活血榮絡(luò)方調(diào)節(jié)自噬治療阿爾茨海默病的分子機(jī)制研究*

陳瑤，楊仁義，傅馨瑩，周德生，宋洋

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙410208

阿爾茨海默?。╝lzheimer disease，AD）是一種以記憶力下降、行為改變及認(rèn)知功能障礙為主要表現(xiàn)的中樞神經(jīng)退行性疾病。我國(guó)AD患者600萬(wàn)～800萬(wàn)，呈上升趨勢(shì)，預(yù)計(jì)2040年將成為世界第一大發(fā)病國(guó)［1］。AD的防治是當(dāng)前亟待解決的社會(huì)問(wèn)題，但是其發(fā)病機(jī)制及藥物治療仍是醫(yī)學(xué)的重大難題。自噬作為細(xì)胞程序性死亡方式之一，能通過(guò)清除受損細(xì)胞器、錯(cuò)誤蛋白質(zhì)，同時(shí)回收必要氨基酸等物質(zhì)調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，在神經(jīng)細(xì)胞衰老中發(fā)揮重要作用。

中醫(yī)將AD歸屬于“癡呆”“神呆”等范疇，病機(jī)與五臟虛弱，腦髓生成乏源或腦絡(luò)不通，腦髓不純有關(guān)，腦氣凝滯皆由氣血不暢所致，腦與臟腑之氣不接，腦中氣血虧虛或不通是癡呆的關(guān)鍵病機(jī)。筆者根據(jù)癡呆病因病機(jī)，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為癡呆病機(jī)屬榮氣虛滯范疇。榮氣虛，腦脈失養(yǎng)，生髓乏源；又榮氣滯，痰濁瘀血內(nèi)生，相互搏結(jié)，蒙蔽清竅，腦髓不純，二者消長(zhǎng)失衡致神機(jī)失用，發(fā)為呆病。以“陰虛血瘀-榮氣虛滯”理論立方的活血榮絡(luò)方，由雞血藤30 g，黃精15 g，乳香10 g，川芎10 g，石楠藤30 g，生地黃15 g，沒(méi)藥10 g組成?；钛獦s絡(luò)方中雞血藤、石楠藤共為君，補(bǔ)血活血以通經(jīng)活絡(luò)；黃精、生地黃共為臣，補(bǔ)血滋陰以補(bǔ)髓填精，調(diào)氣機(jī)以助雞血藤、石楠藤補(bǔ)血活血，補(bǔ)真陰以滋腦髓空虛；乳香、沒(méi)藥共為佐，通經(jīng)活絡(luò)兼以化瘀止血，助雞血藤、石楠藤之活血之功，以暢氣機(jī)；川芎為使，味薄而氣芳，升達(dá)頭目，透暢巔頂，多竅而質(zhì)不堅(jiān)，可貫脈透表，內(nèi)外肢節(jié)，攜諸藥直達(dá)病灶。諸藥合用，共奏滋陰活血、通經(jīng)活絡(luò)之功，對(duì)癡呆陰虛血瘀證頗為有效。本研究為進(jìn)一步揭示活血榮絡(luò)方治療癡呆的分子機(jī)制，采用生物信息學(xué)聯(lián)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，從分子網(wǎng)絡(luò)角度對(duì)活血榮絡(luò)方進(jìn)行多成分、多靶點(diǎn)分析，并探討其通過(guò)自噬治療AD的分子機(jī)制，為活血榮絡(luò)方治療AD提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 活血榮絡(luò)方有效活性化合物的篩選采用TCMSP［2］（http：／／lsp.nwu.edu.cn／tcmsp.php）數(shù)據(jù)庫(kù)，以O(shè)B≥30%，DL≥0.18%，BBB≥-0.3為篩選條件［3］，獲取活血榮絡(luò)方君藥雞血藤，臣藥黃精，佐藥乳香，使藥川芎的有效活性化合物。

1.2 活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)與“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)的獲取通過(guò)PubChem［4］（https：／／pubchem.ncbi.nlm.nih.gov／）與 Chemspider［5］（http：／／www.chemspider.com／）數(shù)據(jù)庫(kù)，獲取活血榮絡(luò)方有效活性化合物3D結(jié)構(gòu)式，并導(dǎo)入Swiss Target Prediction［6］（http：／／www.swisstargetprediction.ch／）數(shù)據(jù)庫(kù)，以獲取活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)。

通過(guò)GeneCards（https：／／www.genecards.org／）數(shù)據(jù)庫(kù)，以“Alzheimer Disease”和“Autophagy”為檢索詞，以Score值≥10為限定條件篩選疾病作用靶點(diǎn)［7］，以獲取AD和自噬的作用靶點(diǎn)。

取“活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)”“AD靶點(diǎn)”與“自噬靶點(diǎn)”的交集，并通過(guò)Bioinformatics（http：／／bioinformatics.psb.ugent.be／webtools／Venn／）實(shí)驗(yàn)室的“韋恩圖”工具，繪制韋恩圖。

1.3 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建通過(guò)String［8］（https：／／string-db.org／）數(shù)據(jù)庫(kù)，設(shè)定最低要求互動(dòng)分?jǐn)?shù)為中度信度0.400［9］，導(dǎo)入“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)，以獲取蛋白互作（PPI）信息。采用Cytoscape 3.7.2中Network analyzer功能分析PPI信息，計(jì)算Degree值及可視化，同時(shí)結(jié)合WebGestalt［10］軟件計(jì)算“隨機(jī)游走概率”。

1.4 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO和KEGG富集分析通過(guò)WebGestalt［10］（http：／／www.webgestalt.org／＃）數(shù)據(jù)庫(kù)，采用“ORA”算法，導(dǎo)入“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)，獲取GO（BP、CC、MF）和KEGG富集分析數(shù)據(jù)，進(jìn)行“加權(quán)集合覆蓋”分析，并繪制火山圖。

1.5 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)miRNA預(yù)測(cè)及網(wǎng)絡(luò)分析通過(guò)TargetScan［11］（http：／／www.targetscan.org／mamm_31／）數(shù)據(jù)庫(kù)，導(dǎo)入“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)，以獲取其反向預(yù)測(cè)的miRNA，利用Cytoscape 3.7.2軟件將mRNA-miRNA互作關(guān)系可視化。

利用WebGestalt（http：／／www.webgestalt.org／＃）數(shù)據(jù)庫(kù)，導(dǎo)入“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)，進(jìn)行反向miRNA預(yù)測(cè)，基本參數(shù)設(shè)定同1.4項(xiàng)下，進(jìn)行“Network-miRNA”預(yù)測(cè)和加權(quán)集合覆蓋分析，將兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)篩選并收集的miRNA整合分析。

2 結(jié)果

2.1 活血榮絡(luò)方有效活性化合物的篩選采用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)獲取422個(gè)活血榮絡(luò)方活性化合物，君藥雞血藤68個(gè)；臣藥黃精38個(gè)；佐藥乳香127個(gè)；使藥川芎189個(gè)，篩選后獲得活血榮絡(luò)方中雞血藤14個(gè)、黃精7個(gè)、乳香8個(gè)、川芎6個(gè)有效活性化合物。見(jiàn)表1。

2.2 活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)與“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)通過(guò)Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)活血榮絡(luò)方有效活性化合物靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)，得到雞血藤303個(gè)靶點(diǎn)，黃精240個(gè)靶點(diǎn)，乳香171個(gè)靶點(diǎn)，川芎314個(gè)靶點(diǎn)，去除重復(fù)值保留唯一值，獲取567個(gè)活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)。

通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取AD靶點(diǎn)，以Score值≥10為限定條件進(jìn)行初步篩選，共得到286個(gè)AD靶點(diǎn)；通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)獲取自噬靶點(diǎn)，共得到4 715個(gè)自噬靶點(diǎn)。

利用Bioinformatics取交集獲得“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)36個(gè)，得到韋恩圖見(jiàn)圖1，共同分子靶點(diǎn)見(jiàn)表2。

表1 活血榮絡(luò)方中活性化合物基本信息

2.3 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建采用String數(shù)據(jù)庫(kù)及Cytoscape軟件對(duì)“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)分析，得出PPI網(wǎng)絡(luò)圖。設(shè)定20≤Degree＜30為紅色；15≤Degree＜20為黃色；10≤Degree＜15為藍(lán)色；1≤Degree＜10為粉紅色，Degree值越大，節(jié)點(diǎn)越大，見(jiàn)圖2，靶點(diǎn)蛋白隨機(jī)游走概率見(jiàn)表3。

圖1 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)韋恩圖

該網(wǎng)絡(luò)圖中有36個(gè)靶點(diǎn)，包含36個(gè)節(jié)點(diǎn)，245條邊，平均聚類系數(shù)為0.676，其中包括APP（Degree＝29）、CASP3（Degree＝27）、MAPK3（Degree＝23）、TNF（Degree＝22）、MAPK8（Degree＝22）、IL6（Degree＝22）、CASP8（Degree＝21）、PSEN1（Degree＝21）、MAPK1（Degree＝21）等。結(jié)果表明，活血榮絡(luò)方可能通過(guò)多個(gè)作用靶點(diǎn)在阿爾茨海默病自噬機(jī)制中發(fā)揮作用。

圖2 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同靶點(diǎn)蛋白PPI網(wǎng)絡(luò)圖

表2 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)

表3 共同靶點(diǎn)隨機(jī)游走概率分析

2.4 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO和KEGG富集分析“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO分析，共富集出10個(gè)生物進(jìn)程（BP），結(jié)合“P-Value”值，加權(quán)集合覆蓋后獲得5個(gè)最相關(guān)生物過(guò)程，依次為突觸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控、肽絲氨酸修飾、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌起源分子的反應(yīng)、積極調(diào)控蛋白水解。根據(jù)“Ratio”“P-Value”“FDR”值繪制火山圖如圖3-BP。

“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO分析，共富集出29個(gè)細(xì)胞組分（CC），結(jié)合“P-Value”值，加權(quán)集合覆蓋后獲得7個(gè)最相關(guān)細(xì)胞組分，依次為膜區(qū)、神經(jīng)細(xì)胞體、軸突部分、突觸前、包涵體、去極化增長(zhǎng)點(diǎn)、神經(jīng)脊柱。根據(jù)“Ratio”“P-Value”“FDR”值繪制火山圖如圖3-CC。

“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO分析，共富集出16個(gè)分子功能（MF），結(jié)合“P-Value”值，加權(quán)集合覆蓋后獲得9個(gè)最相關(guān)分子功能，依次為內(nèi)肽酶活性、天冬氨酸肽酶活性、半胱氨酸型肽酶活性、蛋白質(zhì)絲氨酸／蘇氨酸／酪氨酸激酶活性、蛋白質(zhì)絲氨酸／蘇氨酸激酶活性、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合、細(xì)胞因子受體結(jié)合、tau蛋白結(jié)合、蛋白質(zhì)自締合。根據(jù)“Ratio”“P-Value”“FDR”值繪制火山圖如圖3-MF。

“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)KEGG分析，共富集出9 696條信號(hào)通路，結(jié)合“P-Value”值，依次為老年癡呆癥、細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、百日咳、非酒精性脂肪肝病、C型凝集素受體信號(hào)通路、結(jié)核、卡波西氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、軍團(tuán)菌病。根據(jù)“Ratio”“P-Value”“FDR”值繪制火山圖如圖4。

2.5 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)miRNA預(yù)測(cè)及網(wǎng)絡(luò)分析TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)中反向預(yù)測(cè)出共同靶點(diǎn)782個(gè)miRNA-mRNA相互作用，在Cytoscape軟件中將共同靶點(diǎn)的mRNA設(shè)置為“三角形”“紅色”；將反向預(yù)測(cè)的miRNA設(shè)置為“圓形”“淡黃色”，可視化如圖5。

圖3 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)GO富集分析BP、CC、MF火山圖

圖4 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)KEGG富集分析火山圖

圖5 “活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同靶點(diǎn)mRNA-miRNA相互作用預(yù)測(cè)關(guān)系

WebGestalt數(shù)據(jù)庫(kù)反向預(yù)測(cè)miRNA，所有共同靶點(diǎn)mRNA富集在88個(gè)miRNA中，加權(quán)集合覆蓋分析后得出10個(gè)最相關(guān)miRNA，得出“Expect”“Ratio”“P-Value”值，具體見(jiàn)表4。

表4 mRNA-miRNA預(yù)測(cè)及加權(quán)集合覆蓋分析后結(jié)果

整合兩個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)，明確共同靶點(diǎn)miRNA-mRNA最可能預(yù)測(cè)關(guān)系，即miR-302A-GSK3B；miR-513-ACHE／DRD3／NTRK2；miR -193A／miR -193B-PLAU；miR-217-MAPK1；miR-18AMAPT；miR-200A／miR-141-DRD2／PSEN1／TTR；miR-101-DYRK1A／PTGS2；miR-153-SNCA；miR-520G／miR-520H-DYRK1A；miR-506-CAPN1／ERN1／PSEN1。

3 討論

《素問(wèn)·痹論》云：“榮者，水谷之精氣也，和調(diào)于五臟，灑陳于六腑，乃能入于脈也，故循脈上下，貫五臟，絡(luò)六腑也?！睒s者，滋人體，養(yǎng)神色，主生化也［12］；榮氣者，精微物質(zhì)之總稱也，屬陰中之陰［13］，“陽(yáng)化氣，陰化形”，人體形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能代謝及精神意識(shí)皆由榮氣所化生。榮氣為《黃帝內(nèi)經(jīng)》中“物質(zhì)、功能、轉(zhuǎn)化”之氣［14］，能滋形骸，榮腦髓，其氣化流通得暢，則神機(jī)守，神氣顯，陰平陽(yáng)秘，氣血暢達(dá)。故榮氣足則五臟俱榮，化髓有源，神機(jī)得守，則腦髓得以用，精神佳，記憶強(qiáng)。榮氣異常表現(xiàn)為榮氣虛、榮氣滯［15］，二者同時(shí)共存，相互影響轉(zhuǎn)化，榮氣虛滯則機(jī)體榮養(yǎng)與生發(fā)功能障礙。腦為“髓?！薄捌婧阒保啬X髓，傳神機(jī)，為元神之府，為五臟六腑精、氣、神匯聚之所。榮氣虛滯則腦髓失養(yǎng)，神機(jī)失用，五神失職，則靈機(jī)退失，發(fā)為癡呆，故榮氣虛滯是癡呆的基本病機(jī)?；钛獦s絡(luò)法以滋陰活血為主，滋陰基礎(chǔ)上結(jié)合臟腑病位聯(lián)合補(bǔ)氣、補(bǔ)血、補(bǔ)精等，活血基礎(chǔ)上配伍理氣、化痰、清熱、瀉實(shí)等，佐以開(kāi)竅。

生物信息學(xué)是生物醫(yī)學(xué)與計(jì)算機(jī)科學(xué)的綜合體，利用數(shù)學(xué)分析方法，已成為系統(tǒng)生命學(xué)的重要組成部分［16］。通過(guò)分子網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)挖掘方法分析DNA、RNA、蛋白質(zhì)等生物分子以網(wǎng)絡(luò)整體調(diào)控模式參與機(jī)體的生命過(guò)程?！氨孀C論治”“整體觀念”是中醫(yī)學(xué)基本特色，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)挖掘等生命信息學(xué)從系統(tǒng)整體對(duì)藥物、疾病、機(jī)制進(jìn)行科學(xué)認(rèn)識(shí)，兩者具有高度契合度。本研究采用生物信息學(xué)方法，挖掘活血榮絡(luò)方活性成分、篩選分析“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同靶點(diǎn)，從分子、基因角度研究活血榮絡(luò)方通過(guò)自噬治療AD的作用機(jī)制。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，得到活血榮絡(luò)方有效活性化合物中，雞血藤14個(gè)、黃精7個(gè)、乳香8個(gè)、川芎6個(gè)，共預(yù)測(cè)出567個(gè)活血榮絡(luò)方靶點(diǎn)，提示活血榮絡(luò)方的治療作用與其有效活性化合物整體協(xié)同調(diào)節(jié)567個(gè)靶點(diǎn)有關(guān)。進(jìn)一步挖掘“疾病-表型”，即“AD-自噬”的靶點(diǎn)，采用韋恩圖交集分析“活血榮絡(luò)方-AD-自噬”共同靶點(diǎn)36個(gè)。前期研究結(jié)果證實(shí)活血榮絡(luò)方治療AD主要與上調(diào)Wnt5α、Fz5、Ca MKII、AchE、ChAT等靶點(diǎn)有關(guān)［17-18］，與本研究網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘出的靶點(diǎn)有高度重合，提示活血榮絡(luò)方可能多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)自噬在治療AD中發(fā)揮的作用。

PPI網(wǎng)絡(luò)結(jié)果表明，“藥物-疾病-表型”共同靶點(diǎn)具有整體復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)相互作用關(guān)系?；钛獦s絡(luò)方主要通過(guò)炎癥因子、腫瘤壞死因子、細(xì)胞程序性死亡因子等多種分子相互作用調(diào)節(jié)自噬治療AD。GO、KEGG富集結(jié)果表明，活血榮絡(luò)方能多靶點(diǎn)、多結(jié)構(gòu)、多形式地參與生物進(jìn)程，預(yù)測(cè)得出在膜區(qū)、神經(jīng)細(xì)胞體、軸突部分等細(xì)胞成分中，活血榮絡(luò)方通過(guò)AD信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路調(diào)控內(nèi)肽酶、天冬氨酸肽酶、半胱氨酸型肽酶等活性，影響突觸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命過(guò)程?！盎钛獦s絡(luò)方-AD-自噬”共同分子靶點(diǎn)反向預(yù)測(cè)miRNA并加權(quán)覆蓋集合分析結(jié)果表明，多個(gè)miRNA參與此過(guò)程，整合PPI、GO、KEGG數(shù)據(jù)，推測(cè)活血榮絡(luò)方調(diào)節(jié)自噬治療AD中miRNA-531、miRNA-217、miRNA-200A等靶向結(jié)合共同靶點(diǎn)mRNA抑制其翻譯過(guò)程。AD主要病理變化是機(jī)體β-淀粉前體蛋白β樣蛋白在胞外沉積，從而形成老年斑。APP是跨膜蛋白，能被β-分泌酶、APP切割酶、γ-分泌酶切割形成Aβ，APP／Aβ失衡能使機(jī)體內(nèi)自噬體中Aβ沉積［19］，因此自噬在AD的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)自噬下調(diào)會(huì)導(dǎo)致APP及γ-分泌酶異常表達(dá)，產(chǎn)生毒性Aβ致AD疾病發(fā)展［20］。CASP3、CASP8、MAPK3、MAPK8、MAPK1是細(xì)胞凋亡通路關(guān)鍵分子，TNF、IL6是炎癥相關(guān)通路（IL-17信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路）關(guān)鍵分子。大量研究發(fā)現(xiàn)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族基因可在AD中過(guò)表達(dá)，如Ayala-Grosso等［21］采用波譜蛋白共定位法證明CASP3在AD患者大腦中表達(dá)上調(diào)，且Fricker［22］證實(shí)其能進(jìn)一步促進(jìn)IL-1、IL-1β、TNFα和NO的產(chǎn)生，導(dǎo)致APP基因裂解的Aβ和tau過(guò)度磷酸化，從而誘導(dǎo)老年斑形成和神經(jīng)元程序性死亡?；谇捌趫F(tuán)隊(duì)研究成果并結(jié)合PPI、GO、KEGG富集分析得出，活血榮絡(luò)方可能通過(guò)多靶點(diǎn)、多途徑、多通路，以網(wǎng)絡(luò)化形式影響多種機(jī)制，從而調(diào)節(jié)自噬治療阿爾茨海默病，其中主要通過(guò)調(diào)控AD信號(hào)通路中APP與PSEN1分子表達(dá)，并協(xié)同調(diào)控凋亡和炎癥反應(yīng)通路相關(guān)分子表達(dá)，影響自噬途徑治療AD。

miRNA是一類廣泛存在于真核生物中的長(zhǎng)度約為22個(gè)nt的非編碼RNA，一般認(rèn)為成熟miRNA 5′端的2～8位核苷酸序列為種子序列，是miRNA與靶基因mRNA特異性結(jié)合的區(qū)域。在哺乳動(dòng)物中，miRNA形成后主要通過(guò)與目的基因mRNA3′UTR（非翻譯區(qū)）形成不完全互補(bǔ)配對(duì)，阻斷目的基因表達(dá)，從而調(diào)控哺乳動(dòng)物1／3的mRNA表達(dá)，參與多種生物學(xué)過(guò)程，被認(rèn)為具有極其重要的功能［23］。研究發(fā)現(xiàn)miRNA-96能調(diào)節(jié)mTOR，在血管性癡呆自噬中起關(guān)鍵作用［24］；miRNA-214-3p作為新的神經(jīng)保護(hù)因子在AD中能抑制自噬并減輕神經(jīng)元 凋 亡［25］；Chen等［26］最 新 研 究 發(fā) 現(xiàn) 上 調(diào)miRNA-34a能介導(dǎo)SIRT1／mTOR信號(hào)通路預(yù)防阿爾茨海默病，整合TargetScan、WebGestalt數(shù)據(jù)庫(kù)，利用加權(quán)集合覆蓋分析，得出miR-302A、miR-513、miR-193是最可能參與活血榮絡(luò)方調(diào)控自噬治療AD的潛在miRNA。Kong等［27］采用μParafloTMmiRNA微陣列分析得出miRNA-193在果蠅AD模型中異常表達(dá)，但是其余miRNA尚未在AD疾病中報(bào)道，所以篩選出的miRNA是否在活血榮絡(luò)方調(diào)控自噬治療AD中發(fā)揮作用，需要后期進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

綜上所述，活血榮絡(luò)方可能調(diào)節(jié)自噬治療AD，其分子機(jī)制主要與活血榮絡(luò)方中的β-谷甾醇、芒柄花黃素、豆甾醇等多種有效活性成分，協(xié)同調(diào)節(jié)APP、SNCA、PTGS2等多靶點(diǎn)與多miRNA，通過(guò)發(fā)揮內(nèi)肽酶活性、天冬氨酸肽酶活性、半胱氨酸型肽酶活性等多分子功能，在膜區(qū)、神經(jīng)細(xì)胞體、軸突部分等多細(xì)胞組分中，參與突觸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控、肽絲氨酸修飾、對(duì)氧化應(yīng)激的反應(yīng)等多生命進(jìn)程，激活老年癡呆癥、細(xì)胞凋亡、IL-17信號(hào)通路等多通路有關(guān)，為進(jìn)一步研究及開(kāi)發(fā)活血榮絡(luò)方提供理論依據(jù)。