動(dòng)物源金黃色葡萄球菌分離株mecA基因的表達(dá)及耐藥性分析

在自然界中SA廣泛存在，可形成數(shù)種毒力因子，為人畜共患的一種常見(jiàn)病原菌。SA作為食源性致病菌，已經(jīng)成為影響公共衛(wèi)生的重大難題之一。MRSA具有多重耐藥性，檢出率有逐日增加的趨勢(shì)，動(dòng)物源MRSA有經(jīng)環(huán)境或動(dòng)物食品消費(fèi)鏈向人類(lèi)傳播的風(fēng)險(xiǎn)。金葡菌是誘發(fā)牛乳腺炎的主要病原菌，現(xiàn)階段針對(duì)牛源金黃菌耐藥性的研究較多，但對(duì)其他動(dòng)物源的金黃菌耐藥性研究較少見(jiàn)。本文篩選出MRSA菌株，利用PCR檢測(cè)mecA基因，現(xiàn)將檢測(cè)情況作出如下報(bào)告。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 由項(xiàng)目組實(shí)驗(yàn)室提供動(dòng)物源金葡菌，共計(jì)45株。藥敏試驗(yàn)質(zhì)控株ATCC25922、ATCC43300。

1.1.2 儀器與設(shè)備 MIC藥敏板、培養(yǎng)箱及PCR儀等。

1.2 方法

1.2.1 藥敏試驗(yàn) 利用微量肉湯稀釋法對(duì)10種藥物的敏感性進(jìn)行檢測(cè)。在具體操作時(shí)使用滅菌棉簽蘸取3～5個(gè)待測(cè)單菌落，使其懸浮在NaCI溶液中（3mL 0.45%），用比濁儀把細(xì)菌濃度調(diào)整至適宜區(qū)間內(nèi)，混合搖勻，由MHB試管內(nèi)吸取50μL并將其安放在藥敏板各孔，在36℃恒溫箱中培養(yǎng)24h后，判斷結(jié)果。

1.2.2 檢測(cè)MRSA菌株 采用頭孢西丁制片法進(jìn)行。嚴(yán)格依照CLSI有關(guān)規(guī)定，把待測(cè)菌株涂擦在瓊脂平板上后，將頭孢西丁紙片貼上，恒溫培養(yǎng)后利用反射光閱讀紙片試驗(yàn)結(jié)果。

1.2.3 檢測(cè)mecA基因 依照Z(yǔ)HANG等方法合成mecA引物，目標(biāo)片斷為146bp，工作濃度為20pmol/L，-20℃低溫環(huán)境下保存。利用DNA模板取多個(gè)菌落并將其放置于EP管內(nèi)，水浴、離心處理后，取上層清液作為模板，保存待用。提取8μL PCR產(chǎn)物，用2%瓊脂糖凝膠電泳，在成像儀上觀(guān)察結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 藥敏試驗(yàn) 金黃菌對(duì)莫匹羅星、萬(wàn)古霉素的耐藥率為0，對(duì)利福平的耐藥率為3.8%，對(duì)青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶、泰妙菌素、氯霉素的耐藥率依次為80.7%、74.3%、78.3%、68.1%、56.5，對(duì)紅霉素的耐藥率為92.7%。

2.2 MRSA檢測(cè)情況 共檢出23株MRSA菌株，檢出率為51.1%。其中，發(fā)病樣品、健康畜禽的糞便樣品、環(huán)境樣品中分別檢出5、11、7株，其中發(fā)病樣品只由豬內(nèi)臟中檢出MRSA。

2.3 mecA基因檢出情況 納入本次研究的樣品中，共計(jì)檢測(cè)出含有mecA基因的菌株23例，占51.1%，包括MRSA21株、MSSA2株。MRSA內(nèi)mecA陽(yáng)性21株，陰性2株，mecA比例為91.3%；MSSA中mecA陽(yáng)、陰性分別有2株、18株，mecA比例為10.0%。MRSA內(nèi)mecA基因攜帶率明顯高于MSSA。

3 結(jié)論

本次試驗(yàn)研究表明，除了萬(wàn)古霉素、莫匹羅星外，金葡菌對(duì)其他藥物均產(chǎn)生了耐藥性。對(duì)利福平的耐藥率為3.8%，對(duì)青霉素、鏈霉素、甲氧氨芐嘧啶的耐藥率均在70～81%之間，而對(duì)紅霉素的耐藥率高于90.0%。頭孢西丁紙片法檢測(cè)出MRSA共計(jì)23株，占51.1%；并且發(fā)病樣本中只從豬內(nèi)臟樣品中檢測(cè)出MRSA，這可能是因?yàn)樯i在疾病預(yù)防、治療過(guò)程中未能科學(xué)使用抗生素所引發(fā)的。

mecA基因檢出率為51.1%，MRST內(nèi)mecA基因攜帶率明顯高于MSSA，與國(guó)內(nèi)部分研究結(jié)果相一致。MSSA中有2株檢測(cè)出mecA基因，藥敏試驗(yàn)表明其對(duì)氯霉素敏感，但耐藥情況比不攜帶mecA基因更為嚴(yán)重[2]。

結(jié)合本文研究的內(nèi)容發(fā)現(xiàn)，攜有mecA基因的金葡菌具有較廣泛的耐藥性、敏感性等數(shù)個(gè)表現(xiàn)，MRSA、MSSA內(nèi)均能檢測(cè)出mecA基因。采用PCR能快捷、精確的檢測(cè)到mecA基因，但如果依照mecA基因去鑒別MRSA，則應(yīng)關(guān)注假陰性的情況。