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    提出優(yōu)化措施 解決抗壞血酸前處理工作中遇到的問題

    2020-12-07 05:53:46盧竹陽
    中國食品 2020年21期
    關(guān)鍵詞:抗壞血酸硅膠雜質(zhì)

    盧竹陽

    利用GB 5009.86-2016標(biāo)準(zhǔn)測定食品中抗壞血酸時(shí),在前處理工作中我們經(jīng)常會(huì)遇到一些問題,下面筆者針對(duì)這些問題提出優(yōu)化措施,為抗壞血酸的檢測提供一些參考。

    一、前處理過程中遇到的問題

    1.配制流動(dòng)相時(shí),6.8g磷酸二氫鉀和0.91g十六烷基三甲基溴化銨,用水溶解并定容至1L(用磷酸調(diào)pH至2.5-2.8),產(chǎn)生很多泡沫,難定容。

    2.對(duì)上述流動(dòng)相(用A表示)進(jìn)行抽濾脫氣時(shí),發(fā)現(xiàn)試劑很難過濾下來。

    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,發(fā)現(xiàn)C18色譜柱出現(xiàn)堵塞現(xiàn)象。

    二、優(yōu)化措施

    1.針對(duì)流動(dòng)相產(chǎn)生很多泡沫難定容的問題,筆者建議應(yīng)在接近定容線的時(shí)候先讓溶液靜置一會(huì)兒,待泡沫漸漸消退后再緩慢加水定容。

    2.針對(duì)抽濾流動(dòng)相A時(shí)難過濾的問題,首先先確定濾膜選擇是否正確,如果濾膜正確那就是流動(dòng)相的問題。對(duì)于實(shí)驗(yàn)涉及到流動(dòng)相A和流動(dòng)相B,有時(shí)候會(huì)采取雙通道按一定比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn),也有時(shí)候會(huì)先按一定比例混合,再單通道(100%)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),所以,既然抽濾流動(dòng)相A時(shí)難抽濾,那可以按標(biāo)準(zhǔn)上A:甲醇(98:2)的比例,進(jìn)行混合抽濾脫氣,便會(huì)發(fā)現(xiàn)很容易抽濾下來。這時(shí)也需要注意應(yīng)緩慢抽濾,減少泡沫的產(chǎn)生,結(jié)束時(shí)靜置一會(huì)兒,待泡沫消掉。

    3.關(guān)于色譜柱堵塞問題,主要來源于三個(gè)方面:流動(dòng)相、固定相、樣品。首先分析流動(dòng)相。本次實(shí)驗(yàn)的色譜柱:Eclipse XDB-C18、粒徑5μm、長度4.6×250mm,建議的pH范圍:2.0-9.0,最高操作溫度:60℃,新開啟使用的色譜柱,100%甲醇激活,流動(dòng)相均超聲或抽濾脫氣,現(xiàn)配現(xiàn)用,流動(dòng)相的pH在2.5-2.8,柱溫25℃,色譜柱使用條件符合要求,所以流動(dòng)相導(dǎo)致色譜柱堵塞的可能性較小。

    接下來分析固定相。生成硅膠材料的純度、微量金屬的含量、硅醇基的活性,都可能影響硅膠固定相的色譜行為。硅膠表面的硅醇基與堿性化合物反應(yīng)可導(dǎo)致峰形拖尾和色譜分離度的損失。硅膠中含有的痕失量金屬雜質(zhì),是引起色譜峰形拖尾和柱效損失的另一個(gè)因素。樣品中的一些組分還會(huì)與固定相產(chǎn)生反應(yīng),特別是胺基柱表現(xiàn)最為明顯,因?yàn)榘坊着c醛、酮的羰基反應(yīng)形成席夫(Schiff)堿而減少活性點(diǎn),使樣品的保留時(shí)間縮短。綜合以上因素,都不會(huì)導(dǎo)致色譜柱堵塞,所以固定相導(dǎo)致色譜柱堵塞的可能性較小。

    最后分析樣品。樣品中含有一些對(duì)分析不利的物質(zhì),這些非目標(biāo)物能夠被檢測器檢測到而形成色譜峰、氣泡、基線漂移或負(fù)峰。其中保留值弱的物質(zhì),一般能快速從色譜柱洗脫出來,對(duì)分析不產(chǎn)生干擾;中等保留強(qiáng)度的雜質(zhì)能被緩慢沖洗出來,對(duì)分析產(chǎn)生一定干擾;強(qiáng)保留雜質(zhì)通常難以被洗脫,多次上樣后,聚集在柱頭或色譜柱中,有的分析物甚至可能在通過色譜柱時(shí)與固定相發(fā)生作用,這些被吸附的雜質(zhì)累積到一定程度后就會(huì)引起色譜柱堵塞。測定抗壞血酸的前處理過程中,涉及到主要試劑是偏磷酸溶液(200g/L、20 g/L),所以有可能是偏磷酸溶液引起了色譜柱的堵塞。為了防止其堵塞色譜柱,配制偏磷酸溶液時(shí)應(yīng)快速攪拌,加速溶解,并對(duì)其進(jìn)行抽濾脫氣,可以減少檢測干擾,更有效地分離,降低分析誤差。

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