湖北貝母石油醚段化學(xué)成分研究

李宇 彭湘敏 張娜 劉丹 冉亞蘭 趙仁君 何美軍

摘 要：探究湖北貝母石油醚段的化學(xué)成分。本文將湖北貝母經(jīng)60%乙醇超聲提取獲得總浸膏，再采用石油醚萃取獲得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等對(duì)湖北貝母石油醚段的成分進(jìn)行了探索。結(jié)果表明，石油醚段經(jīng)硅膠柱色譜及半制備高效液相分離到2個(gè)化合物，利用1D和2D NMR波譜數(shù)據(jù)分析，鑒定其結(jié)構(gòu)分別為beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。該研究可為湖北貝母藥材的開發(fā)利用、臨床使用提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：湖北貝母;抗菌活性;石油醚段;化合物

中圖分類號(hào)：S-3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20201115002

收稿日期：2020-09-22

基金項(xiàng)目：湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所2019年青年科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2019ZYCJJ05）

作者簡(jiǎn)介：李宇（1990-），男，碩士，助理研究員。研究方向：中藥材天然產(chǎn)物;通訊作者何美軍，副研究員。研究方向：中藥材天然產(chǎn)物。

湖北貝母為百合科植物湖北貝母（Fritillariahupehensis Hsiao et K.C.Hsia）的干燥鱗莖，原野生于湖北省恩施自治州，俗稱“板貝”或“窯貝”，民間習(xí)作川貝藥用，使用歷史悠久[1]。湖北貝母在主產(chǎn)地恩施自治州利川市和恩施市至少有150a以上的種植歷史，以前又稱板貝、窖貝、奉貝，臨床上一直作川貝使用[2]。中藥貝母始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是中醫(yī)臨床應(yīng)用最為廣泛的止咳祛痰藥之一[3]。湖北貝母具有清熱化痰、止咳、散結(jié)的功效，傳統(tǒng)用于治療熱痰咳嗽、瘰疬痰核、癰腫瘡毒[4]?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，湖北貝母具有鎮(zhèn)咳平喘[5]、抗炎[6]、抗癌[7]、抗腫瘤[8]等作用。貝母中的活性成分主要有生物堿、揮發(fā)油等，目前，絕大多數(shù)文獻(xiàn)是對(duì)貝母生物堿化學(xué)成分及藥理作用等方面，其它成分的相關(guān)研究比較少見[9]。

湖北貝母是湖北恩施重要的藥材之一，因此研究湖北貝母石油醚段化學(xué)成分以及其含量具有重要意義。該研究可為湖北貝母藥材的開發(fā)利用、臨床使用提供理論依據(jù)，也為湖北貝母向外更好發(fā)展打下基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1?材料與試劑

J&K色譜純乙腈。本研究所用湖北貝母樣品采集于湖北省恩施市的人工種植品，經(jīng)湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所由金文高級(jí)農(nóng)藝師鑒定為湖北貝母鱗莖。

1.2?儀器與設(shè)備

Bruker maXis高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜儀;Aglient Technologies 7890A/5975C GC-MS聯(lián)用儀;Agilent 1260高效液相色譜儀（配DAD檢測(cè)器）;Phenomenex色譜柱（50mm×4.6mm， ODS 5μm）;Agilent Poroshell反相色譜柱120 EC-C18（4.6mm×150mm，4μm）;HS-GF254硅膠薄層板。

1.3?方法

將干燥的湖北貝母鱗莖20kg，粉碎，過40目篩，共用40L的60%的乙醇萃取，采用60%乙醇100L冷浸提取96h，過濾，減壓濃縮回收乙醇，得到浸膏800.27g。再加3倍體積的石油醚萃取3次，合并石油醚相，減壓回收石油醚，得到貝母石油醚段浸膏80.2g。

貝母石油醚段浸膏采用硅藻土拌樣，硅膠柱層析（Φ10cm×50cm）分離，以石油醚/乙酸乙酯體系（100：0、80：20、50：50、20：80、0：100，V/V）洗脫，得到8個(gè)組分Fr.A1～Fr.A8。根據(jù)HPLC和TLC分析結(jié)果，將Fr.A4～Fr.A6合并正向硅膠分離，以石油醚/氯仿體系（100：0、98：2、96：4、94：6、92：8、90：10、80：20，V/V））洗脫，得到10個(gè)組分Fr.B1～Fr.B10。根據(jù)HPLC分析，經(jīng)半制備HPLC、ODS色譜柱（250mm×10mm，5μm），組分Fr.B6～Fr.B7合并，經(jīng)半制備HPLC、ODS色譜柱分離，以CH3CN/H2O（85：15，V/V）體系洗脫30min，流速為2.5mL·min-1，得到化合物2（tR24.5min，10mg）。組分Fr.B8走凝膠柱，以乙腈洗脫，得到化合物1。

2?結(jié)果與分析

2.1?湖北貝母石油醚段化合物分離鑒定

2.1.1?化合物1

為白色無定型晶體，化合物1在UV（190～450nm）及可見光波段無吸收。1H NMR譜表明該化合物存在共軛雙鍵質(zhì)子（δH5.32）。通過HRMS-ESI質(zhì)譜檢測(cè)，其[M+K]+=453.3560，推測(cè)其分子式為C29H50O。1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.32（1H，d，J=5.0Hz，H-5）3.50（1H，ddd，J=15.4，10.6，4.4Hz，H-3），1.02（3H，dd，J=18.9，9.7Hz，H-19），0.94-0.85（12H，m，H-19/26/27/29）;13C NMR（CDCl3，101 MHz）δ140.8（C-5），121.7（C-6），71.8（C-3），56.8（C-14），56.1（C-17），50.1（C-9），45.8（C-24），42.3（C-4），42.3（C-13），39.8（C-12），37.3（C-1），36.5（C-10），36.2（C-20），34.0（C-22），31.9（C-7），31.7（C-8），29.2（C-25），28.3（C-16），26.1（C-23），24.3（C-15），23.1（C-28），21.1（C-26），19.8（C-19），19.4（C-27），19.1（C-21），12.0（C-29），11.9（C-18）?；衔?的1H和13C NMR化學(xué)位移值與文獻(xiàn)報(bào)道的beta-Sitosterol的核磁數(shù)據(jù)基本一致，推斷該化合物為beta-Sitosterol[10]。

2.1.2?化合物2

為白色無定型晶體，化合物2的UV吸收光譜在340nm波長(zhǎng)處顯示有最大吸收波長(zhǎng)。高分辨質(zhì)譜HRMS-ESI[2 M-H]-為441.1559，推測(cè)分子式為C12H14O4。HNMR（400MHz MeOD）7.59（1H，d，J=15.9Hz，H-8），7.16（1H，s，H-7），7.05（1H，d，J=7.1Hz，H-5），6.79（d，J=7.8Hz，1H，H-6），6.32（d，J=15.8Hz，1H，H-9），4.22（2H，dd，J=14.1，7.0Hz，H-10），3.88（s，3H，H-1），3.31（s，1H，），1.31（t，J=7.1Hz，4H，H-12）;13C NMR（101MHz，MeOD）δC：168.01（C-10），150.19（C-2），148.24（C-3），145.37（C-8），122.85（C-5），115.28（C-4），113.81（C-7），110.18（C-9），60.01（C-11），55.01（C-1），13.26（C-12）。化合物2的1H和13C NMR化學(xué)位移值與文獻(xiàn)報(bào)道的ethyl ferulate核磁數(shù)據(jù)基本一致，推斷該化合物為ethyl ferulate[11]。

3?結(jié)論

由于湖北貝母石油醚段有抗菌活性，本研究進(jìn)而對(duì)湖北貝母石油醚段的成分進(jìn)行了探索，石油醚段經(jīng)硅膠柱色譜及半制備高效液相分離到2種化合物，利用1D和2D NMR波譜數(shù)據(jù)分析，鑒定其結(jié)構(gòu)分別為beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。beta-Sitosterol是植物甾醇類成分之一，存在于某些植物或種子中，具有降血脂、抗癌、抗炎癥等作用，可作為苦檀子質(zhì)量控制的指標(biāo)[12]。β-谷甾醇-硬脂酸油脂凝膠和凝膠乳液對(duì)β-胡蘿卜素具有增強(qiáng)緩釋效應(yīng)[13]。beta-Sitosterol可保護(hù)大鼠心肌缺血再灌注損傷，可能參與ERK1/2信號(hào)通路，緩解心肌缺血再灌注大鼠出現(xiàn)的氧化應(yīng)激和炎癥損傷，并抑制其心肌細(xì)胞的凋亡[14]。ethyl ferulate能有效抑制SGC-7901細(xì)胞增殖，并能誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡[15]。近年來，ethyl ferulate逐漸進(jìn)入人們的視野，以其為主要物質(zhì)的醫(yī)療藥物、功能性食品等如雨后春筍般誕生，其良好的清除自由基、抗菌消除炎癥、預(yù)防腫瘤、降血脂等特性深受人們喜愛和關(guān)注，因而使其具有了良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[16]。

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（責(zé)任編輯?李媛媛）