子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN與TK1水平變化及其陽性表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

朱婕曼，陳麗華

子宮內(nèi)膜癌是臨床上引起女性死亡的主要惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年升高的趨勢[1-2]。子宮內(nèi)膜癌早期癥狀不明顯，而臨床診斷時患者通常處于中晚期，預(yù)后較差[3]。目前，對子宮內(nèi)膜癌發(fā)病的分子作用機(jī)制尚不十分清楚，臨床上主要通過手術(shù)或化療進(jìn)行治療[4]。人第10號染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)及胸苷激酶-1(thymidine kinase 1, TK1)是與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和凋亡密切相關(guān)的生物大分子，而且可能是治療惡性腫瘤的潛在靶點(diǎn)[5-6]。但是目前尚未見到PTEN、TK1在不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清中的表達(dá)情況及其與臨床病理分級的相關(guān)性報(bào)道。故此，本研究回顧性分析88例子宮內(nèi)膜癌患者的臨床資料，分析不同臨床分期患者血清中PTEN、TK1表達(dá)情況，并探討患者預(yù)后與PTEN、TK1表達(dá)的相關(guān)性，以期為子宮內(nèi)膜癌的臨床診斷及治療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2016年6月—2018年6月診治的88例子宮內(nèi)膜癌患者作為子宮內(nèi)膜癌組，所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)其他類型惡性腫瘤者；②伴嚴(yán)重代謝系統(tǒng)疾病者；③伴嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙者；④伴嚴(yán)重心腎功能障礙者；⑤至隨訪截點(diǎn)時脫落病例；⑥臨床資料不完整者。納入患者年齡48～66(57.8±8.7)歲；根據(jù)國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會頒布的臨床分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期[7]，其中Ⅰ期患者25例(28.41%)，Ⅱ期患者24例(27.27%)，Ⅲ期患者16例(18.18%)，Ⅳ期患者23例(26.14%)；病理類型均為子宮內(nèi)膜樣腺癌，病理分級[8]：G1級31例(35.23%)，G2級30例(34.09%)，G3即27例(30.68%)。另選取2017年2月—2019年7月在我院行健康體檢且身體健康的女性85例作為對照組，年齡48～65(57.5±8.9)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批同意進(jìn)行。

1.2觀察指標(biāo) 本研究分析不同臨床分期以及不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清中PTEN及TK1表達(dá)水平。采用免疫組織化學(xué)染色法檢測子宮內(nèi)膜癌患者留存的病理組織標(biāo)本PTEN及TK1陽性表達(dá)情況，并通過電話、門診復(fù)查等方式進(jìn)行隨訪，隨訪時間截止至2019年6月，分析子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后與癌組織PTEN及TK1陽性表達(dá)的關(guān)系。

1.3治療方法 88例子宮內(nèi)膜癌患者中Ⅰ期患者25例給予子宮病灶擴(kuò)大切除+盆腔、腹主動脈旁淋巴結(jié)切除術(shù)；其余患者均給予子宮病灶擴(kuò)大切除+盆腔、腹主動脈旁淋巴結(jié)切除術(shù)聯(lián)合術(shù)后放化療。所有患者術(shù)后均給予我院自制中藥湯劑(黃芪、黨參、人參、靈芝等)提高機(jī)體免疫力治療。

1.4檢測方法 抽取子宮內(nèi)膜癌患者清晨空腹靜脈血5 ml，2000 r/min離心15 min后，取上清液保存于4℃保藏箱中待測，同時調(diào)取對照組體檢時留取的血清標(biāo)本。檢測時采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中PTEN及TK1水平。PTEN蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自O(shè)mega公司；TK1蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒購自R&D公司。所有檢測操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5免疫組織化學(xué)染色及判讀方法 取子宮內(nèi)膜癌患者留存的病理標(biāo)本，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，于枸櫞酸鈉中行抗原熱修復(fù)，3%過氧化氫中消除內(nèi)源過氧化物酶活性，添加山羊血清封閉后，加入PTEN、TK1一抗于4℃孵育過夜。以PBS液作為陰性對照，添加兔抗鼠IgG孵育后PBS液洗滌3次，后行DAB顯色，于光鏡下觀察。根據(jù)著色細(xì)胞數(shù)及染色程度確定PTEN、TK1的表達(dá)水平：著色細(xì)胞數(shù)<10%或未染色，記為(-)；著色細(xì)胞數(shù)為10%～20%而染色弱至中等，記為(+)；著色細(xì)胞10%～20%且染色強(qiáng)，或著色細(xì)胞20%～50%而染色弱至中等，記為(++)；著色細(xì)胞20%～50%而染色強(qiáng)，或著色細(xì)胞>50%，記為(+++)。其中(-)和(+)定義為低表達(dá)，(++)和(+++)定義為高表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1子宮內(nèi)膜癌組和對照組血清PTEN及TK1水平比較 與對照組比較，子宮內(nèi)膜癌組血清PTEN及TK1水平明顯升高(P<0.05)。見表1。

表1 子宮內(nèi)膜癌組和對照組血清PTEN及TK1水平比較

2.2不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較 不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者總體血清PTEN及TK1水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且隨著臨床分期的進(jìn)展子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平亦逐步升高(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1表達(dá)水平比較 不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者總體血清PTEN及TK1水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且隨著病理分級的加重子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平亦逐步升高(P<0.05)。見表3。

表2 不同臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較

表3 不同病理分級子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN及TK1水平比較

2.4子宮內(nèi)膜癌患者癌組織PTEN及TK1表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 子宮內(nèi)膜癌組PTEN高表達(dá)52例，低表達(dá)36例；TK1高表達(dá)55例，低表達(dá)33例。截止至2019年6月，子宮內(nèi)膜癌PTEN高表達(dá)者存活率為63.46%(33/52)明顯低于低表達(dá)者的存活率88.89%(32/36)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.124，P=0.008)；子宮內(nèi)膜癌TK1高表達(dá)者存活率為63.64%(35/55)明顯低于低表達(dá)者的存活率90.91%(30/33)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.946，P=0.005)。

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，多發(fā)于絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生存狀態(tài)。子宮內(nèi)膜癌早期無明顯癥狀，患者通常是在行婦科檢查或普查時發(fā)現(xiàn)。子宮內(nèi)膜癌患者一旦出現(xiàn)癥狀，多表現(xiàn)為出血、陰道排液、疼痛和腹部包塊等。但目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確。

新近有研究指出，PTEN參與調(diào)控了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程，且可能與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程相關(guān)[9-10]。在分析子宮內(nèi)膜樣癌及其前驅(qū)病變PTEN的表達(dá)及意義時發(fā)現(xiàn)從單純性增生、復(fù)雜性增生、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變到子宮內(nèi)膜樣癌，PTEN的缺失率逐漸升高[11]。在對新輔助化療前后子宮內(nèi)膜癌患者PTEN的變化及預(yù)后分析時也發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者實(shí)施新輔助化療效果顯著，能夠有效降低患者血清PTEN水平，降低術(shù)后復(fù)發(fā)率，延長患者生存期，且不良反應(yīng)少，其表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后密切相關(guān)[12]。既往研究也從細(xì)胞水平證明了PTEN與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系，金雀異黃素可能通過上調(diào)Egr1/PTEN信號通路的表達(dá)抑制PI3K/Akt信號通路的激活誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步影響了凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax及Caspase-3的表達(dá)[13]。本研究也發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者血清PTEN水平明顯升高，且隨著患者臨床分期及病理分級的升高，血清PTEN水平也逐步升高；隨著癌組織PTEN陽性表達(dá)的增強(qiáng)患者生存率降低。提示血清PTEN水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期及病理分級密切相關(guān)，且癌組織陽性表達(dá)越強(qiáng)患者的預(yù)后越差。

既往研究也證實(shí)，TK1可作為臨床診斷惡性腫瘤的重要參考指標(biāo)，且與患者的臨床分期及預(yù)后有密切的相關(guān)性[14-15]。葉偉等[16]研究發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌患者TK1水平較健康者升高，并與患者臨床分期呈正相關(guān)。張鴻艷[17]也證實(shí)，血清TK1表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，是患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因素。且鄒振武等[18]研究也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測血清TK1、癌抗原19-9對鑒別診斷胰腺癌、胰腺炎具有較高的臨床價(jià)值。本研究結(jié)果也證實(shí)，與對照組比較，子宮內(nèi)膜癌組血清TK1水平明顯升高，且隨著患者臨床分期及病理分級的升高，血清TK1水平逐步升高；隨著癌組織TK1陽性表達(dá)的增強(qiáng)患者生存率降低。提示血清TK1水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期及病理分級密切相關(guān)，且癌組織陽性表達(dá)越強(qiáng)患者預(yù)后越差。

綜上所述，血清PTEN及TK1水平與子宮內(nèi)膜癌患者的臨床分期及病理分級密切相關(guān)，且癌組織PTEN及TK1陽性表達(dá)越強(qiáng)患者預(yù)后越差。在以后的研究中將進(jìn)一步探索血清PTEN及TK1水平聯(lián)合其他相關(guān)因子在子宮內(nèi)膜癌診斷中的效果，為增強(qiáng)臨床無創(chuàng)診斷水平、早期發(fā)現(xiàn)腫瘤并采取積極的治療措施提供可靠依據(jù)。