• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    遼寧省稻瘟病菌生理小種及無(wú)毒基因鑒定

    2020-12-10 10:48:36魏松紅朱麗珺王海寧張照茹李昕洋
    關(guān)鍵詞:小種稻瘟病生理

    劉 偉,魏松紅,朱麗珺,王海寧,張照茹,李昕洋

    (沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,遼寧 沈陽(yáng) 110866)

    【研究意義】由稻梨孢(Pyriculariaoryzae)引起的稻瘟病是目前世界分布最廣、危害最重的水稻病害之一[1],近年來(lái),我國(guó)遼寧地區(qū)稻瘟病的發(fā)生也呈現(xiàn)逐年加重的趨勢(shì),已成為限制該地區(qū)水稻高產(chǎn)和穩(wěn)產(chǎn)的主要障礙之一[2]。選育和種植抗病品種是防治稻瘟病最有效的措施,水稻對(duì)稻瘟病的抗性類型大多數(shù)屬于小種?;共⌒?,由主效抗病基因控制,表現(xiàn)為質(zhì)量性狀,該類抗病類型抗病效能高,遺傳方式簡(jiǎn)單,已成為廣泛應(yīng)用的主要抗病性類型[3-4]。小種?;共⌒苑螰lor 的“基因?qū)颉睂W(xué)說(shuō),即抗病基因(R基因)識(shí)別病原物的無(wú)毒基因(Avr基因),引發(fā)不親和反應(yīng)[5]。由于稻瘟病菌群體結(jié)構(gòu)復(fù)雜,變異速率快,致病力分化嚴(yán)重,導(dǎo)致能克服寄主抗病性的群體快速形成優(yōu)勢(shì),大多數(shù)抗病品種在大田推廣3~5年后即喪失抗性[6-8]。因此,鑒定稻瘟病菌的無(wú)毒基因和生理小種的動(dòng)態(tài)變化,有助于人們根據(jù)不同地區(qū)流行菌株的無(wú)毒基因型選擇具有相應(yīng)抗病基因的水稻品種進(jìn)行合理布局。【前人研究進(jìn)展】目前完成初步定位的稻瘟病菌無(wú)毒基因至少有40個(gè),成功克隆的稻瘟病菌無(wú)毒基因有12個(gè),分別為PWL1、PWL2、AVR1-CO39、Avr-Pita、ACE1、Avr-Piz-t、Avr-Pia、Avr-Pii、Avr-Pik/km/kp、PWL2D、Avr-Pi9和Avr-Pib。劉翔等[9]對(duì)2014年分離自湖南桃江病圃麗江新團(tuán)黑谷的稻瘟病菌進(jìn)行無(wú)毒基因鑒定,結(jié)果表明:無(wú)毒基因Avr-Pita、Avr-Pish、Avr-Piz、Avr-Piz5、Avr-Pi3和Avr-Pi9出現(xiàn)頻率較高。王世維等[10]對(duì)2011年分離自遼寧地區(qū)的稻瘟病菌進(jìn)行無(wú)毒基因鑒定,結(jié)果表明:遼寧省稻瘟病菌主要無(wú)毒基因類型為Avr-pita、Avr-pik和AvrPiz-t,AVR1-CO39、Avr-pii和Avr-pia在遼寧省的稻瘟病菌中均未檢測(cè)到。朱名海等[11]對(duì)2014-2015年分離自南繁核心區(qū)和非核心區(qū)的稻瘟病菌無(wú)毒基因攜帶情況進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果表明:無(wú)毒基因ACE1、Avr-Pik、Avr-Pita、Avr-Piz-t和PWL2在2個(gè)區(qū)域的稻瘟病菌中分布率較高,無(wú)毒基因Avr-Pia在南繁非核心區(qū)的稻瘟病菌中未檢測(cè)到?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】本試驗(yàn)于2017-2018年采集遼寧省7個(gè)主產(chǎn)稻區(qū)穗頸瘟病標(biāo)樣740余份,通過(guò)單孢分離共獲得151株供試菌株,采用全國(guó)統(tǒng)一的1套7個(gè)鑒別品種,對(duì)供試菌株進(jìn)行生理小種鑒定,并對(duì)供試菌株進(jìn)行了10個(gè)稻瘟病菌無(wú)毒基因攜帶情況的PCR檢測(cè)。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】研究結(jié)果可為指導(dǎo)遼寧地區(qū)水稻品種的選育、布局和輪用以及稻瘟病的綜合防控提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 供試材料

    供試菌株:2017-2018年從遼寧省7個(gè)主產(chǎn)稻區(qū)(沈陽(yáng)市、大連市、丹東市、營(yíng)口市、盤錦市、鐵嶺市、撫順市)采集穗頸瘟標(biāo)樣740余份,通過(guò)病原菌常規(guī)分離和單孢純化共獲得151株供試菌株,其中沈陽(yáng)25株、大連9株、丹東31株、營(yíng)口2株、盤錦28株、鐵嶺34株、撫順22株。

    供試水稻鑒別品種:特特普、珍龍13、四豐43、東農(nóng)363、關(guān)東51、合江18、麗江新團(tuán)黑谷。

    供試培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基為馬鈴薯200 g,瓊脂20 g,葡萄糖20 g,蒸餾水1000 mL;PD培養(yǎng)液為馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,蒸餾水1000 mL;TOA培養(yǎng)基為燕麥片30 g,番茄汁200 mL,瓊脂30 g,蒸餾水1000 mL。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 供試菌株生理小種鑒定 將活化的供試菌株轉(zhuǎn)接至TOA培養(yǎng)基進(jìn)行產(chǎn)孢培養(yǎng),培養(yǎng)5 d后,配成孢子懸浮液(每毫升1×106個(gè)孢子)備用。將7個(gè)供試鑒別水稻品種培養(yǎng)至3葉1心期,參照張海旺等[12](2014)的方法進(jìn)行離體葉段劃傷接種,放置于人工氣候培養(yǎng)箱中,模擬7-8月水稻田間的氣候條件,培養(yǎng)8 d后,采用全國(guó)稻瘟病菌生理小種聯(lián)合試驗(yàn)組(1980 年)制訂的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行調(diào)查,記載鑒別品種的抗(R)感(S)反應(yīng)類型[13]。

    1.2.2 供試菌株無(wú)毒基因鑒定 將活化的供試菌株轉(zhuǎn)接至PD培養(yǎng)液中培養(yǎng)8 d,收集菌絲并干燥,利用OMEGA公司真菌基因組DNA提取試劑盒(D3390-01)進(jìn)行供試菌株DNA提取。根據(jù)10個(gè)稻瘟病菌無(wú)毒基因序列,利用Primer 6和DNAMAN軟件設(shè)計(jì)引物并檢驗(yàn),設(shè)計(jì)出10對(duì)不同無(wú)毒基因引物,引物序列見(jiàn)表1。PCR反應(yīng)體系(30 μl):E-taq酶0.15 μl,10×E-TaqBuffer(MgCl2)3 μl,正向引物和反向引物各0.12 μl(100 μg·mL-1),dNTP 2 μl,DNA模板2 μl,ddH2O補(bǔ)足至30 μl。PCR反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性5 min,94 ℃變性30 s,55~61 ℃退火30 s,具體依據(jù)引物的G/C含量來(lái)定,72 ℃延伸30~60 s,具體依據(jù)目的片段長(zhǎng)度而定,29個(gè)循環(huán),72 ℃延伸5 min。瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè):取5 μl PCR產(chǎn)物與1.5×Loading buffer混合液(4∶1)混合后,在1 %瓊脂糖凝膠中電泳,DuRed染色后,在凝膠成像系統(tǒng)下拍照。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    結(jié)合2010-2016年遼寧省稻瘟病菌生理小種種群分布和動(dòng)態(tài)變化,對(duì)2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種進(jìn)行分析,結(jié)合2014-2016年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因分布和動(dòng)態(tài)變化,對(duì)2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因進(jìn)行分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種鑒定

    由表2可知,供試151株稻瘟病菌經(jīng)鑒定劃分為6群41個(gè)生理小種。分別為ZA群的ZA1、ZA3、ZA5、ZA7、ZA9、ZA13、ZA17、ZA21、ZA25、ZA29、ZA31、ZA33、ZA37、ZA41、ZA49、ZA55、ZA57、ZA61,共18個(gè)小種;ZB群的ZB1、ZB3、ZB5、ZB9、ZB11、ZB13、ZB17、ZB19、ZB21、ZB23、ZB25、ZB29、ZB30、ZB31,共14個(gè)生理小種;ZC群的ZC1、ZC5、ZC11,共3個(gè)生理小種;ZD群的ZD1、ZD5、ZD7,共3個(gè)生理小種;ZE群的ZE1和ZE3,共2個(gè)生理小種;ZF群的ZF1,共1個(gè)生理小種。

    表1 用于擴(kuò)增無(wú)毒基因的引物

    表2 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種鑒定

    續(xù)表2 Continued table 2

    2.2 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因型鑒定

    通過(guò)設(shè)計(jì)10對(duì)無(wú)毒基因特異性引物對(duì)151株稻瘟病菌進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果表明(表3):AVR1-CO39、Avr-pii和Avr-pia在遼寧省稻瘟病菌中未被發(fā)現(xiàn),無(wú)毒基因Avr-Pita、AvrPiz-t、Avr-pik、PWL2和ACE1攜帶頻率較高,攜帶頻率分別為:90.07 %、94.04 %、93.38 %、92.72 %和98.68 %,無(wú)毒基因Avr-pib攜帶頻率較低,僅為27.81 %。

    表3 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因鑒定

    表4 2010-2018年遼寧省稻瘟病菌出現(xiàn)頻率

    2.3 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種種群動(dòng)態(tài)變化

    由表4可知,2010-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種組成中,ZA種群和ZB種群為優(yōu)勢(shì)種群,除2013年外,ZA種群均為第一優(yōu)勢(shì)種群。多數(shù)年份,ZF種群占比僅次于ZA種群和ZB種群,而在2012-2014年ZF種群占比明顯減少。ZC種群自2014年起占比明顯降低。ZD種群和ZE種群雖然在一定的范圍內(nèi)進(jìn)行波動(dòng),但占比率一直較低。ZG種群僅在2012年出現(xiàn),ZH種群一直未出現(xiàn)。

    2.4 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因動(dòng)態(tài)變化

    由表5可知,2014-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因組成中,Avr-pi9、ACE1、Avr-Piz-t、Avr-pik、Avr-pita、PWL2攜帶頻率較高。Avr-pi9在2015年攜帶頻率有所下降,在其余年攜帶頻率均在90 %以上。Avr-pib攜帶頻率在2017年有較大幅度上升,為49.33 %,其2014、2015、2016和2018年出現(xiàn)頻率分別為2.00 %、13.00 %、10.00 %和6.58 %。2014-2018年均未檢測(cè)到無(wú)毒基因AVR1-CO39、Avr-pii和Avr-pia。

    2.5 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種種群分布

    2017-2018年遼寧省稻瘟病菌種群監(jiān)測(cè)結(jié)果(表6)表明:鐵嶺、沈陽(yáng)、丹東、撫順和盤錦地區(qū)稻瘟病菌生理小種種群組成復(fù)雜,分別為6群18個(gè)生理小種、6群18個(gè)生理小種、5群18個(gè)生理小種、5群11個(gè)生理小種和5群14個(gè)生理小種,大連和營(yíng)口地區(qū)相對(duì)單一,分別為4群6個(gè)生理小種和1群2個(gè)生理小種。ZA種群和ZB種群不僅為遼寧地區(qū)的優(yōu)勢(shì)種群,在各個(gè)稻區(qū)也是優(yōu)勢(shì)種群。

    表5 2014-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因出現(xiàn)頻率

    表6 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌生理小種種群分布

    表7 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因型地理分布

    2.6 2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因分布

    2017-2018年遼寧省稻瘟病菌無(wú)毒基因分布結(jié)果(表7)表明:所檢測(cè)的10個(gè)無(wú)毒基因,除AVR1-CO39、Avr-pii和Avr-pia外,其它無(wú)毒基因在遼寧省各個(gè)稻區(qū)均檢測(cè)到。同一地區(qū)的不同無(wú)毒基因的攜帶頻率基本相同。

    3 討 論

    選育和種植抗瘟品種是防治稻瘟病最經(jīng)濟(jì)有效的措施之一,但是單一抗病品種長(zhǎng)時(shí)間大面積推廣種植易對(duì)田間病原菌造成選擇壓力,促使生理小種發(fā)生變異,進(jìn)而造成品種抗性減退甚至喪失[14-15]。鑒于稻瘟病菌及其寄主在世界范圍內(nèi)的重要影響,現(xiàn)在已經(jīng)成為研究植物與病原菌間相互作用的模式生物。根據(jù)“基因?qū)颉睂W(xué)說(shuō),水稻中含有1個(gè)抗性基因(R基因),在稻瘟病菌中就存在1個(gè)相對(duì)應(yīng)的無(wú)毒基因(Avr基因)。R基因通過(guò)識(shí)別Avr基因,啟動(dòng)防衛(wèi)反應(yīng),從而激發(fā)水稻對(duì)稻瘟病菌的抗性。所以只有在水稻中含有R基因,而同時(shí)稻瘟病菌中含有相對(duì)應(yīng)的Avr基因,水稻才表現(xiàn)抗瘟性。水稻抗瘟性研究需要從寄主的抗病基因和稻瘟病菌的無(wú)毒基因同時(shí)入手,才能系統(tǒng)地解決水稻抗稻瘟病的問(wèn)題。本研究利用7個(gè)水稻鑒別品種對(duì)2017-2018年采自遼寧省各個(gè)稻區(qū)的151株稻瘟病菌進(jìn)行生理小種鑒定,并根據(jù)已克隆的10個(gè)稻瘟病菌無(wú)毒基因序列設(shè)計(jì)引物,對(duì)供試菌株進(jìn)行PCR檢測(cè)。結(jié)果表明:供試菌株被劃分為6群41個(gè)生理小種,ZA和ZB為優(yōu)勢(shì)種群,未檢測(cè)到ZG種群。供試菌株全部攜帶無(wú)毒基因Avr-Pi9,大部分菌株攜帶無(wú)毒基因Avr-Pita、AvrPiz-t、Avr-pik、PWL2和ACE1,無(wú)毒基因Avr-pib攜帶頻率較低,無(wú)毒基因Avr-Pii、Avr-CO39和Avr-Pia未檢測(cè)到。

    鐘寶玉等[16]從2006-2015年近10年間收集并分離了廣東各地稻瘟病菌3690個(gè),經(jīng)接種到中國(guó)稻瘟病菌鑒別品種上共鑒定出8群51個(gè)生理小種,其中以ZB群、ZC群和ZG群為主要優(yōu)勢(shì)種群;陳小林等[17]利用我國(guó)7個(gè)稻瘟病菌鑒別品種對(duì)廣西2012-2014年分離獲得的稻瘟病菌進(jìn)行生理小種鑒定。結(jié)果表明:2012-2014年分離獲得的142株稻瘟病菌菌株分為7群24個(gè)生理小種,其中優(yōu)勢(shì)種群為ZB,優(yōu)勢(shì)生理小種為ZB9和ZB13;沈樂(lè)融等[18]針對(duì)2013-2017年從江蘇省采集標(biāo)樣并分離得到的共計(jì)621個(gè)稻瘟病菌菌株,利用10對(duì)稻瘟病菌無(wú)毒基因(PWL1、AVR1-CO39、Avr-Pita、ACE1、Avr-Piz-t、Avr-Pia、Avr-Pii、Avr-Pik、Avr-Pi9和Avr-Pib)特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增,分析了江蘇省稻瘟病菌無(wú)毒基因的分布及頻率,結(jié)果表明:上述10個(gè)無(wú)毒基因在江蘇省均有分布,但出現(xiàn)頻率不同,其中平均擴(kuò)增頻率最高的為Avr-Pib,最低的是Avr-Pia;李祥曉等[19]采用7個(gè)稻瘟病菌無(wú)毒基因(AVR1-CO39、Avr-Pita、ACE1、Avr-Piz-t、Avr-Pia、Avr-Pit和Avr-Pik)特異性引物,對(duì)177個(gè)采自黑龍江省的稻瘟病菌菌株進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果表明:7個(gè)無(wú)毒基因在黑龍江省不同地區(qū)均有分布,但出現(xiàn)頻率不同,其中頻率最高的為ACE1,達(dá)到最低的為AVR1-CO39。由以上可知,不同地區(qū)稻瘟病菌生理小種和無(wú)毒基因組成差異較大,這種不同是由于水稻種植品種變化、品種抗性變化及氣候變化等綜合因素影響的結(jié)果。

    除了地區(qū)差異外,不同寄主的稻梨孢中無(wú)毒基因組成情況也具有較大差異,余歡等[20]對(duì)35株草類寄主的梨孢菌進(jìn)行無(wú)毒基因型分析,結(jié)果表明:所有供試菌株均沒(méi)有Avr-Pik/km/kp、PWL3和PWL4基因,以馬唐為寄主的菌株中沒(méi)有ACE1、Avr-Piz-t、Avr-Pita1和PWL1;以牛筋草為寄主的菌株中沒(méi)有Avr-Pia、Avr-Pita1、Avr-Pita2和PWL2;以狗尾草為寄主的菌株中沒(méi)有Avr-Pii、Avr-Pita、PWL1和PWL2。無(wú)毒基因Avr-CO39可與水稻抗性基因Pi-CO39(t)相互識(shí)別,引起水稻的過(guò)敏性壞死反應(yīng)[21]。但Avr-CO39存在于稻瘟病菌的進(jìn)化早期,并在稻屬?;偷倪M(jìn)化過(guò)程中由于發(fā)生轉(zhuǎn)座子插入,使得稻瘟病菌喪失了Avr-CO39活性。稻瘟病菌中并未發(fā)現(xiàn)具有完整Avr-CO39序列的菌株。而其他寄主的梨孢菌具有完整的Avr-CO39結(jié)構(gòu)[22-23]。

    4 結(jié) 論

    由于稻瘟病菌生理小種和無(wú)毒基因的多樣性和易變性,極易導(dǎo)致優(yōu)良抗瘟水稻品種喪失抗性,水稻品種的抗瘟持久性與其所在地區(qū)稻瘟菌生理小種和無(wú)毒基因的變化緊密相關(guān)[24]。因此,開(kāi)展不同地區(qū)稻瘟病菌生理小種和無(wú)毒基因組成和動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè),引導(dǎo)水稻品種的合理布局,是有效預(yù)防稻瘟病流行的重要手段,也是稻瘟病可持續(xù)治理的長(zhǎng)期性工作。遼寧省稻瘟病菌生理小種和無(wú)毒基因組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜,在遼寧省水稻品種布局中,應(yīng)推廣含有Pita、Pi9、Pizt和Pik抗性基因的水稻品種。

    猜你喜歡
    小種稻瘟病生理
    基于Meta-QTL和RNA-seq的整合分析挖掘水稻抗稻瘟病候選基因
    安徽省稻瘟病菌生理小種鑒定分析
    打破生理“平衡”
    基于BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的旋轉(zhuǎn)血泵生理控制
    年際間干旱對(duì)晚疫病菌生理小種復(fù)雜性的影響
    媽媽們產(chǎn)后的生理煩惱
    Coco薇(2017年5期)2017-06-05 13:03:24
    中國(guó)馬鈴薯晚疫病菌生理小種研究進(jìn)展
    不同藥劑防治苗稻瘟病、葉稻瘟病效果試驗(yàn)研究
    黃淮大豆主產(chǎn)區(qū)大豆胞囊線蟲生理小種分布調(diào)查
    生物綠肥在稻瘟病防治中的應(yīng)用與示范
    最近中文字幕高清免费大全6| 国产亚洲欧美精品永久| 看十八女毛片水多多多| 国产又爽黄色视频| 日韩一区二区三区影片| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品无大码| 亚洲,欧美精品.| 欧美97在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 婷婷成人精品国产| 精品少妇内射三级| 免费大片18禁| 美女国产视频在线观看| 国产一区二区三区av在线| 国产极品天堂在线| 满18在线观看网站| 五月开心婷婷网| 亚洲精品美女久久av网站| 宅男免费午夜| 亚洲精品一二三| h视频一区二区三区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产高清三级在线| av在线老鸭窝| tube8黄色片| videos熟女内射| 免费黄网站久久成人精品| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产精品99久久99久久久不卡 | 蜜桃国产av成人99| 一级黄片播放器| 免费黄色在线免费观看| 在线 av 中文字幕| 国产 精品1| 国产精品99久久99久久久不卡 | 中文天堂在线官网| 亚洲一码二码三码区别大吗| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲精品aⅴ在线观看| 天天操日日干夜夜撸| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日本免费在线观看一区| 亚洲成人av在线免费| 日本免费在线观看一区| av网站免费在线观看视频| 国产精品 国内视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 波野结衣二区三区在线| 国产免费福利视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 亚洲精品自拍成人| 国产精品成人在线| 久久这里只有精品19| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 香蕉国产在线看| av福利片在线| 99香蕉大伊视频| 日韩中字成人| 成人手机av| 欧美精品一区二区免费开放| 久久久亚洲精品成人影院| 中文天堂在线官网| 久久99一区二区三区| 久久免费观看电影| 男女边摸边吃奶| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 成人国语在线视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 青春草亚洲视频在线观看| 9色porny在线观看| 日本av手机在线免费观看| 国产成人av激情在线播放| 亚洲国产最新在线播放| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产片特级美女逼逼视频| 最近的中文字幕免费完整| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产精品蜜桃在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 成人综合一区亚洲| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲第一av免费看| 日韩视频在线欧美| 赤兔流量卡办理| 另类亚洲欧美激情| 大香蕉久久网| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 伊人亚洲综合成人网| 日本av免费视频播放| 日韩三级伦理在线观看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲情色 制服丝袜| 精品卡一卡二卡四卡免费| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 另类精品久久| 内地一区二区视频在线| 在线观看人妻少妇| 熟女av电影| videosex国产| 国产成人精品久久久久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 日日撸夜夜添| 一级a做视频免费观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 女性被躁到高潮视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 美女中出高潮动态图| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产一区二区三区综合在线观看 | 99九九在线精品视频| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲av在线观看美女高潮| 日韩欧美一区视频在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | freevideosex欧美| 极品人妻少妇av视频| 欧美另类一区| 好男人视频免费观看在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日本黄大片高清| 精品国产乱码久久久久久小说| 又大又黄又爽视频免费| 日韩av免费高清视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费黄色在线免费观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 97超碰精品成人国产| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲av国产av综合av卡| 久久久久视频综合| 免费观看性生交大片5| 日本欧美国产在线视频| 久久精品久久久久久久性| 少妇精品久久久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产成人av激情在线播放| 一本大道久久a久久精品| 国产乱来视频区| 97在线人人人人妻| 久久久欧美国产精品| 黑丝袜美女国产一区| 日本与韩国留学比较| 精品国产乱码久久久久久小说| 一边亲一边摸免费视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 色94色欧美一区二区| 一级,二级,三级黄色视频| av免费在线看不卡| 国产av国产精品国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 妹子高潮喷水视频| 精品视频人人做人人爽| 色网站视频免费| 美女主播在线视频| 成人漫画全彩无遮挡| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产国语露脸激情在线看| 精品第一国产精品| 曰老女人黄片| av在线老鸭窝| 少妇高潮的动态图| av播播在线观看一区| 日韩av免费高清视频| 性色avwww在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久婷婷青草| 天堂中文最新版在线下载| 少妇人妻 视频| 久久综合国产亚洲精品| 97人妻天天添夜夜摸| 午夜福利视频在线观看免费| 国产探花极品一区二区| 伊人亚洲综合成人网| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 超碰97精品在线观看| 97超碰精品成人国产| 交换朋友夫妻互换小说| 少妇人妻久久综合中文| 中文字幕av电影在线播放| 国产日韩欧美视频二区| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲av电影在线进入| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美精品av麻豆av| av女优亚洲男人天堂| 日本欧美视频一区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产 一区精品| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲av免费高清在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 大香蕉久久网| 免费观看a级毛片全部| 搡老乐熟女国产| 亚洲国产色片| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲人成77777在线视频| av免费观看日本| 色视频在线一区二区三区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 午夜免费男女啪啪视频观看| 美女大奶头黄色视频| 五月玫瑰六月丁香| 国产免费一区二区三区四区乱码| 纯流量卡能插随身wifi吗| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲天堂av无毛| 视频中文字幕在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 97超碰精品成人国产| 一级片免费观看大全| 日韩三级伦理在线观看| 午夜老司机福利剧场| 成年av动漫网址| 免费大片黄手机在线观看| 国产精品偷伦视频观看了| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲国产最新在线播放| av在线app专区| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲精品,欧美精品| 国国产精品蜜臀av免费| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲少妇的诱惑av| 国产男女超爽视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 青青草视频在线视频观看| 久久精品久久久久久久性| 久久婷婷青草| videosex国产| 日本午夜av视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 另类精品久久| 久久亚洲国产成人精品v| 视频在线观看一区二区三区| 一级毛片电影观看| a 毛片基地| 人妻 亚洲 视频| 22中文网久久字幕| av又黄又爽大尺度在线免费看| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲美女搞黄在线观看| av有码第一页| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久ye,这里只有精品| 亚洲人与动物交配视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| xxx大片免费视频| 亚洲综合精品二区| 国产亚洲精品第一综合不卡 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 在线 av 中文字幕| 精品久久久久久电影网| 国产精品女同一区二区软件| 国产日韩欧美视频二区| 中国美白少妇内射xxxbb| 制服诱惑二区| 黄色怎么调成土黄色| 韩国高清视频一区二区三区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 一区二区三区精品91| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产精品久久久久久精品古装| 久久久久国产网址| 91国产中文字幕| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲成人一二三区av| 久久久久久久久久成人| 哪个播放器可以免费观看大片| 精品少妇久久久久久888优播| 婷婷成人精品国产| 久久婷婷青草| 美女主播在线视频| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美亚洲日本最大视频资源| 99国产精品免费福利视频| av免费观看日本| 亚洲色图综合在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久久久久人人人人人人| av片东京热男人的天堂| 人人澡人人妻人| 99久久人妻综合| 在线天堂最新版资源| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 欧美精品亚洲一区二区| 色5月婷婷丁香| 精品国产一区二区久久| 久久韩国三级中文字幕| 高清在线视频一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 最近的中文字幕免费完整| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一区二区av电影网| av不卡在线播放| 热99久久久久精品小说推荐| 婷婷色综合大香蕉| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | av国产精品久久久久影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 女性生殖器流出的白浆| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产日韩欧美在线精品| 18在线观看网站| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 18禁观看日本| 女人久久www免费人成看片| 精品午夜福利在线看| 国产精品一区www在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 久久国内精品自在自线图片| 日韩电影二区| 国产精品成人在线| 久久精品国产综合久久久 | 日本色播在线视频| 亚洲国产最新在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 在线观看免费日韩欧美大片| 毛片一级片免费看久久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲精品自拍成人| 日日爽夜夜爽网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲成人手机| 在线观看一区二区三区激情| 免费观看av网站的网址| 26uuu在线亚洲综合色| 咕卡用的链子| av视频免费观看在线观看| 99香蕉大伊视频| 一本大道久久a久久精品| 亚洲,欧美,日韩| www.色视频.com| 少妇熟女欧美另类| 成人免费观看视频高清| 日韩av免费高清视频| 晚上一个人看的免费电影| 全区人妻精品视频| 伦理电影免费视频| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产精品一区二区在线不卡| 91成人精品电影| 亚洲一区二区三区欧美精品| 在线观看免费高清a一片| 久久久精品免费免费高清| 男人操女人黄网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品久久久av美女十八| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美国免费a级毛片| 尾随美女入室| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 妹子高潮喷水视频| 99精国产麻豆久久婷婷| xxx大片免费视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产69精品久久久久777片| 精品少妇久久久久久888优播| 极品人妻少妇av视频| 一级毛片 在线播放| 亚洲av免费高清在线观看| 精品人妻在线不人妻| 久久99精品国语久久久| 国产成人a∨麻豆精品| 赤兔流量卡办理| 美女国产视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲国产精品一区三区| 精品亚洲成国产av| 欧美精品一区二区免费开放| 一二三四中文在线观看免费高清| 青春草视频在线免费观看| 99热国产这里只有精品6| 99热6这里只有精品| 大陆偷拍与自拍| 青春草亚洲视频在线观看| av在线老鸭窝| 日本色播在线视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 青春草国产在线视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 国产一区二区在线观看日韩| 下体分泌物呈黄色| 波野结衣二区三区在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久国产欧美日韩av| 日本与韩国留学比较| 欧美国产精品一级二级三级| 日韩一区二区三区影片| 色网站视频免费| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产精品久久久av美女十八| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久国产一区二区| 国产爽快片一区二区三区| 成人亚洲欧美一区二区av| 另类精品久久| 国产av精品麻豆| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产成人精品一,二区| 人人妻人人澡人人看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 午夜免费观看性视频| 日韩大片免费观看网站| 婷婷色av中文字幕| 边亲边吃奶的免费视频| 人妻人人澡人人爽人人| 99re6热这里在线精品视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲一区二区三区欧美精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲国产精品999| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲天堂av无毛| 最近的中文字幕免费完整| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品一区二区在线观看99| 免费高清在线观看日韩| 欧美性感艳星| 考比视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 免费黄网站久久成人精品| 国产黄频视频在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 久久久久国产网址| 国产精品一区二区在线不卡| 成年女人在线观看亚洲视频| 少妇人妻久久综合中文| 久热久热在线精品观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日本欧美国产在线视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费大片18禁| 亚洲丝袜综合中文字幕| 美女国产视频在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av中文av极速乱| 人妻人人澡人人爽人人| 黄色一级大片看看| 久久午夜综合久久蜜桃| 美女中出高潮动态图| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品国产av蜜桃| 91国产中文字幕| 欧美xxxx性猛交bbbb| 在线看a的网站| 亚洲精品国产av成人精品| 女性生殖器流出的白浆| 国产综合精华液| 热99久久久久精品小说推荐| 一边亲一边摸免费视频| 国产高清三级在线| 久久这里只有精品19| 黄色 视频免费看| 成人手机av| 日韩一区二区三区影片| 国产永久视频网站| 在线 av 中文字幕| 插逼视频在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品一区二区在线不卡| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产有黄有色有爽视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久久久久久久成人| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产午夜精品一二区理论片| xxx大片免费视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 草草在线视频免费看| 久久久久久人妻| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲一码二码三码区别大吗| 最后的刺客免费高清国语| 色94色欧美一区二区| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 熟女电影av网| 热re99久久国产66热| 少妇高潮的动态图| 天美传媒精品一区二区| 色5月婷婷丁香| 丰满迷人的少妇在线观看| 少妇的逼水好多| 国产精品免费大片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 丁香六月天网| 日韩大片免费观看网站| 精品亚洲成国产av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| av黄色大香蕉| 日韩中字成人| 欧美日韩亚洲高清精品| av免费观看日本| 香蕉精品网在线| 国产一区二区在线观看日韩| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 五月伊人婷婷丁香| 香蕉精品网在线| 婷婷色综合大香蕉| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产一级毛片在线| 日韩中字成人| 内地一区二区视频在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久鲁丝午夜福利片| 免费观看性生交大片5| 看免费成人av毛片| 久久韩国三级中文字幕| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久精品国产综合久久久 | 国产1区2区3区精品| 亚洲中文av在线| 久久午夜福利片| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲欧美清纯卡通| 永久网站在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美成人午夜精品| 丝袜人妻中文字幕| 久热久热在线精品观看| 日韩精品有码人妻一区| 欧美成人午夜免费资源| 精品一区二区免费观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲精品乱久久久久久| 国产色婷婷99| 欧美另类一区| 深夜精品福利| 一二三四中文在线观看免费高清| 亚洲人成77777在线视频| 春色校园在线视频观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 人妻少妇偷人精品九色| 丝袜人妻中文字幕| 国产精品久久久久久精品古装| 久久精品国产自在天天线| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人精品婷婷| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产综合精华液| 免费高清在线观看日韩| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产亚洲一区二区精品| 成人国产麻豆网| 新久久久久国产一级毛片| 一级片'在线观看视频| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲色图综合在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 下体分泌物呈黄色| 亚洲精品,欧美精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一级毛片 在线播放| 午夜福利乱码中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 五月开心婷婷网| 久久国内精品自在自线图片| 久久久亚洲精品成人影院| 国产成人欧美| 久久久久久伊人网av| 亚洲三级黄色毛片| 久久午夜综合久久蜜桃| 伦理电影大哥的女人|