如何抓住新型冠狀病毒狡猾的尾巴

陳新飛 徐英春

2020年3月，關于新型冠狀病毒檢測試劑盒的報道層出不窮，各企業(yè)紛紛宣布成功研制出新型冠狀病毒檢測試劑盒。目前，市面上檢測試劑盒主要包括分子生物學檢測試劑盒和檢測抗原、抗體的免疫學試劑盒。面對這些檢測原理各不相同的試劑盒，大家可能一頭霧水，為什么會有這么多檢測新型冠狀病毒的試劑盒呢？它們之間到底有什么不同呢？下面我們一一揭曉。

分子生物學檢測

分子生物學檢測以檢測病毒核酸（特異性遺傳物質(zhì)）為主，通過采集患者的鼻、咽拭子，痰液或肺泡灌洗液等樣本，提取其中可能存在的新型冠狀病毒核酸（該病毒核酸為RNA）。由于RNA（核糖核酸）相較DNA（脫氧核糖核酸）不穩(wěn)定易降解，需將其逆轉(zhuǎn)錄為DNA，再對DNA進行擴增檢測。目前應用最廣泛的分子生物學檢測方法是RT-PCR1——實時熒光定量PCR，采用針對新型冠狀病毒的開放閱讀框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核殼蛋白N等保守基因序列（病毒的特征）設計的引物[1-2]，通過熒光標簽進行可視化的擴增。除RT-PCR外，數(shù)字PCR、巢式PCR、等溫擴增技術(shù)和高通量測序技術(shù)也逐漸應用于新型冠狀病毒的檢測[3-4]。相比于免疫學檢測，分子生物學檢測靈敏度和特異性均顯著提高，缺點是耗時較長，對實驗設備及檢測人員能力要求較高。

免疫學檢測

新型冠狀病毒的免疫學檢測主要是通過檢測患者體內(nèi)的特異性抗體或病毒抗原來實現(xiàn)。患者在感染新型冠狀病毒后，機體會進行反擊抵抗，派遣專業(yè)的作戰(zhàn)部隊——抗體（免疫球蛋白，主要是Ig M和Ig E），與侵入人體的外敵——抗原（新型冠狀病毒）特異性結(jié)合并將其消滅。常見的特異性抗體檢測方法是化學發(fā)光免疫分析法，其核心原理為使用酶標抗體結(jié)合磁珠微粒包被的病毒抗原以捕獲的血液中特異性抗體，該復合體與底物作用會產(chǎn)生光信號。通俗來講，就是給抗體作戰(zhàn)部隊配發(fā)特殊顏色的頭盔，通過對這個特殊標識的檢測即可識別特異性抗體。

除了檢測抗體外，對外敵病毒抗原的檢測也是免疫學檢測的重點。抗原檢測主要通過免疫層析法檢測標本中新型冠狀病毒的核殼蛋白N（nucleocapsid protein，N），其核心原理與上述方法類似，通過膠體金（顯色標記物）標記的抗體與病毒抗原及包被抗體結(jié)合進行檢測。

目前，免疫學檢測方法主要應用于血液中特異性Ig M、Ig E抗體和新型冠狀病毒的抗原檢測，相比分子生物學檢測，其耗時較短，操作簡便，疾病不同時期敏感度不同，更適合流行病學篩查。

近日，也有文獻報道在感染患者糞便中檢測新型新冠病毒。聽起來像是一個新的檢測方法，其實它也是基于糞便樣本，檢測病毒核酸而實現(xiàn)的。此外，也有研究者通過培養(yǎng)糞便標本中的冠狀病毒，然后再基于分子生物學方法進行病毒鑒定。雖然培養(yǎng)法是病原學檢測的金標準，但由于培養(yǎng)周期較長，實驗室要求高，目前不能全面開展。

新型冠狀病毒的不同檢測方法原理不盡相同，無論是免疫學檢測還是分子生物學檢測，每種檢驗方法都有其局限性，由此，中國疾控中心專家建議在新型冠狀病毒的診斷中聯(lián)合使用不同類型的試劑盒，做到取長補短。同時也不能忽視CT影像學檢測結(jié)果，結(jié)合患者臨床癥狀進行綜合診療。

參考文獻

[1] YU F. Measures for diagnosing and treating infections by a novel coronavirus responsible for a pneumonia outbreak originating in Wuhan， China. Microbes Infect， 2020.

[2] CHU D. Molecular Diagnosis of a Novel Coronavirus （2019-nCoV） Causing an Outbreak of Pneumonia. Clin Chem， 2020.

[3] 中國計量科學研究院.中國計量院成功研發(fā)新冠病毒高靈敏數(shù)字PCR檢測方法和檢測試劑盒[EB/OL].（2020-02-19）[2020-02-23].https：//www.nim.ac.cn/node/1339.

[4] CHEN L. RNA based mNGS approach identifies a novel human coronavirus from two individual? pneumonia cases in 2019 Wuhan outbreak. Emerg Microbes Infect， 2020.