婦科千金膠囊對小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫活性的研究

徐佳 夏伯候 鄧靜 林麗美 何娟娟 吳夢瑤 龔云 雷磊

〔摘要〕 目的 研究婦科千金膠囊對小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖及免疫調(diào)節(jié)的影響。方法 分離制備小鼠脾淋巴細(xì)胞，將細(xì)胞分為空白組（不做任何處理），刀豆蛋白A組（刀豆蛋白A干預(yù)，ConA組），LPS組（脂多糖干預(yù)，LPS組）及不同濃度的婦科千金膠囊組（FKQ），作用時間分別為24 h、48 h和72 h。CCK8法檢測FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖的影響;MTT法檢測ConA及LPS對脾淋巴細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測各組小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+的比例并計算CD4+/CD8+的比值;ELISA檢測各組細(xì)胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的表達(dá)。結(jié)果 FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞有顯著的增殖作用，以濃度為30、40、50 μg/mL時其作用越明顯（P<0.01）;FKQ能對ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞及LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖有著明顯的促進(jìn)作用，以濃度為50 μg/mL最顯著（P<0.01）;中、高濃度的FKQ協(xié)同ConA能升高CD4+的比例，降低CD8+的比例，顯著升高CD4+/CD8+的比值（P<0.01）。此外，不同濃度的FKQ均能明顯增加IFN-γ及IL-2的表達(dá)（P<0.01，P<0.05），降低IL-4和IL-10的水平，以中、高濃度最為顯著（P<0.01），調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡。結(jié)論 婦科千金膠囊可有效促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，升高CD4+和CD8+比例，促進(jìn)Th1細(xì)胞因子的分泌，使Th1/Th2亞群向“Th1漂移”，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，提高細(xì)胞免疫應(yīng)答。

〔關(guān)鍵詞〕 婦科千金膠囊;脾淋巴細(xì)胞;增殖;免疫調(diào)節(jié);Th1/Th2

〔中圖分類號〕R285.5 ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.11.004

〔Abstract〕 Objective To study the effects of Fuke Qianjin Capsule （FKQ） on the proliferation and immunoregulation of mouse splenic lymphocytes in vitro. Methods After isolation and culture of mouse spleen lymphocytes， cells were assigned into a control group （no treatment）， a ConA group（intervention with ConA）， a LPS group（intervention with LPS） and Fuke Qianjin Capsule of different concentrations （FKQ）. They were treated for 24 h， 48 h and 72 h respectively. CCK8 assay was used to test the effects of FKQ on proliferation of spleen lymphocytes in vitro; MTT method was used to detect the effect of ConA and LPS on the proliferation of splenic lymphocytes; Flow cytometry was used to detect the proportion of CD4+ and CD8+ and calculate CD4+/CD8+ ratio. Moreover， IFN-γ， IL-2， IL-4 and IL-10 were detected by ELISA. Results FKQ at the concentrations of 30， 40 and 50 μg/mL significantly promoted the proliferation of splenic lymphocytes （P<0.01）. FKQ could significantly promote the proliferation of T lymphocytes induced by ConA and B lymphocytes induced by LPS， with the concentration of 50 μg/mL being the most significant （P<0.01）. The medium and high concentrations of FKQ cooperated with ConA increased the ratio of CD4+， decreased the ratio of CD8+， and significantly increased the ratio of CD4+/CD8+ （P<0.01）. Different concentrations of FKQ could significantly increase the expression of IFN-γ and IL-2 （P<0.01，P<0.05）， decreasethe levels of IL-4 and IL-10 （P<0.01）， to regulated the balance of Th1/Th2. Conclusion FKQ can promote the proliferation of splenic lymphocytes effectively， increase the proportion of CD4+ and CD8+， and promote the secretion of Th1 cytokines， thus shifting the Th1/Th2 subpopulation to "Th1"， thereby regulating the Th1/Th2 balance and improving cellular immune response.

〔Keywords〕 Fuke Qianjin Capsule; splenic lymphocytes; proliferation; immunoregulation; Th1/Th2

婦科千金膠囊（FKQ）是中國中藥保護(hù)品種，收載于2015版《中華人民共和國藥典》一部，由千斤拔、金櫻根、穿心蓮、單面針、功勞木、雞血藤、當(dāng)歸、黨參8味中藥材組成，具有清熱除濕、益氣化瘀的功效。常用于濕熱瘀阻所致的帶下病、腹痛，癥見帶下量多、色黃質(zhì)稠、臭穢、小腹疼痛、腰骶酸痛、神疲乏力等，既標(biāo)本兼治，又扶正祛邪，臨床上廣泛用于婦科炎癥，療效甚佳。方中千斤拔祛風(fēng)利濕解毒，金櫻根清熱利濕止帶，二者同為君藥;穿心蓮和功勞木清熱除濕，二者同為苦寒之品，合用使全方清熱解毒之力增強(qiáng);單面針以其辛溫之性，可防穿心蓮、功勞木過于苦寒而傷胃，使全方藥性更趨平和，無傷正氣之虞，三者共為臣藥。當(dāng)歸補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛，雞血藤補(bǔ)血、活血、通絡(luò)，二者合用既能補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，又能暢利血行而加強(qiáng)全方清熱除濕、活血解毒之功能;黨參補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血，與當(dāng)歸、雞血藤合用氣血雙補(bǔ)、扶正固本，使全方融扶正、祛邪為一體，三者共為佐藥。諸藥合用使機(jī)體正氣得以充養(yǎng)，邪氣得以祛除，故諸癥消除。

中醫(yī)學(xué)十分重視人體的正氣，強(qiáng)調(diào)正氣是發(fā)病的主導(dǎo)，認(rèn)為“正氣存內(nèi)，邪不可干;邪之所湊，其氣必虛”。意指當(dāng)人的正氣在內(nèi)，氣血充足的時候，即機(jī)體免疫力正常，“外邪”即致病菌不容易侵犯機(jī)體致病;而當(dāng)人體正氣受損，即免疫功能低下時，致病菌容易乘虛而入發(fā)病。FKQ的治療理念在清除致病菌的同時增強(qiáng)機(jī)體免疫力，后期通過強(qiáng)化自身免疫能力而防治疾病反復(fù)發(fā)作。脾臟作為機(jī)體最大的外周免疫器官，是T、B淋巴細(xì)胞的主要聚集場所，而T、B淋巴細(xì)胞作為機(jī)體免疫活性細(xì)胞，其激活、分化、增殖在免疫應(yīng)答過程中起著重要的作用[1]。關(guān)于FKQ能調(diào)節(jié)由環(huán)磷酰胺引起的小鼠免疫功能障礙及FKQ組分中藥對機(jī)體免疫調(diào)節(jié)研究較多[2-5]，但尚無FKQ對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的免疫增強(qiáng)活性的報道。因此，本實驗以FKQ為研究對象，研究其對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖及免疫調(diào)節(jié)的影響，以期為FKQ提高免疫作用機(jī)制的研究及開發(fā)利用奠定理論依據(jù)。

1 材料

1.1 ?實驗動物

20只健康BALB/c雌性小鼠，體質(zhì)量16～18 g，6～7周齡，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物公司提供，許可證號：SCXK（湘）2019-0004。實驗動物飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，自由飲食飲水，實驗程序由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 ?藥品與試劑

婦科千金膠囊（FKQ）（產(chǎn)品批號20170231，株洲千金藥業(yè)股份有限公司）;CCK8（CA1210，北京索萊寶科技有限公司）;胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）（16000-044，美國gibco公司）;1640培養(yǎng)基（C11875500BT，美國gibco公司）;DMEM高糖培養(yǎng)基（SH30022.01，Hyclone公司）;ConA刀豆蛋白、LPS脂多糖及MTT噻唑蘭（批號分別為C8110、L8880、M8180，北京索萊寶科技有限公司）;Mouse IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10 ELISA Kit（批號為PI508、PI575、PI612、PI522，上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.3 ?儀器

47103離心機(jī)（Eppendorf中國有限公司）;SW-CJ-2FD蘇州凈化超凈工作臺（上海葉拓科技有限公司）、Blender 快速組織細(xì)胞破碎儀（美國 NextAdvance 公司）、Cyto-Flex 流式細(xì)胞儀（美國Beckman公司）。

2 方法

2.1 ?小鼠脾臟細(xì)胞的分離

將小鼠腹腔麻醉后，頸椎脫臼處死，75%酒精將小鼠浸泡15 min;在超凈臺中取出小鼠脾臟，去除筋膜后反復(fù)用PBS沖洗至無血色;將脾臟置于200目細(xì)胞篩上，注射器研磨，用PBS沖洗6次后置于培養(yǎng)皿中;收集細(xì)胞懸液，1 500 r/min離心10 min，棄上清;加入10%紅細(xì)胞裂解液適量，室溫靜置10 min，1 500 r/min離心10 min，棄上清;PBS清洗3遍，1 500 r/min離心10 min，棄上清;加入0.85%NaCl溶液重懸沉淀;密度梯度離心加樣，1 800～2 000 r/min離心40 min;收集目標(biāo)分層，PBS清洗3遍;RPMI-1640完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為1×108，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中37 ℃、5%CO2孵育3 h，去除貼壁細(xì)胞，收集懸浮細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。

2.2 ?CCK8法檢測FKQ對脾淋巴細(xì)胞的增殖作用

將FKQ設(shè)置成10、20、30、40、50 μg/mL，不同藥物濃度孵育小鼠脾淋巴細(xì)胞24 h、48 h和72 h。將處理完成的細(xì)胞制備細(xì)胞懸液，將1×104的細(xì)胞數(shù)接種到96孔板中，每孔約100 μL細(xì)胞懸液，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔，培養(yǎng)12 h使其貼壁。每孔加入10 μLCCK8繼續(xù)培養(yǎng)1 h后，用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度，吸光度值與細(xì)胞的增殖能力成正比。

2.3 ?MTT法檢測FKQ對ConA誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

細(xì)胞分離、接種方法同前，參考文獻(xiàn)[6]，本實驗分為空白組，模型組（ConA，5 μg/mL），F(xiàn)KQ組：不同濃度的FKQ（10、30、50 μg/mL）分別干預(yù)ConA誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞。于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中作用24 h、48 h和72 h，MTT法檢測FKQ對ConA誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖功能，測定方法同CCK8法。

2.4 ?MTT法檢測FKQ對LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖的影響

細(xì)胞分離、接種方法同前，參考文獻(xiàn)[7]，本實驗分為空白組，LPS組（LPS，10 μg/mL），F(xiàn)KQ組：不同濃度的FKQ（10、30、50 μg/mL）分別干預(yù)LPS誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞。于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中作用24 h、48 h和72 h，MTT法檢測LPS誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖功能。

2.5 ?流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+亞群的變化

將脾淋巴細(xì)胞（1×108）加入24孔板，設(shè)空白組、ConA組（ConA，5 μg/mL）和FKQ組：不同濃度的FKQ（10、30、50 μg/mL）分別干預(yù)ConA誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞。每組均有3個復(fù)孔，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，孵育48 h，離心收集細(xì)胞，磷酸鹽緩沖溶液清洗，然后使用小鼠單克隆抗體CD4+-FITC或者CD8+-FITC孵育后磷酸鹽緩沖溶液清洗，流式檢測CD4+和CD8+的百分比。

2.6 ?ELISA法檢測細(xì)胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的含量

將脾淋巴細(xì)胞（1×108）加入96孔板，設(shè)空白組（不做任何刺激）、ConA組（ConA刺激）、LPS組（LPS刺激）和FKQ組：不同濃度的FKQ（10、30和50 μg/mL）分別干預(yù)ConA誘導(dǎo)脾T淋巴細(xì)胞和LPS誘導(dǎo)脾B淋巴細(xì)胞，每組均有3個復(fù)孔，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中，孵育48 h，收集細(xì)胞上清，2 000 r/min室溫離心5 min，取上清，按說明書操作，經(jīng)酶標(biāo)儀測定OD值。

2.7 ?統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件整理數(shù)據(jù)，計量資料以“x±s”表示，當(dāng)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時，多組間比較使用單因素方差齊性分析（One-way ANOVA），當(dāng)P<0.05時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 ?FKQ對脾淋巴細(xì)胞的增殖作用

對小鼠脾淋巴細(xì)胞分別孵育24 h、48 h和72 h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)細(xì)胞孵育24 h，濃度為10、20 μg/mL的FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖無差異（P>0.05）;濃度在30、40、50 μg/mL時對細(xì)胞增殖有著顯著的促進(jìn)作用（P<0.01）。當(dāng)孵育細(xì)胞48 h，與濃度為10 μg/mL的FKQ相比，濃度在20、30、40、50 μg/mL時能明顯增加脾淋巴細(xì)胞增殖（P<0.01），且隨著劑量的增加其增殖作用越明顯。細(xì)胞孵育72 h后，30 μg/mL的FKQ對細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用（P<0.05）;40、50 μg/mL的FKQ對細(xì)胞增殖促進(jìn)作用更為明顯（P<0.01）。其他濃度組的細(xì)胞存活率無顯著性差異，說明各濃度組藥物對細(xì)胞無明顯毒性。與培養(yǎng)24 h相比，F(xiàn)KQ濃度為10、30、50 μg/mL時，培養(yǎng)48 h與72 h，對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖無影響（P>0.05）;FKQ濃度為20、40 μg/mL時，培養(yǎng)48 h時能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖（P<0.01）。見表1。

3.2 ?FKQ對ConA誘導(dǎo)脾T淋巴細(xì)胞增殖的影響

由表2可知，與ConA組相比，10～50 μg/mL的FKQ對T淋巴細(xì)胞的增殖具有顯著性差異（P<0.01），有顯著的量效關(guān)系，但只在24 h時劑量依賴性最明顯;細(xì)胞孵育48 h及72 h時，F(xiàn)KQ濃度在10 μg/mL和30 μg/mL時對細(xì)胞增殖作用差異較小，而當(dāng)其濃度達(dá)到50 μg/mL時，其差異變化較大。

3.3 ?FKQ對LPS誘導(dǎo)脾B淋巴細(xì)胞增殖的影響

由表3可知，LPS在不同的孵育時間對B淋巴細(xì)胞都有明顯增殖促進(jìn)作用;10～50 μg/mL的FKQ對B淋巴細(xì)胞的增殖存在明顯差異（P<0.05，P<0.01），在細(xì)胞孵育24 h及72 h時劑量依賴性最明顯;當(dāng)細(xì)胞孵育24 h及72 h時，F(xiàn)KQ濃度在10 μg/mL和30 μg/mL時對細(xì)胞增殖作用差異較小，而當(dāng)其濃度達(dá)到50 μg/mL時，其差異變化較大。當(dāng)細(xì)胞孵育48 h時，F(xiàn)KQ濃度在10 μg/mL和30 μg/mL時對細(xì)胞增殖作用差異最大，濃度在50 μg/mL時，其差異最小。

3.4 ?FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+和CD8+亞群的影響

如圖1所示，與對照組相比，在ConA的刺激下，CD4+ T細(xì)胞比例顯著升高（P<0.01），而隨著FKQ的濃度升高CD4+ T細(xì)胞的比例出現(xiàn)增加的趨勢，但低濃度FKQ與ConA協(xié)同效果不明顯，而當(dāng)FKQ達(dá)到中、高濃度時開始與ConA產(chǎn)生協(xié)同作用（P<0.01）;經(jīng)ConA刺激后CD8+ T細(xì)胞比例降低;中、高濃度FKQ協(xié)同ConA能顯著升高CD4+/CD8+比值，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能（P<0.01）。說明中、高濃度的FKQ與ConA能產(chǎn)生協(xié)同作用，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡。

3.5 ?FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞INF-γ、IL-2、IL-4及IL-10表達(dá)的影響

表4結(jié)果顯示，與空白組相比，單用ConA和LPS刺激均能顯著增加IFN-γ、IL-2的含量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01，P<0.05）;與單用ConA及LPS刺激相比，ConA協(xié)同50 μg/mL FKQ能促進(jìn)IL-2的表達(dá)，LPS協(xié)同不同濃度的FKQ對IFN-γ、IL-2的表達(dá)均有顯著促進(jìn)作用（P<0.01），同時結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空白組相比，ConA及LPS的刺激顯著降低了細(xì)胞中IL-4的表達(dá)（P<0.01，P<0.05），而增加IL-10的表達(dá)（P<0.01）。與單用ConA及LPS刺激相比，F(xiàn)KQ協(xié)同ConA、LPS刺激均能降低IL-4、IL-10的表達(dá)，尤以中、高濃度最為顯著（P<0.01）。

4 討論

ConA是一種T淋巴細(xì)胞有絲分裂原，可刺激靜止的T淋巴細(xì)胞增殖活化;LPS是一種非胸腺依賴性抗原，可刺激B淋巴細(xì)胞增殖[8]。脾淋巴細(xì)胞中所含的T淋巴細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞的增殖是機(jī)體細(xì)胞免疫最直接的反饋[9]。在本研究中，我們分離、培養(yǎng)正常小鼠脾淋巴細(xì)胞，采用ConA及LPS誘導(dǎo)刺激后，將不同濃度的FKQ進(jìn)行協(xié)同干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度的FKQ對小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖有著顯著的促進(jìn)作用，而且無毒性。這表明FKQ可直接作用于免疫細(xì)胞，促進(jìn)機(jī)體免疫細(xì)胞的活化、增殖功能，提高機(jī)體的免疫力。

外周成熟的T細(xì)胞只表達(dá)CD4+ T細(xì)胞和CD8+ T細(xì)胞，初始CD4+ T細(xì)胞接受抗原刺激后，在不同條件下分化成Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞。Th1主要分泌INF-γ、IL-2，INF-γ具有多種生物活性，能增強(qiáng)Th1細(xì)胞活性和細(xì)胞免疫功能[10];IL-2能促進(jìn)T細(xì)胞分化、增殖，促進(jìn)細(xì)胞毒T細(xì)胞的殺傷作用，增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，其分泌水平的高低代表著機(jī)體的免疫能力高低[11]。Th2主要分泌IL-4、IL-10等細(xì)胞因子，IL-4可促進(jìn)活化的B細(xì)胞和T細(xì)胞增殖，是體液免疫和獲得性免疫的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。IL-10能抑制Th1細(xì)胞產(chǎn)生IL-2和IFN-γ，阻礙Th1免疫應(yīng)答[12]。

由于Th1和Th2細(xì)胞都能分泌細(xì)胞因子促進(jìn)自身的增殖并抑制對方的增殖，因此，正常情況下機(jī)體中Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞處于平衡狀態(tài)。而Th1和Th2的失衡與許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)。如王依靜等[13]研究發(fā)現(xiàn)盆腔炎患者血清IL-2及CD4+低于健康同齡婦女，而血清IL-4、IL-10及CD8+均高于健康者，且急性盆腔炎患者Th1/Th2的變化明顯大于慢性盆腔炎者，同時越嚴(yán)重的盆腔炎其變化越大。這與王娜研究提示慢性盆腔炎患者血清Th2細(xì)胞表達(dá)（血清IL-6的含量）比Th1細(xì)胞表達(dá)（血清IL-2含量）具有顯著優(yōu)勢，即Th1/Th2平衡向Th2“漂移”，導(dǎo)致免疫功能失調(diào)結(jié)果一致[14]。伍麗芳[15]臨床發(fā)現(xiàn)FKQ可以顯著升高子宮內(nèi)膜炎患者血清IL-2、IL-10的表達(dá)，而陳小寒發(fā)現(xiàn)其能明顯降低血清IL-4的水平，增加其抗炎活性，提高免疫應(yīng)答[16]。而在本研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)KQ能明顯增加淋巴細(xì)胞上清中IFN-γ、IL-2的表達(dá)，降低IL-4及IL-10的表達(dá)，與伍麗芳研究結(jié)果相反。在炎癥后期，可檢測到血清IL-10的水平升高，高表達(dá)IL-10可負(fù)反饋激活Th2細(xì)胞，促進(jìn)炎癥后期纖維化的發(fā)展[17]。而在炎癥早期，致病菌的感染，使促炎性因子升高，開始介導(dǎo)炎性反應(yīng)，致炎因子和抗炎因子之間平衡被打破;而在炎癥發(fā)展過程中，抗炎因子開始逐漸上升，當(dāng)炎癥發(fā)展到后期，促炎性因子表達(dá)被抑制，而抗炎因子反應(yīng)增強(qiáng)，Th2細(xì)胞占主導(dǎo)作用，導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制。因而，本研究結(jié)果提示FKQ能降低細(xì)胞上清IL-10的表達(dá)，與臨床上FKQ應(yīng)用于炎癥后期、慢性后遺癥期一致。在炎癥后期，F(xiàn)KQ通過降低IL-10的釋放使Th1/Th2亞群向“Th1漂移”，抑制Th2的優(yōu)勢表達(dá)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，提高細(xì)胞免疫應(yīng)答。這與王依靜研究的盆腔炎發(fā)病的免疫機(jī)制及FKQ對慢性盆腔炎癥的免疫調(diào)節(jié)作用一致。

本研究結(jié)果表明FKQ可有效促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的脾T淋巴細(xì)胞增殖及LPS誘導(dǎo)的B淋巴細(xì)胞增殖，增加CD4+比例，降低CD8+比例，升高CD4+/CD8+比值，提高機(jī)體免疫力。此外，F(xiàn)KQ能減少淋巴細(xì)胞向Th2型分化，促使Th1/Th2亞群向“Th1漂移”，抑制Th2的優(yōu)勢表達(dá)，調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，提高細(xì)胞免疫應(yīng)答。本實驗不足之處在于未明確FKQ中何種成分發(fā)揮主要免疫調(diào)節(jié)作用，未對FKQ調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的作用機(jī)制進(jìn)行探究，本課題組將在后續(xù)實驗中對不足之處進(jìn)行完善。

參考文獻(xiàn)

[1] YOO J H， LEE Y S， KU S， et al. Phellinus baumii enhances the immune response in cyclophosphamide-induced immunosuppressed mice[J]. Nutrition Research， 2020， 75： 15-31.

[2] 田 ?洪，潘善慶，左之文.婦科千金膠囊抗炎免疫作用的實驗研究[J]. 湖南中醫(yī)雜志，2000，16（5）：58-60.

[3] 郝艷艷，聶春霞，武曉偉，等.黨參多糖及其結(jié)構(gòu)改性對免疫調(diào)節(jié)作用影響的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2018，15（28）：25-28.

[4] 安方玉，劉永琦，駱亞莉，等.當(dāng)歸不同有效部位對高原低氧模型小鼠免疫功能的影響[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2015，22（2）：51-54.

[5] 楊冉冉，劉 ?新，姬 ?蕾，等.雞血藤質(zhì)量控制及藥理作用研究進(jìn)展[J].環(huán)球中醫(yī)藥，2018，11（11）：1833-1838.

[6] 陳楊揚(yáng)，劉坤娜，李云姣，等.副干酪乳桿菌VL8胞外多糖協(xié)同ConA對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子分泌的影響[J].食品工業(yè)科技，2017，38（15）：302-305，310.

[7] 魏曉露，楊 ?健，王宏潔，等.華蟾素蟾毒配基對小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2016，32（6）：92-97.

[8] WANG X F， ZHU Z D， HAO T T， et al. Alopecines A–E， five chloro-containing matrine-type alkaloids with immunosuppressive activities from the seeds of Sophora alopecuroides[J]. Bioorganic Chemistry， 2020， 99： 103812.

[9] FAN P， HAN B， HU H， et al. Proteome of Thymus and spleen reveals that 10-hydroxydec-2-enoic acid could enhance immunity in mice[J]. Expert Opinion on Therapeutic Targets， 2020， 24（3）： 267-279.

[10] 張 ?娜，毛 ?迪，安柏松，等.刺五加多糖對免疫性肝損傷BALB/c小鼠IL-2、IL-4、INF-γ細(xì)胞因子及mRNA表達(dá)的影響[J].藥物評價研究，2018，41（4）：557-561.

[11] MITRA S， LEONARD W J. Biology of IL-2 and its therapeutic modulation： Mechanisms and strategies[J]. Journal of Leukocyte Biology， 2018， 103（4）： 643-655.

[12] MITCHELL R E， HASSAN M， BURTON B R， et al. IL-4 enhances IL-10 production in Th1 cells： Implications for Th1 and Th2 regulation[J]. Scientific Reports， 2017， 7： 11315.

[13] 王依靜，張碧黎.盆腔炎患者血清Th1/Th2及外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化研究[J].中國婦幼保健，2016，31（23）：5008-5009.

[14] 王 ?娜.盆炎湯對慢性盆腔炎濕熱型患者血清Th1/Th2的影響[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2015，39（6）：531-532.

[15] 伍麗芳.婦科千金膠囊聯(lián)合抗生素治療子宮內(nèi)膜炎對血清IL-2、IL-10水平的影響[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)，2017，8（24）：64-65.

[16] 陳小寒.抗生素聯(lián)合婦科千金片治療子宮內(nèi)膜炎的臨床效果[J]. 中國民康醫(yī)學(xué)，2017，29（17）：82-83.

[17] ROJAS J M， AVIA M， MARTíN V， et al. IL-10： A multifunctional cytokine in viral infections[J]. Journal of Immunology Research， 2017， 2017： 6104054.