號液）按1：1稀釋（如取100ml濃縮樣品稀釋液加100ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為T作濃度樣品稀釋液。

2.3.4 樣品處理

預先把采集來的牛、羊糞樣品放入超低溫冰柜（-7O℃以下）進行冷凍7d以上，以滅活蟲卵。用電子天平稱取lg牛、羊糞放入10ml塑料試管中，試管中加入1ml樣品稀釋液，用玻璃棒充分攪拌均勻，靜置l0min，取上清液于干凈塑料離心管中，再3000rpm離心10min，取上清液進行編號記錄待檢。

2.3.5 加樣反應

取試劑盒中的包被板進行加樣，該包被板是96孔除去各對照孔，可做90份牛、羊糞樣品，將待檢上清液按順序放人血清管放置板上以便操作，在放置板上做好標記以便判定結果。首先加陽性對照2孔，每孔僅加入100μl陽性對照品?？瞻讓φ?孔，每孔僅加入100μl樣品稀釋液；陰性對照2孔，每孔僅加入100μl陰性對照品；其余的樣品孔中，每孔僅加入100μl待檢樣品；蓋好封板膜，放入37℃恒溫箱避光反應3Omin。

2.3.6 洗板

甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿T作濃度洗滌液洗板6次，每次均需靜置1min；最后一次甩干凈，拍干。

2.3.7 加酶反應

除空白對照孔外，其余每孔加酶結合物（1號液）100μl，蓋好封板膜，37℃：避光反應30min，甩去孔內(nèi)液體，如上洗板，拍干。

2.3.8 顯色反應

按所需用量，臨用前取等體積底物（3號液）和顯色劑（4號液）充分混勻后每孔加100μl，蓋好封板膜，37℃避光反應l0min。

2.3.9 終止反應

加終止液（6號液）50uL，以空白對照調(diào)零，用酶標儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。參考值（1）cut-of值（COV）=陰性對照孔OD值x2.1（陰性對照孔OD值<0.15時按0.15計）。（2）有效性判定：陰性對照孔OD值≤0.30（若大于0.30則試驗無效）陽性對照孔OD值≥0.50（若小于0，50則試驗無效）檢驗結果解釋：樣品OD值≥COV，判為包蟲抗原陽性。樣品OD值

3 結語

包蟲病是一種人獸共患疾病，稱為動物源性疾病，近年來流行病學調(diào)查表明為地方性寄生蟲??；在流行區(qū)帶有職業(yè)性損害的特點，被列為某些人群特別是畜牧從業(yè)人員的職業(yè)病，中間宿主包括家畜和野生動物，預防包蟲病不僅是生物學范疇內(nèi)的一個問題，也是一個嚴重的社會問題，應采取綜合措施。