短管兔耳草化學(xué)成分的研究

張晨輝， 李 敏， 曾金祥， 謝雄雄， 毛 竹， 鐘國躍（江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心，江西南昌330004）

藏藥是我國傳統(tǒng)醫(yī)藥的重要組成部分，尤其對風(fēng)濕病、心血管病、胃病等方面顯示出其他藥物無可替代的作用[1］。短管兔耳草系玄參科兔耳草屬植物L(fēng)agotis brevituba Maxim.的干燥全草，主要分布于青海、西藏、甘肅等省區(qū)，其應(yīng)用歷史悠久，是著名藏藥洪連的基原植物[2］，藏醫(yī)學(xué)在臨床上用于治療腎炎、高血壓、動脈粥樣硬化癥、全身發(fā)燒、肺病、濕熱瀉痢、陰道流黃黑色液物、綜合性毒性中毒及心熱等多種病癥[3］，具有極高的藥用價值，被 《四部醫(yī)典》列為藏草藥之首?，F(xiàn)代研究表明[4-8］短管兔耳草含有黃酮類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜類、有機酸類等多種成分，具有有降尿酸、抗癌抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抗肝損傷等多種生物活性。本實驗對短管兔耳草的化學(xué)成分研究，進一步明確其化學(xué)成分，為短管兔耳草的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

薄層色譜硅膠及柱色譜硅膠 （青島海洋化工廠）；ZF-I型三用紫外分析儀 （上海顧村電光儀器廠）；LC-20AT高效液相 （日本 Shimadzu公司）；SZ-93 A型雙重純水蒸餾器 （上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式真空泵 （鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （瑞士步琪公司）；BT25S型電子分析天平 （北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；Bruker AX-400型、Bruker AX-600型核磁共振波譜儀 （以TMS為內(nèi)標(biāo)，瑞士布魯克公司）；YMC-Pack ODS半制備柱（250 mm×10 mm，5 μm）、 YMC C18柱 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） （日本YMC公司）；其他試劑均為分析純 （廣東汕頭市西隴化工股份有限公司）。

短管兔耳草購于成都荷花池藥材市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘國躍教授鑒定為玄參科兔耳草屬植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim.的干燥全草。

2 提取與分離

短管兔耳草的干燥全草10 kg，粉碎，滲漉，提取液減壓濃縮得浸膏，加水混懸至無明顯顆粒，石油醚萃取，水層減壓濃縮得浸膏 （385 g），硅膠拌樣，經(jīng)硅膠柱層析 （200～300目，CH2Cl2∶CH3OH＝100∶0～0∶100），得到8個流分 （Ⅰ～Ⅷ）。流分Ⅱ經(jīng)重結(jié)晶，得化合物3（2.27 g），剩余部分經(jīng)Sephadex LH-20柱層析 （100%CH3OH）得到流分Ⅱ-1～Ⅱ-3，Ⅱ-3得到化合物 2（8.3 mg）；流分Ⅳ經(jīng)Sephadex LH-20柱層析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得到流分Ⅳ-1～Ⅳ-3，Ⅳ-3得到化合物1（7.7 mg）。流分 V經(jīng) ODS柱層析 （C18，H2O ∶CH3OH＝100∶0～0∶100）， 得流分 V-1～V-8，V-6經(jīng)Sephadex LH-20柱層析 （100%CH3OH）得化合物5（43.4 mg）；V-8經(jīng) ODS柱層析 （C18，H2O ∶CH3OH＝70∶30～0∶100） 得到流分 V-8-1～V-8-3，V-8-1經(jīng)Sephadex LH-20柱層析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1） 得化合物4 （10.1 mg）； V-8-3經(jīng)Sephadex LH-20柱層析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得3個流分，V-8-3-3經(jīng)半制備高效液相（CH3OH∶H2O＝45 ∶55）， 得到化合物 6（61 mg）、 7 （46.9 mg）、 8 （23.6 mg）、 9 （32.9 mg）。 流分Ⅵ經(jīng)過Sephadex LH-20柱層析 （CH2Cl2∶CH3OH＝1∶1）得到流分Ⅵ-1～Ⅵ-9，Ⅵ-5經(jīng) ODS柱層析 （C18，H2O ∶CH3OH＝75∶25～0∶100） 得到流分Ⅵ5-1～Ⅵ-5-5，Ⅵ-5-4經(jīng)半制備高效液相 （CH3OH∶H2O＝41 ∶59） 得化合物10（351 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色片狀結(jié)晶，ESI-MS m／z：167[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 3.89（s， 3H， -OCH3）， 3.93 （s， 3H， -OCH3）， 7.14 （d，J＝8.2 Hz， 1H， H-2）， 7.45 （d， J＝1.9 Hz， 1H，H-5）， 7.55 （dd， 1H， J＝1.9， 8.2 Hz， H-6）， 9.81（s， 1H， H-7）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：131.5 （C-1）， 110.7 （C-2）， 151.1 （C-3）， 156.3（C-4）， 112.1 （C-5）， 127.8 （C-6）， 192.9 （C-7），56.4（C-8）， 56.6 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [9］一致，故鑒定為3，4-二甲氧基苯甲醛。

化合物2：白色晶體，ESI-MS m／z：210[M+H］+。1H-NMR （CD3OD，600 MHz） δ：3.86 （s，3H，-OCH3）， 3.87 （s， 3H， -OCH3）， 6.36 （d， J＝15.9 Hz， 1H， H-7）， 6.97 （d， J＝ 8.3 Hz， 2H， H-5），7.16 （dd， J＝ 2.0， 8.3 Hz， 1H， H-6）， 7.20 （d，J＝1.9 Hz， 1H， H-2）， 7.61 （d， J＝15.9 Hz， 1H，H-8），9.81 （s， 1H， COOH）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz） δ： 128.9 （C-1）， 116.9 （C-2）， 146.4（C-3）， 111.5 （C-4）， 152.7 （C-5）， 150.8 （C-6），112.6 （C-7）， 123.9 （C-8）， 170.8 （C-9）， 56.4（C-10），56.5（C-11）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [10]一致，故鑒定為3，4-二甲氧基苯丙酸。

化合物3：白色固體，ESI-MS m／z：209[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 7.58 （d， J＝15.9 Hz， 1H）， 7.17 （s， 1H）， 7.12 （d， J＝ 8.2 Hz，1H），6.94 （d， J＝8.2 Hz，1H），6.32 （d， J＝16.0 Hz， 1H）.3.92 （s， 3H）， 3.93 （s， 3H）；13CNMR （CD3OD， 151 MHz） δ： 56.4 （-OMe）， 56.5（-OMe）， 111.5 （C-4）， 112.6 （C-7）， 116.9 （C-2）， 123.9 （C-8）， 129.0 （C-1）， 146.5 （C-3），150.8 （C-6），152.8 （C-5），170.8 （C-9）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [11］一致，故鑒定為阿魏酸甲酯。

化合物4：無色油狀液體，ESI-MS m／z：279[M+H］+。1H-NMR （CDCl3， 400 MHz） δ： 7.74（dd， J＝6.0，2.7 Hz， 2H， H-3，6），7.55 （dd， J＝6.0， 2.7 Hz， 2H， 2H， H-4， 5）， 4.33 （t， J＝6.0 Hz， 4H， H-1′， 1″）， 1.74 （ m， 4H， H-2′， 2″），1.45 （m， 4H， H-3′， 3″）， 0.95 （t， J＝7.2 Hz， 6H，H-4′， 4″）；13C-NMR （ CDCl3， 151 MHz） δ： 13.9（C-4′， 4″）， 19.3 （C-3′， 3″）， 30.7 （C-2′， 2″），65.7 （C-1′， 1″）， 129.0 （C-4， 5）， 131.1 （C-3，6），132.5（C-1，2），167.9（-C＝O）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [12］一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物5：黃色針狀結(jié)晶，ESI-MS m／z：287[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 12.61（s， 1H， H-5）， 7.38 （m， 2H， H-2′， H-6′）， 6.91（d， J＝ 8.4 Hz， 1H， H-5′）， 6.54 （s， 1H， H-3），6.44 （d， J＝8.4 Hz， 1H， H-8）， 6.21 （d， J＝1.5 Hz， 1H， H-6）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：66.3 （C-2）， 103.8 （C-3）， 183.8 （C-4）， 163.1（C-5）， 100.2 （C-6）， 166.3 （C-7）， 95.1 （C-8），159.4 （C-9）， 105.2 （C-10）， 120.3 （C-1′）， 114.2（C-2′）， 147.0 （C-3′）， 151.0 （C-4′）， 116.8 （C-5′）， 123.6 （C-6′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [13]一致，故鑒定為木犀草素。

化合物 6：灰白色針狀結(jié)晶，ESI-MS m／z：463 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ：12.97 （s， 1H，HO-5），6.94 （s， 1H， H-3），6.45（J＝2.0 Hz，1H， H-6），6.87 （J＝2.0 Hz， 1H， H-8）， 6.98 （d， J＝ 2.0 Hz， 1H， H-2′）， 3.89 （s，3H， CH3O-3′）， 7.59 （dd， J＝ 9.0， 2.0 Hz， 1H，H-6′）， 5.07 （d， J＝8.0 Hz， 1H， H-1″）， 3.26 （dd，J＝ 9.0， 8.0 Hz， 1H， H-2″）， 3.45 （dd， J＝ 9.0，8.5 Hz， 1H， H-4″）， 3.17 （m， 1H， H-5″）， 3.46（dd， J＝12.5， 2.5 Hz， 1H， H-6″）， 3.71 （dd， J＝12.5， 4.5 Hz， 1H， H-6″）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ： 164.2 （C-2）， 103.4 （C-3）， 182.05 （C-4），161.1 （C-5），99.5 （C-6），163.0 （C-7），95.0（C-8）， 156.9 （C-9）， 105.3 （C-10）， 121.3 （C-1′）， 110.3 （C-2′）， 151.0 （C-3′）， 148.1 （C-4′），115.8 （C-5′）， 120.5 （C-6′）， 100.0 （C-1″）， 73.1（C-2″）， 77.3 （C-3″）， 69.6 （C-4″）， 76.5 （C-5″），60.6 （C-6″）， 56.0 （-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻[14］一致，故鑒定為柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物7：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性。ESI-MS m／z： 463 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 12.94 （s， 1H， 5-OH）， 7.58 （d， J＝8.6 Hz， 1H， H-6′）， 7.46 （s， 1H， H-2′）， 7.11 （d， J＝8.6 Hz， 1H， H-5′）， 6.84 （s， 1H， H-3）， 6.82（brd，J＝1.7 Hz， 1H， H-8）， 6.46 （brd， J＝1.7 Hz， 1H， H-6）， 5.09 （d， J＝7.2 Hz， 1H， H-1″），3.87 （s， 3H， -OCH3）；13C-NMR （DMSO， 150 MHz） δ： 163.0 （C-2）， 103.8 （C-3）， 182.0 （C-4）， 161.1 （C-5），99.6 （C-6），164.1 （C-7），94.8（C-8）， 157.0 （C-9）， 105.4 （C-10）， 122.9 （C-1′）， 113.2 （C-2′）， 146.8 （C-3′）， 151.3 （C-4′），112.2 （C-5′）， 118.9 （C-6′）， 55.8 （-OCH3）， 99.9（C-1″）， 73.1 （C-2″）， 76.4 （C-3″）， 69.5 （C-4″），77.2 （C-5″）， 60.6 （C-6″）， 56.0 （-OCH3）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [15］一致，故鑒定為香葉木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 8：淡黃色針晶，ESI-MS m／z：295[M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ： 7.65（d，J＝15.9 Hz，1H，H-7），7.53 （dd， J＝2.0，8.0 Hz，2H，H-2， 6），6.94（dd，J＝8.0，2.0 Hz，2H，H-3， 5）， 6.38 （d， J＝ 16.0 Hz， 1H， H-8）， 5.1（m， 1H， H-1′）；13C-NMR （CD3OD， 150 MHz） δ：128.1 （C-1）， 131.1 （C-2， 6）， 115.4 （C-3， 5），163.2 （C-4）， 146.3 （C-7）， 115.9 （C-8）， 169.0（C-9）， 94.0 （C-1′）， 72.0 （C-2′）， 71.7 （C-3′），75.4 （C-4′）， 70.8 （C-5′）， 64.9 （C-6′）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [16]一致，故鑒定為4-p-香豆酸-O-α-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 9： 淡黃色針晶， ESI-MS m／z： 295[M+H］+。1H-NMR （CD3OD，600 MHz） δ：7.67 （d，J＝15.9 Hz， 1H， H-7）， 7.54 （dd， J＝ 2.0， 8.0 Hz， 2H， H-2， 6）， 6.97 （dd， J＝ 8.0， 2.0 Hz，2H， H-3.5）， 6.40 （d， J＝ 16.0 Hz， 1H， H-8），4.3～4.6 （m， 4H）， 4.4 （d， J＝8.0 Hz， 1H），6.40 （dd， J＝5.9， 1.8 Hz， 1H）， 3.62 （dd， J＝9.6，9.2 Hz， 1H）， 3.3～3.4 （m， 1H）；13C-NMR（CD3OD， 150 MHz） δ： 128.1 （C-1）， 131.1 （C-2，6）， 115.4 （C-3， 5）， 163.2 （C-4）， 146.3 （C-7），115.9 （C-8）， 169.0 （C-9）， 98.2 （C-1′）， 73.7（C-2′）， 77.9 （C-3′）， 76.2 （C-4′）， 74.7 （C-5′），65.0（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻 [16]一致，故鑒定為4-p-香豆酸-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 10：白色無定型粉末，ESI-MS m／z：699 [M+H］+。1H-NMR （CD3OD， 600 MHz） δ：7.72 （d，J＝15.9 Hz，1H， H-7″），7.22 （d，J＝2.0 Hz， 1H， H-2″）， 7.19 （dd， J＝ 8.4， 2.0 Hz， 1H，H-6″）， 6.98 （d， J＝8.4 Hz， 1H， H-5″）， 6.50 （d，J＝15.9 Hz， 1H）， 6.40 （dd， J＝ 5.9， 1.8 Hz，1H， H-3）， 5.11 （d， J＝ 9.6 Hz， 1H， H-1），4.20～4.14 （m，2H），4.06 （d， J＝8.2 Hz，1H，H-6）， 3.84 （d， J＝ 13.1 Hz， 1H， H-10）， 2.59（dd， J＝ 9.8， 7.5 Hz， 1H， H-9）， 2.48 （ddt， J＝12.3， 6.4， 1.8 Hz， 1H， H-5）；13C-NMR （CD3OD，150 MHz） δ：95.2 （C-1）， 142.2 （C-3）， 103.6 （C-4）， 37.2 （C-5）， 83.7 （C-6）， 59.3 （C-7）， 66.6（C-8）， 43.2 （C-9）， 61.4 （C-10）， 99.7 （C-1′），74.8 （C-2′）， 77.6 （C-3′）， 71.7 （C-4′）， 78.5 （C-5′）， 62.9 （C-6′）， 100.2 （ C-1″）， 70.3 （C-2″），75.3 （C-3″）， 71.3 （C-4″）， 70.3 （C-5″）， 18.0（C-6″）， 162.6 （α）， 116.6 （β）， 146.6 （γ），128.8 （C-1）， 111.4 （C-2）， 152.7 （C-3）， 150.6（C-4），112.6 （C-5）， 124.0 （C-6）。 以上數(shù)據(jù)與文獻 [17]一致，故鑒定為6-O-[α-L-（3-3，4-二甲氧基肉桂酰）-吡喃鼠李糖基］-梓醇。

4 結(jié)論

本文從短管兔耳草中分離得到10個化合物，其中黃酮類3個，環(huán)烯醚萜苷類1個，苯丙素類6個，其中化合物1～4、8～10為首次從該植物中得到，化合物2～4、8～10為首次從本屬得到?，F(xiàn)代藥理研究證明，黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗自由基、抗氧化等作用。苯丙素類化合物具有抗氧化作用，環(huán)烯醚萜類化合物具有抗腫瘤、保肝、抗氧化作用。與短管兔耳草藥材的生物活性[4-8］對照分析，可知本實驗所得黃酮、環(huán)烯醚萜可能為其抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，所得黃酮、環(huán)烯醚萜、苯丙素為抗氧化活性的有效成分，所得環(huán)烯醚萜為保肝活性的物質(zhì)基礎(chǔ)。