不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸含量分析

單莉，陳莉，楊潔，徐晨昱，孟楣

作者單位：安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部三級實驗室，安徽 合肥230031

木瓜為薔薇科植物貼梗海棠Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai的干燥成熟果實［1］，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載：“木瓜，生夷陵”（夷陵，今湖北宜昌附近）；《本草經(jīng)集注》：“山陰蘭亭尤多，今處處有之，而宣城者為佳。”；《本草乘雅半偈》中也有“木瓜處處有之，西雒者最勝，宣城者亦佳，山陰蘭亭尤多也。”的記載；《本草綱目》中有“木瓜處處有之，而宣城者為佳”的記載。可見，本草古籍中木瓜的產(chǎn)地為安徽、湖北等地。

現(xiàn)代木瓜的主要產(chǎn)區(qū)有安徽、湖北、重慶等地［2-3］，與本草古籍中的記載基本吻合。綜上所述，本課題組選擇安徽、湖北、重慶三地的木瓜進行質(zhì)量比較。文獻研究顯示，木瓜中化學(xué)成分眾多［4-7］，不同產(chǎn)地木瓜質(zhì)量的比較中已進行木瓜多糖含量、多種有機酸含量等的研究［8-10］，而針對有效成分齊墩果酸/熊果酸含量比值進行研究的文獻較少，因此，本課題組于2017年6月至2018年6月以齊墩果酸、熊果酸的含量為指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）進行含量測定和SPSS軟件分析比較不同產(chǎn)地木瓜質(zhì)量，為木瓜藥材質(zhì)量評價提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器美國Agilent1260高效液相色譜儀（DAD檢測器、四元低壓梯度泵、在線脫氣裝置和自動進樣器）；BP211D電子天平（SartoriusBP211D）；超聲波清洗器（KQ-300VDE，昆山市超聲儀器有限公司）；水浴鍋（HH-S，鞏義市英峪予華儀器廠）。

1.2試劑甲醇為色譜純；對照品：齊墩果酸（批號110709-201206）、熊果酸（批號110742-200314），均購于中國食品藥品檢定研究院；其余試劑均為分析純。38批（安徽產(chǎn)地19批，湖北產(chǎn)地13批，重慶產(chǎn)地6批）木瓜藥材經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源教研室彭華勝教授鑒定為皺皮木瓜Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai，基源均為貼梗海棠。

1.3實驗方法

1.3.1 供試品制備 取干燥木瓜細粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補足失去質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.3.2 對照品的制備 分別稱取齊墩果酸、熊果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1毫升含齊墩果酸1.01 mg、熊果酸1.43 mg的混合對照品母液；精密量取混合對照品母液適量，加甲醇稀釋成每1毫升含齊墩果酸0.101 mg、熊果酸0.143 mg的混合對照品儲備液。

1.3.3 色譜條件［11-12］色譜柱：Agilent 5HC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（265∶35∶0.1∶0.05）等度洗脫；檢測波長：210 nm；流速：0.6 mL/min；柱溫：25℃；進樣量：20μL。供試品色譜中齊墩果酸和熊果酸峰的保留時間與對照品的保留時間一致（圖1），理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計不低于5 000，分離度大于1.5。

圖1 對照品（A）與木瓜供試品（B）高效液相色譜圖

1.3.4 方法學(xué)考察 在“1.3.3”項下進行方法學(xué)考察，齊墩果酸在檢測濃度范圍為0.020～0.202 g/L，熊果酸在檢測濃度范圍為0.029～0.286 g/L內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，精密度試驗良好，供試品中的齊墩果酸和熊果酸在24 h內(nèi)穩(wěn)定，本方法重復(fù)性良好。加樣回收率試驗齊墩果酸平均回收率為100.04%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.65%，熊果酸平均回收率為99.45%，RSD為1.56%，表明結(jié)果可靠。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料以xˉ±s表示，多組間比較方差齊性則采用單因素方差分析；方差不齊則采用Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義則進行多組間的兩兩比較。以Freeman-Halton檢驗比較各產(chǎn)地達標(biāo)率。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較Kruskal-Wallis非參數(shù)檢驗表明湖北產(chǎn)地齊墩果酸含量顯著高于安徽、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；湖北產(chǎn)地熊果酸含量顯著低于安徽、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；安徽產(chǎn)地總含量顯著高于湖北、重慶兩產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）。湖北產(chǎn)地總含量標(biāo)準(zhǔn)差最小，均一性較好；重慶產(chǎn)地總含量標(biāo)準(zhǔn)差最大，離散程度較大。見表1。

2.2各產(chǎn)地木瓜總含量達標(biāo)率在現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)（≥5.0 mg/g）下，安徽產(chǎn)區(qū)總含量達標(biāo)率高于重慶產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）；提高標(biāo)準(zhǔn)（≥6.0 mg/g）表明安徽產(chǎn)區(qū)總含量達標(biāo)率高于湖北產(chǎn)區(qū)（P＜0.05）。見表2。

表1 各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較/

表1 各產(chǎn)地木瓜含量測定結(jié)果比較/

注：與湖北產(chǎn)地比較，aP＜0.05；與安徽產(chǎn)地比較，bP＜0.05

產(chǎn)地安徽湖北重慶H值P值齊墩果酸/熊果酸含量比值1.0±0.3a 5.6±1.0 2.1±2.8a 18.454＜0.001批數(shù)19 13 6齊墩果酸含量/（mg/g）3.2±0.8a 4.6±0.4 1.9±0.9a 19.962＜0.001熊果酸含量/（mg/g）3.4±0.9a 0.8±0.1 3.5±1.9a 18.246＜0.001總含量/（mg/g）6.6±1.2 5.5±0.4b 5.4±1.7b 11.377 0.003

表2 各產(chǎn)地木瓜齊墩果酸與熊果酸總含量不同標(biāo)準(zhǔn)下達標(biāo)率/%

3 討論

3.1產(chǎn)地對木瓜質(zhì)量的影響課題組在2009年對不同產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸進行過初步研究［13］，涉及皺皮木瓜及其不同亞型品種、光皮木瓜和榠楂等不同基源的含量比較，存在采樣量少和部分品種不是現(xiàn)行藥典收載品種等問題。隨著中藥木瓜的種植栽培技術(shù)的發(fā)展，皺皮木瓜得到廣泛的種植，故本次實驗在前期研究基礎(chǔ)上，選擇基源為貼梗海棠的木瓜藥材，以齊墩果酸、熊果酸含量為指標(biāo)，不局限于宣城、資丘等地，擴大采樣范圍，加大樣本量。研究表明，湖北產(chǎn)地木瓜的市場占有率較高，但其熊果酸含量較低；安徽產(chǎn)地木瓜藥材總含量最高，齊墩果酸、熊果酸含量均較高；重慶產(chǎn)地總含量離散程度較大，提示均一性較差；提高現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)（≥6.0 mg/g），安徽產(chǎn)地木瓜總含量達標(biāo)率高于湖北產(chǎn)地；綜上可知，安徽產(chǎn)地木瓜質(zhì)量較優(yōu)良，與古籍中記載的道地產(chǎn)區(qū)不謀而合。

3.2齊墩果酸/熊果酸含量比值對不同產(chǎn)地木瓜藥材的區(qū)分含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)行藥典含量標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，安徽產(chǎn)地、湖北產(chǎn)地達標(biāo)率均為100%，不能對此2個產(chǎn)地木瓜進行質(zhì)量劃分。本課題組在藥典總量控制的基礎(chǔ)上，考察了齊墩果酸/熊果酸含量比值，發(fā)現(xiàn)安徽產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸含量比值為（1.0±0.3），接近1.0；而湖北產(chǎn)地木瓜中齊墩果酸與熊果酸含量比值（5.6±1.0），接近5.6；可作為兩主要產(chǎn)地的質(zhì)量劃分依據(jù)之一，彌補現(xiàn)行藥典對質(zhì)量控制的不足。本研究利用齊墩果酸/熊果酸含量比值可以將安徽產(chǎn)地與湖北產(chǎn)地木瓜進行區(qū)分；但此次實驗中重慶產(chǎn)地樣本量較少，未能明確其與安徽產(chǎn)地在比值上的差異性，將在后續(xù)的實驗中進一步研究。