藥用復(fù)合膜中苯二胺含量測(cè)定及限度標(biāo)準(zhǔn)研究*

張 璞，吳紅洋，曹 汐，范能全

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶401121）

20世紀(jì)80年代至今，我國(guó)開發(fā)了多種適宜片劑、膠囊、顆粒劑等藥品的包裝材料，其中藥用復(fù)合膜發(fā)展迅速，成為固體制劑主要的包裝形式[1-4]。藥用復(fù)合膜是通過黏合劑復(fù)合而成的多層結(jié)構(gòu)，由塑料薄膜、鋁箔、黏合劑及油墨組成[5]。我國(guó)目前用得最多的黏合劑為聚氨酯類黏合劑。聚氨酯由多羥基化合物和芳香族異氰酸酯聚合而成，生產(chǎn)過程中為了獲得更好的黏接性能，通常會(huì)適當(dāng)過量使用芳香族異氰酸酯組分[6]，但過量的芳香族異氰酸酯水解后會(huì)釋放產(chǎn)生芳香胺類物質(zhì)。苯二胺是芳香胺中常見的一種，對(duì)人體健康有潛在危害[7]。藥用復(fù)合膜包裝藥品時(shí)，存在遷移進(jìn)入藥品而影響藥品安全的風(fēng)險(xiǎn)，是藥用復(fù)合膜使用過程中的重大安全隱患。目前，國(guó)內(nèi)外有關(guān)苯二胺含量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)主要集中在染發(fā)劑和化妝品[8-11]，現(xiàn)行國(guó)家藥品包裝材料標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)黏合劑中的初級(jí)芳香胺如苯二胺進(jìn)行控制。本研究中對(duì)初級(jí)芳香胺中苯二胺的測(cè)定方法進(jìn)行了研究，并對(duì)樣品中苯二胺的殘留量進(jìn)行質(zhì)量控制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC2010 Plus型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；XPE205型電子天平（MettlerToledo公司，精度為0.01mg）；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

鄰苯二胺（批號(hào)為K1827010，純度為99.5%，規(guī)格為25 g），對(duì)苯二胺（批號(hào)為L(zhǎng)1829016，純度為99.0%，規(guī)格為100 g），間苯二胺（批號(hào)為C1906096，純度為99.5%，規(guī)格為100 g），均購(gòu)自Aladdin公司；甲醇為色譜純（安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司，批號(hào)為6508JW21）；試驗(yàn)用水為Milli-Q超純水（美國(guó)EMDMillipore公司）；藥用復(fù)合膜（A公司，批號(hào)分別為20170215，20171220，20170225；B公司，批號(hào)分別為20170301-06，20170301-07，20170301-08；C公司，批號(hào)分別為170301，170401，170502）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津Rtx-5毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）；溫度：進(jìn)樣口為200℃，氣化室為220℃，F(xiàn)ID為300℃；流速：載氣高純度氮?dú)鉃?.8 mL/min，氫氣為40mL/min，空氣為400mL/min，尾吹為30mL/min；柱溫：程序升溫，初始溫度為100℃，保持1min，以20℃/min的速率升至200℃，保持0 min，再以20℃/min的速率升至280℃，保持10 min；分流比：5∶1；進(jìn)樣量：1μL。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：分別取鄰苯二胺、對(duì)苯二胺和間苯二胺各0.25 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液2.0 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品中間貯備液。精密量取對(duì)照品中間貯備液適量，加甲醇稀釋成每1 mL含1，2，5，10，20，50，100μg的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取樣品適量，裁取表面積0.03 m2（約1.3 g），剪成3 mm×30 mm大小，置100 mL具塞錐形瓶中，加適量甲醇，超聲（功率為500 W，頻率為40 kHz）提取30 min后取出，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，用0.22μm濾膜過濾，即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：精密吸取空白溶劑（甲醇）及2.2項(xiàng)下2種溶液各1μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，色譜圖見圖1。結(jié)果鄰苯二胺、對(duì)苯二胺和間苯二胺對(duì)照品的理論板數(shù)分別為140 022，157 670，190 333。供試品溶液色譜圖中，均未檢出與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同的色譜峰；空白溶劑色譜圖中，在與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無干擾峰，表明該方法專屬性良好。

線性關(guān)系考察：分別取各質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得鄰苯二胺、對(duì)苯二胺、間苯二胺的回歸方程，Y鄰=3 026.03X鄰-5 053.46（r=0.999 5，n=7），Y對(duì)=2 936.18X對(duì)-5 564.23（r=0.999 5，n=7），Y間=2 988.44X間-5 150.78（r=0.999 6，n=7）；鄰苯二胺、對(duì)苯二胺、間苯二胺質(zhì)量濃度分別在0.996 8～99.680 0μg/mL，0.991 4～99.140 0μg/mL，1.003 8～100.380 0μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下質(zhì)量濃度為10μg/mL的對(duì)照品溶液適量，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺峰面積的RSD分別為1.68%，1.74%，1.90%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，室溫下分別放置0，3，6，8，12 h時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺峰面積的RSD分別為1.60%，1.37%，1.97%（n=5），表明對(duì)照品溶液在12 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺含量的樣品9份，各裁取0.03 m2，分別精密加入混合對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

檢測(cè)限與定量限：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液倍比稀釋，進(jìn)樣測(cè)定，當(dāng)信噪比（S/N）為3時(shí)為檢測(cè)限，S/N為10時(shí)為定量限。鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺的檢測(cè)出限分別為0.797 4，0.793 1，0.803 0μg/mL，定量限分別為0.996 8，0.991 4，1.003 8μg/mL。

2.4 樣品含量測(cè)定

圖1氣相色譜圖

表1加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

取9批樣品，各2份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果所有樣品中均未檢出鄰苯二胺、對(duì)苯二胺、間苯二胺。

3 討論

各國(guó)藥典均未收載藥用復(fù)合膜中苯二胺的測(cè)定方法及限度，故無法直接查閱苯二胺限度的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。在制訂本品苯二胺限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，擬根據(jù)《藥品與包裝材料相容性研究相關(guān)指導(dǎo)原則解讀-試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)估》[12-13]中建議的采用允許日暴露量（PDE）的評(píng)估方法進(jìn)行評(píng)估，并結(jié)合每日最大攝入量計(jì)算得藥用復(fù)合膜中苯二胺的限度。

查閱TOXNET數(shù)據(jù)庫(kù)可知，鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺的大鼠經(jīng)口急性毒性的半數(shù)致死量（LD50）分別為510，80，280 mg/kg，歐盟原料藥委員會(huì)在其發(fā)布的《原料藥工廠中清潔驗(yàn)證指南》中收載了由LD50計(jì)算NOEL的公式（NOEL=LD50/2 000）[14]，根據(jù)人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）Q 3C殘留溶劑指導(dǎo)原則中有機(jī)溶劑PDE值的計(jì)算方法[15]：PDE=NOEL×體質(zhì)量調(diào)整/（F1×F2×F3×F4×F5），式中NOEL為未觀察到作用水平，F(xiàn)1～F5為一系列安全系數(shù)值。通過計(jì)算得到鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺的PDE值分別為51，8，28 mg/d。目前，市場(chǎng)上藥用復(fù)合膜包裝顆粒劑最多。顆粒劑按最常見規(guī)格為每袋10 g，1次10 g，每日3～4次，空袋的質(zhì)量按1 g計(jì)，得到鄰苯二胺、對(duì)苯二胺與間苯二胺的限度分別為1.275%，0.2%，0.7%?？紤]到藥用復(fù)合膜包裝各種制劑的實(shí)際情況和臨床上的聯(lián)合用藥，為提高用藥安全性，故將苯二胺的限度值暫訂為0.05%，并根據(jù)后期毒性研究試驗(yàn)結(jié)果對(duì)現(xiàn)暫訂苯二胺濃度限度標(biāo)準(zhǔn)作進(jìn)一步修訂。

本研究中建立了采用氣相色譜法測(cè)定藥用復(fù)合膜中苯二胺含量的方法，并制訂了限度標(biāo)準(zhǔn)。按該方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均符合規(guī)定。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，建議在藥用復(fù)合膜中增加苯二胺的殘留量測(cè)定。