omega-3脂肪酸在圍絕經(jīng)期焦慮樣小鼠中的抗焦慮作用及機(jī)制

何儲(chǔ)君，涂君雪，黃婉然，鮑仕慧

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 藥學(xué)部，浙江 溫州 325027）

圍絕經(jīng)期綜合征又稱更年期綜合征（menopausal syndrome，MPS）是婦女在絕經(jīng)前后由于雌激素水平波動(dòng)或下降所致的以植物性神經(jīng)紊亂為主，伴有神經(jīng)心理癥狀的一組癥候群，持續(xù)時(shí)間一般為8～12年。主要癥狀包括潮紅、出汗、情緒不穩(wěn)定、激動(dòng)易怒、記憶力減退、工作能力下降等[1]。約85%圍絕經(jīng)期婦女為MPS所擾，罹患抑郁癥或焦慮癥的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加[2]。根據(jù)經(jīng)典的單胺假說(shuō)和受體假說(shuō)研發(fā)的經(jīng)典抗焦慮抑郁藥主要有選擇性5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）再攝取抑制劑、去甲腎上腺素（noradrenaline，NE）再攝取抑制劑和單胺氧化酶抑制劑等。然而，這些經(jīng)典藥物只對(duì)60%的焦慮抑郁癥患者有效，且療效有限，至多改善50%的癥狀。此外，需服藥2～6周才能發(fā)揮藥效，且長(zhǎng)期使用伴有嚴(yán)重的不良反應(yīng)[3]。因此，尋找更安全、有效，且不良反應(yīng)小的抗焦慮抑郁藥物顯得尤為必要。

omega-3脂肪酸（omega-3 polyunsaturated fatty acids，n-3 PUFA）是一種從深海魚類中提取出來(lái)的多不飽和脂肪酸，因其第一個(gè)不飽和鍵出現(xiàn)在碳鏈甲基端的第3位而得名，主要包括α-亞麻酸（α-linolenic acid，ALA）、二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid，EPA）和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA），具有顯著的抗炎和降低三酰甘油的作用，可能在相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。有研究發(fā)現(xiàn)，在嚙齒動(dòng)物飲食中長(zhǎng)期加入n-3 PUFA可以誘導(dǎo)出抗抑郁行為，并且同時(shí)增加海馬的體積、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）的表達(dá)量和新生神經(jīng)細(xì)胞的數(shù)量[4]。有研究表明，n-3 PUFA的攝入量同焦慮抑郁癥的發(fā)生率和嚴(yán)重性有著不同程度的相關(guān)性，n-3 PUFA有助于抑郁癥的治療[5-6]。因此，本研究采用雙側(cè)卵巢摘除術(shù)聯(lián)合慢性應(yīng)激建立圍絕經(jīng)期焦慮模型，研究n-3 PUFA對(duì)圍絕經(jīng)期焦慮模型小鼠行為學(xué)的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康雌性ICR小鼠，體質(zhì)量22～26（24±1）g，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。飼養(yǎng)于溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)動(dòng)物房，動(dòng)物許可證號(hào):SYXK（浙）2010-0150。飼養(yǎng)條件:每籠5只，室溫（22±1）℃，濕度（50±10）%，晝夜節(jié)律，自然光照，自由攝食飲水。所有動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境5 d后進(jìn)行手術(shù)。

1.1.2 藥品及試劑:n-3 PUFA購(gòu)于上海展望集團(tuán)；水合氯醛、高氯酸、枸櫞酸鉀、乙二胺四乙酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、辛烷基磺酸鈉、甲醇、鹽酸丙咪嗪、二氫溴犬脲胺、4-羥基喹啉、氯吉蘭、鹽酸司立吉林、NE、多巴胺（dopamine，DA）、5-HT、5-羥吲哚乙酸（5-hydroxy-indoleacetic acid，5-HIAA）、3，4-二羥基苯乙酸（dopac）、氟西汀均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司。每次實(shí)驗(yàn)前n-3 PUFA需用花生油配成所需要濃度。

1.1.3 主要儀器:動(dòng)物行為學(xué)分析系統(tǒng)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所；JY92-2D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)購(gòu)自寧波新芝生物科技股份有限公司；Eppendorf 5417R高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；Bio-Rad 680酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)伯樂公司；970CRT型熒光分光光度計(jì)購(gòu)自美國(guó)Perkin Elmer公司；高效液相儀購(gòu)自美國(guó)Agilent公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組和給藥:采用隨機(jī)數(shù)字表法將56只雌性ICR小鼠分成假手術(shù)+生理鹽水組（0.9%氯化鈉溶液灌胃）、雙側(cè)卵巢切除（OVX）+生理鹽水組（0.9%氯化鈉溶液灌胃）、OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組（0.9%氯化鈉溶液于慢性應(yīng)激前30 min灌胃）、OVX+10 mg/kg n-3 PUFA組（10 mg/kg n-3 PUFA于慢性應(yīng)激前30 min灌胃）、OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組（20 mg/kg n-3 PUFA于慢性應(yīng)激前30 min灌胃）、OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組（60 mg/kg n-3 PUFA于慢性應(yīng)激前30 min灌胃）、OVX+10 mg/kg氟西汀組（10 mg/kg氟西汀于慢性應(yīng)激前30 min灌胃），每組8只。每天給藥1次，連續(xù)2周。

1.2.2 圍絕經(jīng)期模型的建立:在BEKKU等[7-8]建立的方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良。除假手術(shù)+生理鹽水組外所有小鼠在適應(yīng)環(huán)境5 d后進(jìn)行雙側(cè)卵巢手術(shù)摘除。卵巢摘除術(shù):采用10%的水合氯醛（5 mL/kg）腹腔注射麻醉小鼠，取俯臥位皮潔后乙醇棉球消毒背部皮膚，在小鼠大腿根部稍上方水平，脊柱側(cè)方不到1 cm處用眼科剪剪開一個(gè)與脊柱平行的長(zhǎng)約5 mm皮膚切口，仔細(xì)剪開下方腰肌，仔細(xì)尋找包繞卵巢的脂肪組織，見到粉紅色的卵巢后將其拉出切口，在卵巢兩側(cè)結(jié)扎并摘除卵巢。假手術(shù)+生理鹽水組不切除卵巢，僅摘取旁邊少許脂肪組織。

1.2.3 慢性應(yīng)激模型建立:選擇圍絕經(jīng)期模型小鼠，參照文獻(xiàn)[9-10]進(jìn)行改良以建立慢性應(yīng)激模型，方案如下:禁食（24 h）、禁水（24 h）、束縛（4 h）、夾尾（1 min）、常溫強(qiáng)迫游泳（5 min）、潮濕墊料（24 h）、冰水強(qiáng)迫游泳（10 ℃，5 min）、束縛（6 h）。每日2個(gè)不同應(yīng)激，不同應(yīng)激交替進(jìn)行，共計(jì)14 d。

1.2.4 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn):高架十字迷宮裝置由具有2個(gè)開臂和2個(gè)閉臂（高40 cm）的4個(gè)分支臂（50 cm×10 cm）組成。開臂和閉臂通過(guò)中心平臺(tái)（10 cm×10 cm）連接。迷宮裝置處于地面上方50 cm處。在給藥后第14天，將小鼠單獨(dú)放置在高架十字迷宮的中心，面向開臂。記錄5 min內(nèi)小鼠分別進(jìn)入開臂和閉臂的時(shí)間和次數(shù)。只有當(dāng)前爪都通過(guò)分界線，小鼠才算進(jìn)入開臂或閉臂。進(jìn)入開臂次數(shù)百分比和在開臂的時(shí)間百分比，開臂次數(shù)（%）=進(jìn)入開臂次數(shù)/進(jìn)入開臂和閉臂總次數(shù)×100%；開臂時(shí)間（%）=在開臂花費(fèi)的時(shí)間（s）/在開臂和閉臂的總時(shí)間（s）×100%。為了消除氣味對(duì)測(cè)試結(jié)果的干擾，在每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后用乙醇清潔裝置，徹底干燥后再進(jìn)行下一個(gè)實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 大理石掩埋實(shí)驗(yàn):按照旺建偉等[11]所描述的方法進(jìn)行大理石掩埋實(shí)驗(yàn)。在正式實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，將小鼠單獨(dú)放在一個(gè)箱子（40 cm×24 cm×20 cm）中，其箱子底部鋪上一層5 cm的墊料，在箱子的墊料上擺放9顆玻璃珠子（直徑為2.3 cm），記錄小鼠10 min內(nèi)掩埋玻璃珠子的顆粒數(shù)，其玻璃珠子被掩埋入二分之一視為被掩埋。

1.2.6 自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn):在給藥后第14天，慢性應(yīng)激30 min后開始實(shí)驗(yàn)。按陳松芳等[12]所描述的方法稍作修飾。采用自動(dòng)化活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)測(cè)量小鼠的自發(fā)活動(dòng)。將小鼠置于正方形開野實(shí)驗(yàn)箱（80 cm×80 cm×75 cm），底板用筆畫成10 cm×10 cm的方格。室內(nèi)隔音，小鼠經(jīng)過(guò)5 min的適應(yīng)期后，通過(guò)自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)自動(dòng)記錄10 min內(nèi)小鼠在開場(chǎng)箱內(nèi)活動(dòng)的數(shù)據(jù)即移動(dòng)的距離。

1.2.7 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè):在行為學(xué)結(jié)束后，小鼠斷頭取腦，迅速剝離全腦，分離出前額葉皮層，下丘腦和海馬，稱質(zhì)量后儲(chǔ)存于-80 ℃中。根據(jù)NITTA等[13]所描述的方法稍作修飾，用高效液相電化學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)5-HT、NE、DA、5-HIAA、dopac的濃度。每個(gè)組織在200 μL冰冷的溶液A（0.4 mol/L的高氯酸）中超聲勻漿。勻漿液在冰上避光放置1 h，離心20 min（12 000×g，4 ℃），丟棄沉淀。取160 μL的上清液加入80 μL的B液（0.2 mol/L枸櫞酸鉀、0.2 mol/L EDTA、0.3 mol/L K2HPO4），混合液在冰上靜置1 h，再次離心20 min（12 000×g，4 ℃）。取20 μL的混合上清液直接加入到裝有C18反相柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）和電化學(xué)檢測(cè)器的高效液相色譜中，流動(dòng)相成分為:125 mmol/L（pH=4.3）枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液、0.1 mmol/L EDTA、1.2 mmol/L辛烷基磺酸鈉、16%甲醇。流速:1.0 mL/min，5個(gè)峰全出時(shí)間為32 min。檢測(cè)器工作電壓分別為:50、100、200、300、400、500 mV。腦組織中的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度用ng/g濕組織表示。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行分析。計(jì)量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Dunnett’s t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高架十字迷宮和大理石掩埋實(shí)驗(yàn) 在給藥后第14天，高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，相比于OVX+生理鹽水組，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)明顯減少，在開臂的時(shí)間也明顯減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。這表明卵巢摘除慢性應(yīng)激小鼠出現(xiàn)焦慮樣癥狀。然而，在給予n-3 PUFA后產(chǎn)生了逆轉(zhuǎn)作用，與OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組相比，OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組和OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組及OVX+10 mg/kg氟西汀組小鼠進(jìn)入開臂的次數(shù)和時(shí)間均明顯上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1A-B。

在大理石掩埋實(shí)驗(yàn)中得到類似的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，相比于OVX+生理鹽水組，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠大理石掩埋數(shù)量明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。給予n-3 PUFA后，與OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組相比，OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組和OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組及OVX+10 mg/kg氟西汀組小鼠大理石掩埋數(shù)顯著降低（P＜0.05）。見圖1C。

2.2 自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn) 為了驗(yàn)證n-3 PUFA的抗焦慮作用，排除給藥后藥物帶來(lái)的神經(jīng)興奮性或抑制性作用，本研究檢測(cè)了小鼠的自主活動(dòng)。結(jié)果表明給予n-3 PUFA不同劑量（10、20、60 mg/kg），以及是否卵巢摘除及慢性應(yīng)激，與假手術(shù)相比，均未對(duì)小鼠的自發(fā)活動(dòng)總路程造成影響，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2。

圖1 各組小鼠高架十字迷宮和大理石掩埋實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖2 各組小鼠自主活動(dòng)的總路程

2.3 小鼠各腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè) 相比于OVX+生理鹽水組，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠前額葉皮層、下丘腦和海馬組織里的5-HT含量顯著降低（P＜0.05）。然而，給予n-3 PUFA后產(chǎn)生了逆轉(zhuǎn)作用，其中20、60 mg/kg組在3處腦組織中5-HT的含量顯著上升，與陽(yáng)性對(duì)照藥氟西汀給藥組結(jié)果類似（P＜0.05）。各組小鼠前額葉皮層、下丘腦和海馬組織中5-HIAA的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠前額葉皮層和海馬組織中的5-HIAA/5-HT比值較假手術(shù)+生理鹽水組升高，給予60 mg/kg n-3 PUFA治療后顯著下降（P＜0.05）。見表1-3。

OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠3個(gè)腦組織中NE含量較OVX+生理鹽水組顯著降低，經(jīng)n-3 PUFA治療后顯著增加（P＜0.05）。前額葉皮層中，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組相比于OVX+生理鹽水組DA水平降低，給予n-3 PUFA（20、60 mg/kg）后DA水平顯著升高（P＜0.05）。dopac的含量在前額葉皮層、下丘腦和海馬組織中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1-3。

3 討論

自然或手術(shù)更年期導(dǎo)致雌激素和其他激素水平下降，同時(shí)影響其他生理和心理變化[14]。長(zhǎng)期處于雌激素水平低下的女性易患各類疾病如皮膚萎縮[15]、記憶改變[16]、骨質(zhì)疏松癥、心血管疾病[17]以及焦慮和抑郁[18]。缺乏n-3 PUFA可誘發(fā)可逆的重癥抑郁癥疾病，更值得關(guān)注的是，女性群體中n-3 PUFA與抑郁癥的相關(guān)性是男性的2倍，且飲食中缺乏n-3 PUFA攝入會(huì)增加女性的抑郁癥風(fēng)險(xiǎn)，而對(duì)男性無(wú)影響[19]。大鼠卵巢切除術(shù)被用作手術(shù)絕經(jīng)模型（相當(dāng)于女性雙側(cè)卵巢切除術(shù)）。研究發(fā)現(xiàn)，大鼠卵巢摘除12周后，明顯表現(xiàn)出焦慮樣行為[20]。臨床上采用激素替代治療法改善圍絕經(jīng)期引發(fā)的相關(guān)疾病，但是長(zhǎng)期使用此法會(huì)產(chǎn)生明顯的不良反應(yīng)，如增加腦血管病發(fā)生率，形成靜脈血栓栓塞和激素依賴性乳腺癌，因此雌激素替代法治療受到限制[21]，尋找理想的藥物顯得尤為迫切。

表1 n-3 PUFA對(duì)前額葉皮層神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

表1 n-3 PUFA對(duì)前額葉皮層神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

與OVX+生理鹽水組比:aP ＜0.05，bP ＜0.01；與OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組比:cP ＜0.05，dP ＜0.01

組別 5-HT（ng/g） 5-HIAA（ng/g） 5-HIAA/5-HT NE（ng/g） DA（ng/g） dopac（ng/g）假手術(shù)+生理鹽水組 351.4±13.2 358.1±17.1 1.02±0.04 352.9±18.6 27.2±1.0 50.9±2.8 OVX+生理鹽水組 361.9±13.0 369.7±18.1 1.01±0.02 347.1±16.7 28.3±1.2 50.5±2.9 OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組 291.1±10.1b 363.8±10.3 1.26±0.07a 298.3± 6.9a 20.2±1.3a 44.4±2.5 OVX+10 mg/kg n-3 PUFA組 294.9±11.1 361.7±28.2 1.23±0.10 325.5±22.0 22.5±1.1 49.1±1.7 OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組 330.8±11.7c 359.9±17.6 1.09±0.04 354.6±13.7c 24.3±1.1c 27.5±2.3 OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組 347.8±14.7d 362.3±22.1 1.04±0.04c 368.6±19.6d 26.1±1.4d 48.5±2.7 OVX+10 mg/kg氟西汀組 351.8±15.0d 367.3±19.5 1.06±0.09c 338.8±18.7 22.6±1.9 51.7±2.8

表2 n-3 PUFA對(duì)下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

表2 n-3 PUFA對(duì)下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

與OVX+生理鹽水組比:aP ＜0.05，bP ＜0.01；與OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組比:cP ＜0.05，dP ＜0.01

組別 5-HT（ng/g） 5-HIAA（ng/g） 5-HIAA/5-HT NE（ng/g） DA（ng/g） dopac（ng/g）假手術(shù)+生理鹽水組 331.7±19.9 435.9±20.2 1.32±0.07 239.9±21.8 40.3±3.6 51.9±3.1 OVX+生理鹽水組 332.6±15.0 433.8±29.3 1.31±0.11 252.8±19.8 41.5±2.8 54.8±2.5 OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組 257.7±16.4b 382.7±24.3 1.50±0.12 164.7±18.2a 39.2±3.9 47.2±3.0 OVX+10 mg/kg n-3 PUFA組 294.6±34.3 412.7±25.7 1.49±0.20 213.4±19.2 38.4±2.5 48.5±3.5 OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組 326.5±20.2c 419.6±35.4 1.28±0.06 226.8±19.9c 42.5±3.3 50.6±3.5 OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組 331.9±30.6c 428.8±21.7 1.33±0.15 242.6±18.9d 43.4±3.2 49.5±4.7 OVX+10 mg/kg氟西汀組 342.3±22.1c 439.8±23.6 1.31±0.12 218.1±14.7 43.7±3.4 49.5±3.6

表3 n-3 PUFA對(duì)海馬神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

表3 n-3 PUFA對(duì)海馬神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物濃度的影響（每組n=8，

與OVX+生理鹽水組比:aP ＜0.05，bP ＜0.01；與OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組比:cP ＜0.05

組別 5-HT（ng/g） 5-HIAA（ng/g） 5-HIAA/5-HT NE（ng/g） DA（ng/g） dopac（ng/g）假手術(shù)+生理鹽水組 576.2±42.6 489.7±39.9 0.86±0.06 363.2±27.5 15.6±1.3 44.7±1.9 OVX+生理鹽水組 555.8±36.2 494.2±32.6 0.90±0.08 366.4±25.9 16.0±1.7 43.2±3.6 OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組 373.9±38.9b 451.6±15.1 1.25±0.12a 279.2±22.0a 11.7±1.0 39.2±2.0 OVX+10 mg/kg n-3 PUFA組 432.0±27.9 432.1±24.1 1.03±0.12 298.1±16.5 12.2±0.8 39.3±2.8 OVX+20 mg/kg n-3 PUFA組 459.4±16.2c 479.6±18.2 1.05±0.06 329.2±14.1 13.9±1.3 38.3±3.6 OVX+60 mg/kg n-3 PUFA組 484.6±24.2c 452.0±18.5 0.94±0.04c 345.0±19.5c 14.6±1.3 40.2±2.3 OVX+10 mg/kg氟西汀組 481.0±29.8c 489.3±11.8 1.04±0.09 321.8±15.1 14.7±0.8 42.8±2.7

日常生活壓力是焦慮癥發(fā)病的一個(gè)促發(fā)因素。慢性不可預(yù)知性應(yīng)激模擬日常生活所面對(duì)的各種壓力，是一種經(jīng)典的動(dòng)物焦慮模型且已被廣泛應(yīng)用[22]。應(yīng)激期間變化的、不可預(yù)知的應(yīng)激誘發(fā)焦慮，且應(yīng)激可以誘發(fā)焦慮樣動(dòng)物模型出現(xiàn)行為缺陷。而且，抗焦慮藥物可以逆轉(zhuǎn)行為學(xué)結(jié)果和由不可預(yù)測(cè)的慢性壓力引起的神經(jīng)和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)異常。本研究采用小鼠雙側(cè)卵巢摘除恢復(fù)1周后，慢性應(yīng)激2周，每天進(jìn)行2種不同類型的應(yīng)激，建立圍絕經(jīng)期焦慮樣模型，之后采用高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和大理石掩埋實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)焦慮樣行為。OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠掩埋大理石的數(shù)量顯著高于OVX+生理鹽水組小鼠，呈現(xiàn)焦慮不安狀態(tài)，持續(xù)給予n-3 PUFA（20、60 mg/kg）可顯著逆轉(zhuǎn)此現(xiàn)象。同樣在高架十字迷宮中，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠進(jìn)入開臂的時(shí)間和次數(shù)顯著少于n-3 PUFA治療組。以上結(jié)果表明，持續(xù)給予n-3 PUFA可以改善圍絕經(jīng)期焦慮樣小鼠行為。該結(jié)果與一項(xiàng)Meta分析結(jié)果相符，此Meta分析統(tǒng)計(jì)了11個(gè)國(guó)家的2 240例患者發(fā)現(xiàn)，相比于安慰組，n-3 PUFA治療組能顯著改善患者的焦慮癥狀；與亞臨床患者相比，n-3 PUFA抗焦慮作用在臨床患者上的效果更加明顯[23]。SONG等[24-25]發(fā)現(xiàn)，飲食中增加EPA含量可以降低大鼠焦慮癥行為。綜上，我們認(rèn)為n-3 PUFA對(duì)圍絕經(jīng)期女性的焦慮癥可能具有調(diào)節(jié)作用。

焦慮癥與5-HT、NE和DA通路的遞質(zhì)傳遞損傷有關(guān)。5-HT涉及多種與情緒、睡眠、學(xué)習(xí)、記憶和性行為有關(guān)的神經(jīng)精神疾病[26]。5-HT的代謝產(chǎn)物5-HIAA與5-HT的比值是作為衡量神經(jīng)遞質(zhì)在體內(nèi)代謝的指標(biāo)，5-HIAA/5-HT比值下降表明了神經(jīng)遞質(zhì)代謝減慢。本研究發(fā)現(xiàn)圍絕經(jīng)期焦慮癥模型組小鼠腦內(nèi)5-HT含量下降，5-HIAA/5-HT比值增加；持續(xù)給予n-3 PUFA 14 d可逆轉(zhuǎn)上述變化，由此可知，n-3 PUFA通過(guò)抑制單胺氧化酶的活性來(lái)調(diào)節(jié)體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，從而改善焦慮樣癥狀。眾所周知，NE在侵略、焦慮、獎(jiǎng)賞及其他應(yīng)激相關(guān)的行為中起著重要的作用[27]。本研究結(jié)果顯示，OVX+慢性應(yīng)激+生理鹽水組小鼠海馬、前額葉皮層和下丘腦內(nèi)NE含量顯著下調(diào)，持續(xù)給予n-3 PUFA 14 d可逆轉(zhuǎn)上述變化。因此，n-3 PUFA改善焦慮癥狀態(tài)與影響NE遞質(zhì)有關(guān)。有研究指出，DA通路在精神恍惚的抑郁樣患者作用更明顯[28]。然而n-3 PUFA在本研究中對(duì)下丘腦和海馬中的DA含量沒有影響，對(duì)前額葉皮層有作用。其可能解釋為，海馬、前額葉皮層和下丘腦都參與了抑郁、焦慮、學(xué)習(xí)記憶在內(nèi)的多種重要行為的改變[29]，然而主流研究認(rèn)為邊緣系統(tǒng)在焦慮癥方面有著重要的作用，特別是前額葉皮層和海馬。重癥抑郁癥患者尸檢發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFA的主要組成物質(zhì)DHA在女性前額葉皮層中的含量顯著降低[30]。由此我們推測(cè)，前額葉皮層對(duì)于n-3 PUFA在情緒調(diào)節(jié)方面（特別是抑郁和焦慮癥）的作用更加敏感?？傊?，n-3 PUFA能調(diào)節(jié)腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與其代謝產(chǎn)物的含量，有望成為具有一定前景的抗焦慮藥物。