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    大型真菌標(biāo)本制作方法簡述

    2020-12-15 18:01:02徐關(guān)林陳光富
    園藝與種苗 2020年5期
    關(guān)鍵詞:冰醋酸菌類制作方法

    徐關(guān)林,陳光富

    (麗江師范高等??茖W(xué)校應(yīng)用技術(shù)學(xué)院,云南麗江674199)

    在自然界中,大型真菌是生物多樣性的重要組成部分,其種類多、分布廣,從用途上可簡單分為食用菌、藥用菌、毒菌3 類。我國對大型真菌的利用歷史悠久,《唐本草注》、《菌譜》和《本草綱目》等文獻(xiàn)資料中就有對大型真菌利用的早期記載[1-2]。大型真菌標(biāo)本是菌類研究[3]、生物教學(xué)、科普宣傳等方面的重要憑證和展示材料,因此能否制成一份優(yōu)良的標(biāo)本對教學(xué)效果、鑒定結(jié)果和研究結(jié)論會產(chǎn)生一定影響。大型真菌標(biāo)本主要包括浸制標(biāo)本、干制標(biāo)本、外形和剖面標(biāo)本及孢子印制取等4 類[4-5],選取方法需根據(jù)真菌類型、標(biāo)本用途決定,其間的差異主要體現(xiàn)在藥品選擇、制作工序、處理時間等方面。該文對文獻(xiàn)記錄進(jìn)行梳理總結(jié),歸納大型真菌標(biāo)本制作的常用方法,以期為教學(xué)、科研和標(biāo)本管理提供基礎(chǔ)參考。

    1 浸制標(biāo)本制作

    大型真菌浸制標(biāo)本,因可以保持原有形態(tài)特征,便于鑒定,因此在教學(xué)活動和科普教育中常作為重要展示材料,該方法主要應(yīng)用于肉質(zhì)化明顯的真菌。標(biāo)本制作時一般先配制好保存液直接保存或用固定液預(yù)處理,具體步驟包括:①將子實(shí)體清洗干凈后放入透明標(biāo)本瓶中,然后將事先制備好的保存液倒入;②如果標(biāo)本會浮起還需栓上玻璃片或玻璃棒,要確保標(biāo)本浸泡在保存液中;③密封瓶口后避光放置;④標(biāo)本瓶上貼采集及鑒定標(biāo)簽,然后入庫保存。保存液通常用酒精(70%)和福爾馬林按50∶3或200∶1 的比例,或用甲醛、酒精(80%)按3∶7 的比例,或甲醛10 mL、硫酸鋅25 g、蒸餾水1000 mL 的比例配制而成[4,6-9]。

    浸制標(biāo)本會因長期浸泡而使保存液變渾濁,甚至讓標(biāo)本褪色,因而需頻繁更換保存液。程地林等[17]以竹蓀為試驗(yàn)材料對保存液進(jìn)行改良研究,結(jié)果顯示以甲醛(37%~40%)∶蒸餾水∶無水二氯化鈣(10%)=1∶8∶1 比例配制的保存液保存標(biāo)本8 年,未見標(biāo)本褪色、保存液渾濁等現(xiàn)象,從而提升保存效果和降低藥品的使用量,降低成本。牛寶清通過研究比較NaCl、EDTA、甲醛、酒精、CTAB等試劑對真菌組織塊的保存效果,認(rèn)為無水乙醇(100%)的綜合保存效果最優(yōu)[10],但由于酒精會引起組織收縮和硬化,而冰醋酸會使組織輕微膨脹,因此,有學(xué)者在制作浸制標(biāo)本時會在保存液中添加一定比例的冰醋酸,用以提升保存效果[11]。

    浸制標(biāo)本相對于干制標(biāo)本具有明顯優(yōu)勢,比如制作過程節(jié)省時間、可以保持子實(shí)體原有形態(tài)等,從而便于教學(xué)與鑒定[9]。但也存在一定缺陷,比如需浸泡在標(biāo)本缸內(nèi),這無疑增大了保存空間,且不便于隨時攜帶。如想獲得色澤更佳的標(biāo)本,則需根據(jù)菌類顏色深淺而配制試劑,且深顏色菌類還要根據(jù)其色素是否溶于水再選擇合適的制作方法。

    1.1 白色或淺色類大型真菌標(biāo)本制作

    對白色或淺黃等淺顏色的大型真菌,通常用甲醛(5%)、酒精(70%)或兩者的混合液進(jìn)行浸泡,也有學(xué)者按硫酸鋅25 g、福爾馬林10 mL、水1000 mL 的比例或硫酸鋅2.5 g、甲醛l0 mL、水1000 mL 和甲醛∶酒精(50%)∶水=1∶6∶40 的比例配制浸泡液[5,12-13]。楊琴等[14]以金針菇、雞腿菇、平菇、香菇等食用菌為研究對象進(jìn)行研究,結(jié)果顯示以上菌類更加適合先固定后保存的處理方式,且需根據(jù)子實(shí)體的性質(zhì)適當(dāng)調(diào)整保存液配制比例,浸制效果較好,比如金針菇按甲醛∶酒精(50%)∶冰醋酸=2∶17∶1 的比例,雞腿菇按甲醛∶酒精(70%)∶冰醋酸=9∶182∶9 的比例;平菇按甲醛∶冰醋酸∶氯化鉀水溶液(10%)∶蒸餾水=2∶1∶2∶15 的比例配制。

    1.2 深色類大型真菌標(biāo)本制作

    深色大型真菌,在制作浸制標(biāo)本時常用藥品主要包括醋酸汞、冰醋酸、酒精、硫酸銅、無水亞硫酸鈉、濃硫酸等[12]。在制作深色大型真菌標(biāo)本時應(yīng)該著重考慮子實(shí)體所含色素是否溶于水,再選擇合適的藥品配制保存液。

    (1)色素溶于水,易導(dǎo)致子實(shí)體褪色,在處理這一類子實(shí)體時要選擇可防止色素溶于水的藥品。保存液通常按1 g 醋酸汞∶1000 mL 乙醇(90%)∶10 g 中性醋酸鉛∶10 mL 冰醋酸的比例或用1 g 醋酸汞∶990 mL 乙醇(90%)∶10 g 中性醋酸鉛∶10 mL 冰醋酸的比例進(jìn)行配制[5,13,15]

    (2)色素不溶于水,一般先用固定液預(yù)處理,其后用保存液保存。固定液參考福爾馬林(40%)∶蒸餾水= 1∶7 的比例配制,固定液預(yù)處理1 h,用保存液換洗2~3 次后浸泡至保存液中保存[16]。有學(xué)者提出將子實(shí)體直接浸泡至保存液中,保存液參照冰醋酸10 mL∶醋酸汞10 g∶蒸餾水1000 mL 或冰醋酸5 mL∶升汞10 g∶蒸餾水1000 mL 的比例配制[5,13]。

    2 干制標(biāo)本制作

    大型真菌干制標(biāo)本是指通過加熱或冷凍等方式,使子實(shí)體脫水而制成的標(biāo)本。因子實(shí)體脫水,標(biāo)本會發(fā)生變形,失去原有形態(tài)不好鑒定,這給教學(xué)展示、分類鑒定等帶來很大弊端,但干制標(biāo)本在制作方法上相對浸制標(biāo)本具有更簡單和方便攜帶,所需保存空間小等優(yōu)勢。子實(shí)體呈革質(zhì)、栓質(zhì)類的大型真菌一般制成干制標(biāo)本,肉質(zhì)化類大型真菌根據(jù)需要也可制成干制標(biāo)本。

    2.1 烘干制作方法

    干制標(biāo)本可直接采取日曬、風(fēng)干、火烘烤、紅外燈照射、硅膠吸水干燥、恒溫干燥箱烘干等方法制作[5,13],李亞平等提出先將大型真菌曬干后用清水浸泡,將清水瀝干后放置在60℃的恒溫箱內(nèi)烘烤48 h 的方法,標(biāo)本未出現(xiàn)霉?fàn)€和蟲蛀等情況[18]。使用火烘烤時需注意保持標(biāo)本與火焰的距離和烘烤時間,或?qū)⒆訉?shí)體放在鐵皮、瓦片等隔熱板上烘烤,以避免直接接觸火焰烤焦標(biāo)本[6]。硅膠吸收子實(shí)體內(nèi)水分后,會由原本的藍(lán)色變成粉紅色,曬干后便可重復(fù)使用,因此為確保標(biāo)本充分干燥,需要持續(xù)更換硅膠直至硅膠不再變色為止[8-9,12,15]。采用恒溫箱烘干,如果是革質(zhì)或木質(zhì)化類大型真菌直接設(shè)置在105℃下烘干[9],如果是其他類型菌類,先將子實(shí)體縱向剖開,在50~60℃下烘烤6~8 h,然后通風(fēng)回潮20~30 min[7,19]。干制標(biāo)本制作完成后要放入標(biāo)本盒或標(biāo)本袋內(nèi),貼上標(biāo)簽,同時放入樟腦等防腐劑,若是貯存的地方比較濕潤,還要放入一些干燥劑。

    2.2 冷凍干燥制作方法

    冷凍干燥的方法亦可制作干制標(biāo)本,并且效果較好。羅國濤[20]通過對電熱烘箱、標(biāo)本夾壓制、電冰箱冷凍3 種干制法的對比研究,結(jié)果顯示,通過電冰箱冷凍干制法得到的標(biāo)本效果最佳,且操作方法簡易。主要步驟包括:①將子實(shí)體清洗干凈后放入冰箱的冷凍層;②將其溫度調(diào)到最強(qiáng)檔,注意標(biāo)本不能被凍結(jié);③持續(xù)冷凍7~10 d 便可獲得冷凍干制標(biāo)本。陳淑榮和欒玲玲[15]在冷凍干燥的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn),對清洗干凈的新鮮標(biāo)本進(jìn)行冷凍干燥,其后將其浸泡在聚氨基甲酸乙酯的酒精液中,處理后又將其放入干燥箱內(nèi)進(jìn)行恒溫烘干。該方法使得子實(shí)體表面產(chǎn)生了一層保護(hù)層,更利于保存。

    因干制標(biāo)本易變形,針對如何確保干制標(biāo)本完整性和色澤保持等問題,李朋員等[21-22]開展相關(guān)研究,采用自制處理液對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理后晾干,從而使子實(shí)體保持原有形態(tài)和顏色。具體步驟包括:①往40℃的水浴鍋內(nèi)加入600 mL 甲醛溶液,待其溫度回升到40℃時,取400 g的尿素分多次倒入并不斷攪拌,徹底溶解后備用;②用25%(2 h)、50%(2 h)和100%(12 h)等不同濃度梯度處理液對大型真菌進(jìn)行浸泡;③將100%濃度的處理液注射入菌體內(nèi);④用竹簽將子實(shí)體整形固定后晾干;⑤將用20%聚乙烯吡咯烷酮K-30 和80%酒精配制而成的處理液均勻涂抹至晾干的菌體表面;⑥再將菌體放至恒溫箱烤干后,放入透明玻璃標(biāo)本展示瓶。

    3 外形和剖面標(biāo)本制作

    此種方法主要適用于肉質(zhì)化較為明顯的大型真菌。制作步驟包括:①將動物膠原(15%)均勻涂抹在加厚白紙上,自然干燥備用;②先將子實(shí)體從下到上縱向剖開;③選擇將其中一半子實(shí)體的菌柄和菌蓋內(nèi)菌肉去除,另一半繼續(xù)縱切成薄片,要求切成的薄片能充分展示該菌的特征;④將去除菌肉的子實(shí)體、切片粘貼在白紙上,讓材料平整并能展示真菌的外形和剖面特征;⑤在標(biāo)本上覆蓋多層紗布進(jìn)行壓制,干燥后連同白紙粘貼在臺紙上并填寫標(biāo)簽[4-5]。

    4 孢子印制取方法

    不同大型真菌的孢子形態(tài)、顏色、分布密度等方面均有差異,因此采集的菌類常制取孢子印標(biāo)本進(jìn)行分類鑒定,這種方法主要應(yīng)用于傘菌類鑒定。制作步驟包括:①選取不同對比色的硬卡紙,然后平鋪在試驗(yàn)桌面上;②將已經(jīng)切除菌柄的菌蓋菌褶向下平鋪在硬卡紙上,或用鐵絲制作簡易的支撐圓環(huán)置于菌蓋下面;③在菌蓋上面罩上培養(yǎng)皿或燒杯使制取空間密封,靜置數(shù)小時后取下容器和菌蓋進(jìn)行觀察,具體的靜置時間根據(jù)不同真菌適當(dāng)調(diào)整;④為使孢子能夠長期保存在硬卡紙上不脫落,需涂上白乳膠、膠水或新雞蛋清提取液等,同時粘貼采集標(biāo)簽和填寫采集信息,過塑后保存[4,5,8,13,15,23]。

    5 展望

    在選擇制作方法時應(yīng)充分考慮制作環(huán)境、菌類性質(zhì)、數(shù)量以及標(biāo)本用途等因素,經(jīng)多次試驗(yàn)后再進(jìn)行選擇。如有條件,可同時制備幾類標(biāo)本進(jìn)行保存,這樣可以彌補(bǔ)各自存在的缺點(diǎn)。隨著科技水平發(fā)展和對大型真菌研究的不斷深入,在教學(xué)和研究工作中應(yīng)不斷結(jié)合最新研究方法,提高物種鑒定的精準(zhǔn)性和保存效果,比如利用分子生物學(xué)方法開展ITS 序列分析鑒定,提升大型真菌野外實(shí)踐的教學(xué)效果等[24]。同時,標(biāo)本制作方法也應(yīng)不斷革新,應(yīng)該積極融入數(shù)字化手段,比如引用3D 建模技術(shù)等來建立數(shù)字化標(biāo)本,配合實(shí)物標(biāo)本開展教育教學(xué)活動及科學(xué)研究工作,這將更有利于資源共享。

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