赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)及薄層色譜分析

潘喬丹 黃元河 莫緒秀 譚文溚 陸海峰

【摘?要】?目的：初步探索赤蒼藤莖的化學(xué)成分，并建立不同極性部分的指紋圖譜。方法：采用植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)法及薄層色譜法對(duì)赤蒼藤莖的化學(xué)成分進(jìn)行分析。結(jié)果：化學(xué)成分預(yù)試法中顯示赤蒼藤莖中含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)、有機(jī)酸、多糖和苷類(lèi)、酚類(lèi)、三萜類(lèi)、揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)化合物等化合物;薄層色譜法顯示石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部分至少含有9、8和8種化合物。結(jié)論：本試驗(yàn)初步確定赤蒼藤莖的化學(xué)成分，為進(jìn)一步研究其藥用價(jià)值提供了理論依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】?赤蒼藤;化學(xué)成分;預(yù)實(shí)驗(yàn);薄層色譜

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）19-0016-06

Abstract：Objective To explore the chemical components in stems of Erythropalum scandens Bl.，and gain finger-print of all abstraction fractions.Methods The chemical components in stems of Erythropalum scandens were tested by the systemic preparative test method and the thin layer chromatography（TLC）.Results The chemical components in stems of Erythropalum scandens included the amino acid， polypeptide， protein， organic acids， polysaccharides， glycosides， phenols， triterpenes， volatile oil， flavonoids， coumarin，and other chemical components by the systemic preparative test method. The analyzed result of TLC showed that 9，8 and 8 kinds of principals were located in the petroleum ether， chloroform， ethyl acetate， and n-butanol.Conclusion This experiment preliminary determined the types of chemical components in stems of Erythropalum scandens， which would provided theoretical bases for developing the medicinal value.

Key?words：Erythropalum scandens Bl; Chemical Components; thin Layer Chromatography; Preliminary Experiment

藥食同源植物赤蒼藤Erythropalum scandens Bl.為鐵青樹(shù)科植物，別名為螞蟥藤、十丈藤、龍須藤等。其性平，微苦，具清熱利濕、祛風(fēng)活血的功效，主治水腫、小便不利、黃疸、半身不遂、風(fēng)濕骨痛和跌打損傷等[1]，在民間用于清熱利濕、去黃疸，其嫩葉、莖可食用。赤蒼藤可用于尿酸、風(fēng)濕骨病、肝膽濕熱、腹痛、腹瀉、尿頻、尿急、尿痛、小便不利等癥[1-2]，并具有較高的食用價(jià)值現(xiàn)已引起廣泛關(guān)注。前期課題組也實(shí)驗(yàn)證實(shí)赤蒼藤能預(yù)防和治療高尿酸血癥[3]，現(xiàn)代藥理研究證實(shí)赤蒼藤莖葉水提物具有抗痛風(fēng)作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)赤蒼藤莖根的化學(xué)成分中含有蘇門(mén)樹(shù)脂酸、桂皮酸松柏醇酯、酚類(lèi)及三萜類(lèi)化合物[5]。國(guó)內(nèi)外學(xué)生通過(guò)GC-MS技術(shù)從赤蒼藤葉揮發(fā)油中分析出二十七烷、1-辛烯- 3-醇等鏈狀脂肪族、芳香族和萜類(lèi)化合物[6]，從赤蒼藤根莖乙酸乙酯部位分析出脂肪酸、烯酸類(lèi)共13個(gè)化合物[7]。目前對(duì)赤蒼藤莖的研究主要集中在根莖部位，其化學(xué)成分主要為羧酸類(lèi)、萜類(lèi)和揮發(fā)性成分等。而赤蒼藤起到降尿酸作用的主要部位是莖，目前對(duì)這些活性部位化學(xué)成分的缺少系統(tǒng)研究。為了更好地明確其降尿酸有效成分，本次研究采用植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試法和薄層色譜法對(duì)赤蒼藤莖的化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，為日后的提取、分離、純化奠定基礎(chǔ)。

1?材料與儀器

1.1?材料?赤蒼藤（Erythropalum scandens Bl.）莖粉末購(gòu)置廣西赤蒼藤生物科技有限責(zé)任公司，經(jīng)過(guò)右江民族醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物教研室黃元河副教授鑒定。

1.2?試劑?石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮、二氯甲烷、氯仿、95%乙醇、濃硫酸、氫氧化鈉、鹽酸、三氯化鐵、硫酸銅，酒石酸鉀鈉、醋酸鎂、氯化鈉、醋酸、香草醛、氨水、雙氧水、氫氧化鉀（西隴科學(xué)股份有限公司，分析純）;間二硝基苯甲酸、α-萘酚、茚三酮、氨水、鐵氰化鉀、溴酚藍(lán)、碘化鉍鉀、碘化汞鉀、鹽酸羥胺、硅鎢酸（上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司，分析純）;鎂粉（浙江常青化工有限公司）、明膠（北京沃凱生物科技有限公司，化學(xué)純）;去離子水，自制。

1.2?儀器?RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）;低溫冷卻循環(huán)泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）HHS-21-4電熱式恒溫水浴鍋（江蘇金壇宏凱儀器廠）;SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式多用真空泵（河南省予華儀器有限公司）;FA1004型電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）;ZF-2暗箱式紫外分析儀（北京凱迪萊特儀器設(shè)備有限公司）;薄層層析硅膠板HSGF254（煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司）;H2OBASIC-B超純水機(jī)（德國(guó)賽多利斯集團(tuán)）。

2?方法與結(jié)果

2.1?實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1?赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)?參照《天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)》[9] 和 《中藥化學(xué)》[10]中介紹的預(yù)試驗(yàn)方法對(duì)赤蒼藤莖的化學(xué)成分進(jìn)行分析。

2.1.1.1?水供試液的制備?稱(chēng)取赤蒼藤莖粉末50 g于圓底燒瓶中，加水500 mL，放在50～60℃的水浴鍋上加熱約2～3 h后趁熱抽濾，檢測(cè)濾液中是否含有糖、有機(jī)酸、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酚類(lèi)、生物堿、苷類(lèi)或多糖、鞣質(zhì)等成分。

2.1.1.2?石油醚供試液的制備?稱(chēng)取赤蒼藤莖粉末50 g于圓底燒瓶中，加入石油醚400 mL，塞緊密閉，并且不定時(shí)的搖蕩，靜置12 h，抽濾，得石油醚供試液，其檢查項(xiàng)目與水供試液一樣。

2.1.3?乙醇供試液的制備?稱(chēng)取赤蒼藤莖粉末100 g，按料液比1∶10（g/mL）加入70% 乙醇，加熱回流提取1 h，抽濾，取濾液檢測(cè)是否含有有機(jī)酸、內(nèi)酯及甾體、酚類(lèi)、鞣質(zhì)、苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)、三帖皂苷類(lèi)、蒽醌類(lèi)等化學(xué)成分。

2.2?赤蒼藤莖化學(xué)成分薄層色譜分析

2.2.1?赤蒼藤莖不同極性部分浸膏的制備?稱(chēng)取赤蒼藤莖粉末200g于圓底燒瓶中，按料液比1∶10（g/mL）加入95% 乙醇，加熱回流提取 1 h，抽濾，重復(fù)3 次后合并所得濾液，減壓濃縮得到乙醇提取物浸膏。浸膏先用蒸餾水混懸后，按照極性大小，逐級(jí)用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮后，分別得到石油醚層、乙酸乙酯層、正丁醇層三種赤蒼藤莖不同極性部分的浸膏。

2.2.2?赤蒼藤莖化學(xué)成分薄層色譜分析?用毛細(xì)管取以上不同極性的萃取部分點(diǎn)樣于HSGF254硅膠薄板上，分別置于不同的展開(kāi)系統(tǒng)中展開(kāi)，當(dāng)溶劑前沿距板上端約 1 cm時(shí)取出，揮干展開(kāi)劑。先在紫外光下（254、365nm）觀察熒光，然后分別用碘蒸氣和5%硫酸乙醇顯色，記錄各斑點(diǎn)顏色及Rf值。

2.3?實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1?赤蒼藤莖化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1.1?赤蒼藤莖水提取液預(yù)試結(jié)果?赤蒼藤莖水提取物中有氨基酸、多肽蛋白質(zhì)類(lèi)、有機(jī)酸、多糖和苷類(lèi)、酚類(lèi)。見(jiàn)表1。

2.3.1.2?赤蒼藤莖石油醚提取液預(yù)試結(jié)果?石油醚提取物化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，三萜類(lèi)、揮發(fā)油、油脂類(lèi)反應(yīng)現(xiàn)象與反應(yīng)指標(biāo)相符合，為陽(yáng)性表現(xiàn)。結(jié)果表明赤蒼藤莖石油醚提取物中有三萜類(lèi)、揮發(fā)油、油脂類(lèi)化合物。見(jiàn)表2。

2.3.1.3?赤蒼藤莖醇提取液預(yù)試結(jié)果?赤蒼藤莖醇提取物中，黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、有機(jī)酸、三萜類(lèi)、生物堿類(lèi)、香豆素類(lèi)化合物的反應(yīng)現(xiàn)象與反應(yīng)指標(biāo)相同，而強(qiáng)心苷類(lèi)則沒(méi)有與反應(yīng)指標(biāo)相同的反應(yīng)現(xiàn)象，根據(jù)結(jié)果可知，赤蒼藤莖醇提取物中可能有黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、生物堿類(lèi)、三萜類(lèi)、香豆素類(lèi)化合物，而不含強(qiáng)心苷類(lèi)。見(jiàn)表3。

2.3.2?赤蒼藤莖不同極性部位薄層色譜分析

2.3.2.1?石油醚部分?赤蒼藤莖石油醚部分用4種展開(kāi)劑展開(kāi)，見(jiàn)表4。由表4可知，V（石油醚）∶V（乙酸乙酯）=8∶3的展開(kāi)效果最佳，用5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)9個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見(jiàn)3個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見(jiàn)4個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

2.3.2.2?乙酸乙酯部分?赤蒼藤莖乙酸乙酯部分用4種展開(kāi)劑展開(kāi)，見(jiàn)表5。由表5可知，V（石油醚）：V（丙酮）=8∶3的展開(kāi)效果最佳，5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見(jiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見(jiàn)4個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

2.3.2.3?正丁醇部分?赤蒼藤莖正丁醇部分用4種展開(kāi)劑展開(kāi)，見(jiàn)表6。由表6可知，V（氯仿）：V（甲醇）：V（水）=6∶2∶0.2的展開(kāi)效果最佳，用5%硫酸乙醇顯色呈現(xiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，254 nm熒光下可見(jiàn)7個(gè)斑點(diǎn)，365 nm熒光下可見(jiàn)8個(gè)斑點(diǎn)，如圖1所示。

3?討論

薄層色譜技術(shù)和中藥化學(xué)預(yù)實(shí)驗(yàn)均是迅速、簡(jiǎn)單、結(jié)果可以直接觀察的檢測(cè)技術(shù)[10]。到目前在植物化學(xué)成分定性分析使用范圍比較廣、使用頻率高。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示赤蒼藤莖水提取物中有氨基酸、多肽蛋白質(zhì)類(lèi)、有機(jī)酸、多糖和苷類(lèi)、酚類(lèi);赤蒼藤莖石油醚提取物中有三萜類(lèi)、揮發(fā)油、油脂類(lèi)化合物;赤蒼藤莖醇提取物中有黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、生物堿、三萜類(lèi)、香豆素類(lèi)化合物。目前研究發(fā)現(xiàn)在一些植物種多糖、黃酮類(lèi)、苷類(lèi)、酚類(lèi)、香豆素類(lèi)化合物具有較好的降尿酸活性[11-15]，通過(guò)化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)，筆者初步推測(cè)，赤蒼藤莖中降尿酸主要成分來(lái)源于水提取物和醇提取物，這和動(dòng)物活性實(shí)驗(yàn)相印證[3-4]。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)赤蒼藤莖醇提取物各部分進(jìn)行薄層色譜分析，其石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部分至少含9、8、8種化合物。本試驗(yàn)初步確定赤蒼藤莖可能含有的化學(xué)成分，為進(jìn)一步研究該植物生物活性成分的提取、分離和純化提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，及其各萃取部分的指紋圖譜建立提供依據(jù)。

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（收稿日期：2020-05-04?編輯：程鵬飛）