• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中survivin與NF-κB的表達(dá)及其臨床意義

    2020-12-12 02:52:48
    中國(guó)普通外科雜志 2020年11期
    關(guān)鍵詞:浸潤(rùn)性亞型分化

    (鄭州人民醫(yī)院 病理科,河南 鄭州450003)

    乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤,近年來(lái)發(fā)病率有上升趨勢(shì),侵襲和轉(zhuǎn)移是死亡的主要原因,腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多基因多步驟的復(fù)雜過(guò)程,研究腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。凋亡抑制基因生存素(survivin)是目前已知的最強(qiáng)凋亡抑制基因,在多數(shù)腫瘤中過(guò)表達(dá),與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)[1-3],其高表達(dá)可以作為腫瘤不良預(yù)后的獨(dú)立因子[4]。最近研究表明,survivin的檢測(cè)有助于乳腺癌預(yù)后的判斷[5]。核因子κB(NF-κB)是一種具有多向性調(diào)節(jié)作用的轉(zhuǎn)錄因子,通過(guò)調(diào)控細(xì)胞分化和凋亡相關(guān)基因的表達(dá),抑制腫瘤細(xì)胞的分化和凋亡,在細(xì)胞癌變過(guò)程中發(fā)揮重要作用,許多腫瘤包括血液腫瘤和實(shí)體瘤中均發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)通路的持續(xù)激活。最近研究表明,在乳腺癌中,多種基因如NF-κB受體激活因子配體c(receptor activator of NF-κB ligand c,RANKL-c)、NF-κB相互作用的長(zhǎng)鏈非編碼RNA(NF-κB interacting long noncoding RNA,lncRNA-NKILA)等[6-7]可以通過(guò)抑制NF-κB的激活減弱乳腺癌的侵襲,STAT3基因能夠激活NF-κB促進(jìn)乳腺癌發(fā)生發(fā)展[8]。乳腺癌組織中survivin和NF-κB的相關(guān)性尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,國(guó)內(nèi)在腎癌[9]、卵巢癌[10]、胃癌[11]及膠質(zhì)瘤[12]中有文獻(xiàn)報(bào)道,且研究表明survivin和NF-κB表達(dá)呈正相關(guān),乳腺癌組織中survivin和NF-κB的關(guān)系尚不清楚。乳腺癌的預(yù)后與其分子亞型密切相關(guān),survivin和NF-κB蛋白的表達(dá)與分子亞型有何關(guān)系?由于浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌占據(jù)乳腺癌的大部分,為了解乳腺癌中survivin和NF-κB的表達(dá)情況,以及兩者是否存在相關(guān)性,因此本研究分析80例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中survivin和NF-κB表達(dá)的臨床病理學(xué)特征的關(guān)系及兩者的相關(guān)性,旨在觀察survivin和NF-κB在乳腺癌發(fā)生發(fā)展的作用,以拓展和豐富對(duì)乳腺癌分子標(biāo)志物的認(rèn)識(shí)。

    1 資料與方法

    1.1 標(biāo)本來(lái)源

    選擇2015年5月—2017年5月在鄭州人民醫(yī)院乳腺外科行手術(shù)治療、術(shù)后經(jīng)病理確診且病歷完整的患者作為研究對(duì)象。研究樣本為80例乳腺原發(fā)浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌病理活檢標(biāo)本及相對(duì)應(yīng)的癌旁組織。按照2012年WHO乳腺癌組織病理分級(jí)分類法,對(duì)其進(jìn)行分組。根據(jù)12屆St.Gallen專家共識(shí)的乳腺癌分子分型標(biāo)準(zhǔn),在80例乳腺癌患者中,luminal A型23例,luminal B型17例,HER-2過(guò)表達(dá)型占19例,基底樣亞型占21例。有完整5年隨訪資料的患者71例,患者無(wú)病生存期從手術(shù)之日開(kāi)始計(jì)算,終止日期為腫瘤復(fù)發(fā)日期或末次隨訪日。所有標(biāo)本均經(jīng)10%的甲醛固定,石蠟包埋,并經(jīng)鄭州人民醫(yī)院病理科診斷確診。

    1.2 主要試劑

    survivin和NF-κB一抗兔抗人單克隆抗體(即用型)、二抗及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)均為福州邁新公司。

    1.3 免疫組織化學(xué)染色

    主要步驟如下:⑴ 石蠟組織切片、烤片、脫蠟并水化;⑵ 抗原修復(fù);⑶ 一抗37℃孵育2 h;⑷ 二抗37℃孵育20~30 min;⑸ DAB顯色5~10 min;⑹ 脫水、透明和封片。用已知survivin和NF-κB陽(yáng)性的乳腺癌組織和PBS分別代替一抗作為陽(yáng)性和空白對(duì)照。

    1.4 免疫組化結(jié)果判斷

    根據(jù)染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分。低表達(dá)包括:⑴ 陰性即無(wú)陽(yáng)性著色;⑵ 弱陽(yáng)性(+或者++,細(xì)胞著色范圍<30%)。高表達(dá)包括:⑴ 中等強(qiáng)度陽(yáng)性(++,細(xì)胞著色范圍≥30%或者+++,細(xì)胞著色范圍<50%);⑵ 強(qiáng)陽(yáng)性(+++,細(xì)胞著色范圍>50%)。本研究中陽(yáng)性表達(dá)率=高表達(dá)樣本量/總樣本含量,免疫組化的判讀有兩位高年資病理醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行判讀。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析survivin和NF-κB陽(yáng)性表達(dá)率和病理因素的相關(guān)性采用χ2檢驗(yàn),生存分析采用Kaplan-Meier法,并以Log-rank法檢驗(yàn);采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素生存分析。兩者的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 survivin和NF-κB 在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)

    survivin和NF-κB主要定位于細(xì)胞漿,在乳腺癌旁組織中低表達(dá)或不表達(dá),在癌組織中呈明顯高表達(dá)。80例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,survivin在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)表達(dá)率53.75%(43/80),癌旁組織為11.25%(9/80),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=32.934,P=0.000);NF-κB在癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率為56.25%(45/80),癌旁組織為8.75%(7/80),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=41.140,P=0.000)(圖1)。

    2.2 survivin和NF-κB 分別與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

    80例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,survivin與NF-κB的表達(dá)均與組織學(xué)分級(jí)有關(guān),即在高分化、中分化、低分化癌組織表達(dá)依次升高;兩者的表達(dá)均為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組;survivin與NF-κB的表達(dá)均與TNM分期有關(guān),均為III+IV期組高于I+II期組;兩者的表達(dá)均與乳腺癌分子亞型有關(guān),均為在HER-2過(guò)表達(dá)型和基底樣亞型中表達(dá)率高于luminal A型和luminal B型中,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。兩者的表達(dá)均與乳腺癌患者年齡、腫瘤位置和腫瘤直徑均無(wú)明顯關(guān)系(均P>0.05)(表1)。

    2.3 survivin和NF-κB 共表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

    80例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,survivin和NF-κB共表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及分子亞型有關(guān)。兩者共同高表達(dá)率在低分化乳腺癌、有淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、TNM III+IV期組、HER-2過(guò)表達(dá)型和基底樣亞型中明顯升高,而兩者共低表達(dá)率中-高分化、無(wú)淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移、TNMI+II期、luminal A型與luminal B型組中較高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。兩者共表達(dá)與年齡、腫瘤位置、腫瘤直徑無(wú)明顯關(guān)系(均P >0.05)(表2)。

    表2 survivin和NF-κB 共表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]Table2 Relations of co-expression of survivin and NF-κB with clinicopathological characteristics of invasive ductal breast carcinoma [n (%)]

    2.4 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中survivin和NF-κB的相關(guān)性

    80例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中,survivin和NF-κB同時(shí)高表達(dá)者35例(43.75%),同時(shí)低表達(dá)者27例(33.75%),僅survivin高表達(dá)者8例(10%),僅NF-κB高表達(dá)者10例(12.5%)。采用Spearman相關(guān)分析,結(jié)果顯示survivin和NF-κB表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.546,P=0.000)(表3)。

    表3 乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中survivin和NF-κB的相關(guān)分析(n)Table3 Correlation analysis of survivin and NF-κB in invasive ductal breast carcinoma (n)

    2.5 survivin和NF-κB蛋白表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

    71例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者5年總體無(wú)病生存率為66.2%。survivin蛋白高表達(dá)者的無(wú)病生存率低于低表達(dá)者(53.8%vs.81.3%,χ2=7.134,P=0.008);NF-κB蛋白高表達(dá)者無(wú)病生存率低于低表達(dá)者(51.2%vs.89.3%,χ2=12.171,P=0.000)。survivin和NF-κB共同高表達(dá)、單一指標(biāo)高表達(dá)、survivin和NF-κB均低表達(dá)無(wú)病生存率分別為50.0%、70%、88.0%,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.344,P=0.003)(圖2)。Cox回歸模型分析顯示,NF-κB、survivin與NF-κB共表達(dá)、腫物直徑、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是乳腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)(表4)。

    圖2 survivin和NF-κB蛋白表達(dá)與乳腺癌患者無(wú)病生存期的關(guān)系 A:不同survivin 蛋白表達(dá)狀態(tài)患者無(wú)病生存曲線;B:不同NF-κB蛋白表達(dá)狀態(tài)患者無(wú)病生存曲線;C:不同survivin與NF-κB蛋白表達(dá)狀態(tài)患者無(wú)病生存曲線Figure2 Relations of survivin and NF-κB protein expressions with disease-free survival of breast cancer patients A:Disease-free survival curves of patients with different survivin expression statuses; B:Disease-free survival curves of patients with different NF-κB expression statuses; C:Disease-free survival curves of patients with different survivin and NF-κB expression statuses

    表4 乳腺癌患者預(yù)后多因素生存分析Table4 Multivariate survival analysis of breast cancer patients

    3 討 論

    研究[3,13-15]表明,survivin在惡性腫瘤組織中如肝內(nèi)膽管癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等腫瘤中高表達(dá),而在正常分化的成人組織中無(wú)表達(dá),對(duì)惡性腫瘤的診斷和治療有重要應(yīng)用意義。survivin在腫瘤組織發(fā)揮作用主要是通過(guò)腫瘤細(xì)胞凋亡異常使得細(xì)胞逃脫正常的監(jiān)控機(jī)制,從而發(fā)生細(xì)胞分裂異常以及對(duì)放療、化療的耐受,以survivin為靶點(diǎn)的腫瘤治療成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)[16-18]。Tanaka等[19]研究乳腺癌中survivin表達(dá)率70.7%(118/167)明顯高于本研究中的53.75%(43/80),原因可能跟樣本含量或者免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)。本研究對(duì)80例乳腺癌組織檢測(cè)了survivin的表達(dá)情況,通過(guò)分析survivin的表達(dá)與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系,結(jié)果顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)低分化及TNM分期越高,survivin的表達(dá)增加,這提示survivin的高表達(dá)與乳腺癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。survivin在乳腺癌中的表達(dá)與與臨床病理特征的關(guān)系與以往文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13,15,19]。不同的是有文獻(xiàn)報(bào)道survivin與腫瘤的直徑相關(guān),即在腫瘤直徑>2 cm,survivin表達(dá)較高[13]。本研究發(fā)現(xiàn)survivin與腫瘤直徑無(wú)關(guān),分析其原因如下:⑴ 本研究選取的乳腺癌標(biāo)本是乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌;⑵ 本研究樣本含量對(duì)臨床分期沒(méi)有限制,而該文獻(xiàn)中選取的是臨床I~I(xiàn)II期乳腺癌樣本;⑶ 免疫組織化學(xué)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)不同。survivin在浸潤(rùn)性乳腺癌的各分子亞型中的表達(dá)文獻(xiàn)報(bào)道較少見(jiàn)。本研究中survivin陽(yáng)性表達(dá)率在HER-2過(guò)表達(dá)型和基底樣型較luminal A型和luminal B型表達(dá)率較高,生存分析表明survivin蛋白表達(dá)越高,其無(wú)病生存率越低,這表明survivin在一定程度可以反映乳腺癌的分子分型及預(yù)后判斷。國(guó)內(nèi)張緒良等[20]報(bào)道浸潤(rùn)性乳腺癌呈現(xiàn)為survivin高陽(yáng)性表達(dá)情況,以luminal B型分子亞型最為多見(jiàn),與本研究報(bào)道存在一定的差異。因此尚需要大樣本數(shù)據(jù)進(jìn)一步觀察survivin在乳腺癌不同分子亞型中的表達(dá)及臨床意義。

    近年來(lái),NF-κ B 通過(guò)炎癥誘發(fā)腫瘤受到研究者關(guān)注,它可作用于微環(huán)境,通過(guò)促進(jìn)炎癥反應(yīng)激活腫瘤干細(xì)胞,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,抑制凋亡[21-22]。在人的乳腺癌[23]、胃癌[24]、結(jié)腸癌[25]等腫瘤的研究中也顯示NF-κB的活化或表達(dá)發(fā)生改變,提示細(xì)胞在惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中NF-κB起著重要作用。國(guó)內(nèi)趙鳳輝等[26]報(bào)道102例浸潤(rùn)性乳腺癌中NF-κB陽(yáng)性率(89.2%,91/102)顯著高于癌旁組織(10.8%,11/102),其高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),而與分化程度無(wú)關(guān)。本研究顯示,NF-κB在乳腺癌中的陽(yáng)性率顯著高于在癌旁組織,腫瘤分化低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期晚的病例,NF-κB表達(dá)較高,提示NF-κB與乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究顯示NF-κB與組織學(xué)分化有關(guān)與以往文獻(xiàn)報(bào)道[27]存在差異,其原因如下:⑴ 免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn)不一;⑵ 樣本的組織學(xué)類型不同,本研究只包括浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌,而該文獻(xiàn)中研究對(duì)象除了浸潤(rùn)性性導(dǎo)管癌外,還包括小葉癌、乳頭狀癌等特殊亞型的癌。NF-κB在浸潤(rùn)性乳腺癌的各分子亞型中的表達(dá)尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究中NF-κB陽(yáng)性表達(dá)率在HER-2過(guò)表達(dá)型和基底樣型較luminal A型和luminal B型表達(dá)率高,生存分析表明NF-κB蛋白表達(dá)越高,其無(wú)病生存率越低,這表明NF-κB在一定程度可以反映乳腺癌的分子分型及預(yù)后判斷。

    乳腺癌survivin和NF-κB的相關(guān)性尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,國(guó)內(nèi)在腎癌、卵巢癌、胃癌、膠質(zhì)瘤、肝癌等[9-12,27]腫瘤中有文獻(xiàn)報(bào)道,且上述文獻(xiàn)研究表明survivin和NF-κB表達(dá)呈正相關(guān),乳腺癌組織中survivin和NF-κB的關(guān)系尚不清楚。本研究表明,survivin和NF-κB共表達(dá)與分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及分子亞型有關(guān),兩者共同高表達(dá)在HER-2過(guò)表達(dá)型和基底樣亞型表達(dá)率較高,Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,survivin和NF-κB兩者共表達(dá)患者預(yù)后更差,Cox回歸模型分析兩者共表達(dá)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素之一,Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示80例乳腺癌中survivin和NF-κB表達(dá)呈正相關(guān),這提示兩者在乳腺癌中可能存在協(xié)同作用,共同促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步文獻(xiàn)研究表明,survivin能夠通過(guò)減弱p53對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞中NF-κB表達(dá)產(chǎn)生抑制作用[28]。Cui等[29]研究表明在膀胱癌中,NF-κB通過(guò)上調(diào)survivin的表達(dá)抑制腫瘤的凋亡,促進(jìn)腫瘤的增殖。最近的研究表明在食管癌中survivin短發(fā)夾RNA表達(dá)下調(diào)能夠抑制NF-κB的磷酸化[30]。因此,對(duì)乳腺癌中survivin和NF-κB兩者相互作用的機(jī)制,有必要在分子水平進(jìn)一步探討。

    綜上所述,免疫組化檢測(cè)survivin和NF-κB可用于評(píng)價(jià)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌臨床病理狀態(tài),兩者存在協(xié)同作用共同促進(jìn)了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。本文僅從蛋白水平對(duì)其進(jìn)行了研究,對(duì)乳腺癌中的survivin和NF-κB表達(dá)規(guī)律及相互作用的更深層次的研究,將有可能在分子水平上進(jìn)一步揭示乳腺癌發(fā)生的機(jī)制,并為其基因的靶向治療提供一定的理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    浸潤(rùn)性亞型分化
    兩次中美貨幣政策分化的比較及啟示
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    浸潤(rùn)性乳腺癌超聲及造影表現(xiàn)與P63及Calponin的相關(guān)性
    乳腺浸潤(rùn)性微乳頭狀癌的研究進(jìn)展
    乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織β-catenin、cyclinD1、CDK4蛋白表達(dá)及臨床意義
    Ikaros的3種亞型對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響
    ABO亞型Bel06的分子生物學(xué)鑒定
    Cofilin與分化的研究進(jìn)展
    HeLa細(xì)胞中Zwint-1選擇剪接亞型v7的表達(dá)鑒定
    抑郁的新亞型:閾下抑郁
    亚洲欧美激情在线| 免费看十八禁软件| 国产男女超爽视频在线观看| 国产av精品麻豆| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 一级毛片 在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 我的亚洲天堂| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久九九热精品免费| 亚洲人成电影免费在线| 两人在一起打扑克的视频| 激情五月婷婷亚洲| 欧美国产精品一级二级三级| 国产成人免费无遮挡视频| 我要看黄色一级片免费的| 久热爱精品视频在线9| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久精品区二区三区| 男人舔女人的私密视频| 亚洲人成网站在线观看播放| www.999成人在线观看| 老司机影院毛片| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久热这里只有精品99| 捣出白浆h1v1| 满18在线观看网站| 亚洲精品自拍成人| 一区在线观看完整版| 亚洲国产欧美在线一区| 青青草视频在线视频观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99国产精品一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 丝袜在线中文字幕| 国产淫语在线视频| 一区福利在线观看| 国产在线视频一区二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 天天添夜夜摸| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品成人在线| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产极品粉嫩免费观看在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 午夜福利,免费看| 成人免费观看视频高清| 美女大奶头黄色视频| 最黄视频免费看| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 午夜视频精品福利| 国产欧美日韩一区二区三 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 热99久久久久精品小说推荐| 大型av网站在线播放| 一级片免费观看大全| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 9色porny在线观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 少妇被粗大的猛进出69影院| 永久免费av网站大全| 在线观看免费午夜福利视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 另类精品久久| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 一区二区av电影网| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美性长视频在线观看| 老司机靠b影院| 欧美97在线视频| 亚洲中文av在线| 国产成人影院久久av| 亚洲av男天堂| 精品一区二区三区av网在线观看 | 国产在线一区二区三区精| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲久久久国产精品| 大话2 男鬼变身卡| 亚洲国产av影院在线观看| 9色porny在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲视频免费观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 久久精品成人免费网站| 日韩大片免费观看网站| 热re99久久国产66热| 99热全是精品| 丝袜喷水一区| 在线精品无人区一区二区三| 99精国产麻豆久久婷婷| 男女边摸边吃奶| 桃花免费在线播放| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本欧美国产在线视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美精品高潮呻吟av久久| 黄色一级大片看看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 极品人妻少妇av视频| 日本av手机在线免费观看| 男女免费视频国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 91老司机精品| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲 国产 在线| 欧美人与善性xxx| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品亚洲av一区麻豆| 99国产精品99久久久久| 一区二区三区激情视频| 热99久久久久精品小说推荐| 欧美激情高清一区二区三区| 操出白浆在线播放| av在线播放精品| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| www.999成人在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 美女高潮到喷水免费观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久女婷五月综合色啪小说| 后天国语完整版免费观看| 欧美国产精品一级二级三级| 一本久久精品| 男人舔女人的私密视频| 在线精品无人区一区二区三| 麻豆av在线久日| 午夜激情久久久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美人与善性xxx| 男女边摸边吃奶| 99久久精品国产亚洲精品| 精品少妇久久久久久888优播| 五月天丁香电影| av在线app专区| 天天添夜夜摸| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产精品九九99| 久久久亚洲精品成人影院| 午夜福利一区二区在线看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲国产精品一区三区| 国产黄频视频在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 两个人看的免费小视频| 好男人视频免费观看在线| 免费看av在线观看网站| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 大码成人一级视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲精品一区蜜桃| 久久精品国产亚洲av涩爱| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 七月丁香在线播放| 真人做人爱边吃奶动态| 黄色 视频免费看| 亚洲成人国产一区在线观看 | 美国免费a级毛片| 亚洲国产成人一精品久久久| 黄片小视频在线播放| 国产伦人伦偷精品视频| 免费观看a级毛片全部| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品久久久精品久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 免费看不卡的av| 天天操日日干夜夜撸| 首页视频小说图片口味搜索 | 亚洲人成网站在线观看播放| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久青草综合色| 一二三四在线观看免费中文在| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 99精品久久久久人妻精品| 黄色怎么调成土黄色| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美日本中文国产一区发布| 日本av免费视频播放| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久久久久精品精品| 一级黄片播放器| 国产xxxxx性猛交| 欧美精品一区二区大全| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 九色亚洲精品在线播放| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 国产有黄有色有爽视频| 首页视频小说图片口味搜索 | 在线观看人妻少妇| 欧美日本中文国产一区发布| 只有这里有精品99| 欧美精品av麻豆av| 国产亚洲av高清不卡| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品免费久久久久久久清纯 | 久久午夜综合久久蜜桃| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久久久久久国产电影| 男女床上黄色一级片免费看| 51午夜福利影视在线观看| 成人三级做爰电影| 国产在视频线精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧美乱码精品一区二区三区| tube8黄色片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| bbb黄色大片| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av综合色区一区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | h视频一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲第一青青草原| 亚洲人成电影观看| 夫妻午夜视频| 在线 av 中文字幕| 国产又爽黄色视频| 大话2 男鬼变身卡| av又黄又爽大尺度在线免费看| 精品国产国语对白av| 在线观看人妻少妇| 国产熟女欧美一区二区| e午夜精品久久久久久久| 女性被躁到高潮视频| 国产淫语在线视频| 交换朋友夫妻互换小说| av网站在线播放免费| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲第一av免费看| 大话2 男鬼变身卡| 色综合欧美亚洲国产小说| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲,欧美,日韩| 国产成人影院久久av| 午夜免费鲁丝| 建设人人有责人人尽责人人享有的| av在线老鸭窝| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 精品国产一区二区久久| 精品高清国产在线一区| 欧美日韩亚洲高清精品| 深夜精品福利| 只有这里有精品99| 777米奇影视久久| 免费av中文字幕在线| 一级片'在线观看视频| 高清av免费在线| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 国产精品三级大全| 欧美精品av麻豆av| 久久精品久久精品一区二区三区| svipshipincom国产片| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 午夜影院在线不卡| 日韩人妻精品一区2区三区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 热re99久久精品国产66热6| av有码第一页| 两人在一起打扑克的视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 搡老岳熟女国产| 国产成人精品无人区| 免费av中文字幕在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 成年av动漫网址| 超碰97精品在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 制服人妻中文乱码| 亚洲 国产 在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 丝袜美足系列| 亚洲精品一二三| 国产一区亚洲一区在线观看| 男人舔女人的私密视频| 18在线观看网站| 人妻人人澡人人爽人人| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 免费日韩欧美在线观看| 成人免费观看视频高清| 欧美国产精品一级二级三级| 91字幕亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲av日韩在线播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 在线观看www视频免费| 视频区欧美日本亚洲| 国产97色在线日韩免费| 国产黄色视频一区二区在线观看| 赤兔流量卡办理| 69精品国产乱码久久久| 午夜91福利影院| 久久狼人影院| 久久性视频一级片| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产高清国产精品国产三级| 国产精品熟女久久久久浪| 国产精品久久久人人做人人爽| 婷婷色麻豆天堂久久| xxxhd国产人妻xxx| 丝瓜视频免费看黄片| 欧美在线一区亚洲| 久久99热这里只频精品6学生| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产免费福利视频在线观看| 国产一区二区 视频在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 大型av网站在线播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美 日韩 精品 国产| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲av男天堂| 久久人人爽人人片av| 国产成人精品在线电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久青草综合色| 欧美av亚洲av综合av国产av| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产一级毛片在线| 大陆偷拍与自拍| 一级毛片电影观看| 男人舔女人的私密视频| 精品福利永久在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 欧美性长视频在线观看| 深夜精品福利| 最新在线观看一区二区三区 | 黄色 视频免费看| 人成视频在线观看免费观看| xxxhd国产人妻xxx| 天天影视国产精品| 中文字幕人妻熟女乱码| 手机成人av网站| 国产三级黄色录像| 一级毛片电影观看| 欧美日韩黄片免| 国产成人精品久久二区二区91| 国产一区二区 视频在线| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产免费又黄又爽又色| 久久精品国产亚洲av高清一级| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99香蕉大伊视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产精品一区二区在线观看99| 一边亲一边摸免费视频| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品国产av成人精品| 捣出白浆h1v1| 男女国产视频网站| 国产野战对白在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产精品久久久久成人av| 尾随美女入室| 啦啦啦在线观看免费高清www| 激情视频va一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 青青草视频在线视频观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品 国内视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 人妻 亚洲 视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 丝袜在线中文字幕| 久久精品成人免费网站| 无限看片的www在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| √禁漫天堂资源中文www| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 成年人黄色毛片网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 乱人伦中国视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 婷婷色av中文字幕| 国产成人精品久久二区二区91| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产精品久久久av美女十八| 观看av在线不卡| 欧美成人午夜精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 人人澡人人妻人| 亚洲成人免费av在线播放| 久9热在线精品视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产精品二区激情视频| 国产亚洲欧美精品永久| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲视频免费观看视频| 中文字幕色久视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲一区二区三区欧美精品| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 岛国毛片在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产精品久久久久成人av| 久久久久精品人妻al黑| 欧美大码av| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 亚洲国产欧美日韩在线播放| 高清黄色对白视频在线免费看| 免费在线观看日本一区| 精品人妻在线不人妻| 亚洲av成人精品一二三区| 激情视频va一区二区三区| 欧美激情高清一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 在线观看一区二区三区激情| 久久九九热精品免费| 欧美日韩av久久| 国产伦人伦偷精品视频| 在线观看免费高清a一片| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲精品国产色婷婷电影| 男人添女人高潮全过程视频| 性少妇av在线| 久久久久久人人人人人| 国产一区二区三区av在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久久久精品人妻al黑| 国产人伦9x9x在线观看| 一区福利在线观看| 麻豆av在线久日| 我要看黄色一级片免费的| 久久精品人人爽人人爽视色| 我的亚洲天堂| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一级片'在线观看视频| 国产在线一区二区三区精| 美女主播在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美黑人精品巨大| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲伊人色综图| 国产一区二区在线观看av| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 99国产精品一区二区蜜桃av | 欧美日韩av久久| 亚洲七黄色美女视频| 老司机深夜福利视频在线观看 | 黑丝袜美女国产一区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产成人av教育| 亚洲成人免费电影在线观看 | 成人三级做爰电影| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 桃花免费在线播放| 午夜免费成人在线视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲精品中文字幕在线视频| 91国产中文字幕| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美精品一区二区大全| 老司机影院成人| 性色av乱码一区二区三区2| 我要看黄色一级片免费的| 人体艺术视频欧美日本| 91精品伊人久久大香线蕉| 女人久久www免费人成看片| 一区二区三区四区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美大码av| 国产精品久久久人人做人人爽| 日本vs欧美在线观看视频| 99九九在线精品视频| 久久久国产精品麻豆| 亚洲成人手机| 女性生殖器流出的白浆| 国产av国产精品国产| 午夜福利,免费看| 欧美久久黑人一区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产欧美亚洲国产| 高潮久久久久久久久久久不卡| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产男人的电影天堂91| 国产真人三级小视频在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲天堂av无毛| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲人成电影免费在线| 欧美 日韩 精品 国产| 在线观看免费午夜福利视频| 丝袜在线中文字幕| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久久久久大尺度免费视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产野战对白在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产麻豆69| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费不卡黄色视频| 乱人伦中国视频| e午夜精品久久久久久久| 国产野战对白在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 婷婷色综合大香蕉| 国产爽快片一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 美女视频免费永久观看网站| 欧美日韩福利视频一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 十八禁高潮呻吟视频| 最新在线观看一区二区三区 | 90打野战视频偷拍视频| 91九色精品人成在线观看| 男女之事视频高清在线观看 | 无遮挡黄片免费观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 一区福利在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 18禁国产床啪视频网站| 天堂8中文在线网| 国产在线免费精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 免费观看av网站的网址| 国产片特级美女逼逼视频| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品久久久久久久性| 黄色片一级片一级黄色片| 精品人妻1区二区| av网站在线播放免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久久久视频综合| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲男人天堂网一区| 国产av国产精品国产| 波野结衣二区三区在线| 一本大道久久a久久精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 日韩免费高清中文字幕av| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产黄色免费在线视频| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲欧美激情在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看一区二区三区激情| av一本久久久久| 黄色视频不卡| 国产精品久久久久成人av| 日韩av不卡免费在线播放| 免费看av在线观看网站| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 精品人妻一区二区三区麻豆| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 大码成人一级视频| 国产不卡av网站在线观看| 午夜免费鲁丝| 成人免费观看视频高清| 2021少妇久久久久久久久久久|