吳浩杰, 周瑞堂, 倪 寧
(1. 西安市第一醫(yī)院心內(nèi)科, 西安 710002; 2. 西安市第一醫(yī)院中醫(yī)科, 西安 710002 3. 西安交通大學(xué)醫(yī)院內(nèi)科, 西安 710049)
高血壓(hypertension)是臨床上慢性疾病中較為常見(jiàn)的一種,也是多種疾病的主要危險(xiǎn)因素。根據(jù)《中國(guó)心血管病報(bào)告2016》[1]概要顯示,我國(guó)目前已發(fā)現(xiàn)高血壓患者約2.7億例。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展,人們的生活習(xí)慣也隨之發(fā)生改變,高血壓患者越來(lái)越多,且發(fā)病人群越來(lái)越趨向年輕[2]。除嚴(yán)重?fù)p害和威脅人們的身體健康外,從中冠心病的藥物治療。高血壓還會(huì)引發(fā)各種嚴(yán)重的并發(fā)癥,例如腦卒中、冠心病、慢性腎臟疾病以及視網(wǎng)膜病變等等[3]。高血壓疾病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制較為復(fù)雜,其中血管內(nèi)皮功能的紊亂與高血壓發(fā)病密切相關(guān)[4]。有研究證實(shí),加味吳茱萸(Tetradium ruticarpum)湯對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的血壓具有一定的調(diào)節(jié)作用[5]。本研究初步探討加味吳茱萸湯對(duì)高糖高脂飲酒致大鼠高血壓及血管內(nèi)皮功能的影響。
SPF級(jí)雄性SD大鼠100只,8周齡,體質(zhì)量140~160 g,由長(zhǎng)沙天勤有限責(zé)任公司[SCXK(湘)2019-0023]提供,飼養(yǎng)于屏障設(shè)施[SYXK(湘)2019-0013]內(nèi)。每籠5只,正常飼料適應(yīng)性喂養(yǎng),自由飲水,實(shí)驗(yàn)前觀察1周,各大鼠活動(dòng)、進(jìn)食、糞便以及一般情況均無(wú)異常變化后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
加味吳茱萸湯由西安市第一醫(yī)院藥劑科調(diào)配、煎制,基本方組成:吳茱萸60g,石決明60 g,天麻60 g,黃芪60 g,夏枯草60 g,當(dāng)歸60 g,人參60 g,大棗45 g,丹參50 g,甘草50 g。按此方比例稱取藥物,加水煎煮2次,每1次加12倍量蒸餾水。每次煎煮1 h,取濾液,加工減壓濃縮至相對(duì)密度1.25~1.30(70 ℃)備用(后面治療組湯藥每毫升相當(dāng)于0.5 g原藥)。紅星二鍋頭酒(乙醇體積分?jǐn)?shù)52%,北京紅星股份有限公司)。細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)(CD54)免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自武漢博士德公司;125I內(nèi)皮縮血管肽-1(125I-ET-1)放射免疫試劑盒購(gòu)自北京北方生物技術(shù)研究所;一氧化氮(NO)測(cè)試盒(一步法)購(gòu)自南京賽維爾生物有限公司。內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒購(gòu)自中國(guó)上海英展機(jī)電企業(yè)有限公司(EXCELL)。Medlab大鼠無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)購(gòu)自中國(guó)南京卡爾文生物科技有限公司。高糖高脂飼料購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(基礎(chǔ)飼料68.8%,蔗糖10.0%,蛋黃粉10.0%,豬油10.0%,膽固醇1.0%,膽鹽0.2%)。
100只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后,20只大鼠作為正常對(duì)照組,給予普通飼料,自由飲水。其余80只大鼠給予高糖高脂飼料及梯度飲酒以制備高血壓大鼠模型[6]:大鼠給予高糖高脂飼料,同時(shí)給予勾兌成乙醇體積分?jǐn)?shù)為5%的白酒,連續(xù)1周后將酒的乙醇體積分?jǐn)?shù)提升為10%,以后每隔1周將乙醇體積分?jǐn)?shù)提升2%,直到18%。然后每周將乙醇體積分?jǐn)?shù)提升1%,直到22%,再連續(xù)喂養(yǎng)至17周完成造模。造模17周后,通過(guò)無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)連續(xù)5 d且同一時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)量血壓,收縮壓(SBP)持續(xù)高于160 mmHg,舒張壓(DBP)持續(xù)高于130 mmHg,即認(rèn)為高糖高脂飼料加飲酒誘導(dǎo)高血壓模型成功。
將造模成功的大鼠隨機(jī)分為4組,每組20只,分別為高血壓模型組、低劑量治療組[5 mL·kg-1·d-1]、中劑量治療組[10 mL·kg-1·d-1]和高劑量治療組[20 mL·kg-1·d-1]。采用不同濃度的加味吳茱萸湯藥液每日定時(shí)灌胃給藥,20只正常對(duì)照組和高血壓模型組大鼠以蒸餾水[10 mL·kg-1·d-1]灌胃,全部大鼠每日灌胃1次,連續(xù)灌胃6周。
實(shí)驗(yàn)前、造模后(給藥前)及治療完成后用動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)連續(xù)5 d且同一時(shí)間點(diǎn)分別測(cè)量各組大鼠的SBP、DBP、平均動(dòng)脈壓(MBP)和心率(HR),并且記錄數(shù)值。
末次給藥后,大鼠腹腔注射8%戊巴比妥鈉(5 mL/kg)麻醉,腹主動(dòng)脈取血(過(guò)程中不注入抗凝劑)。5 mL后室溫下靜置20 min,以3 000 r/min離心15 min,吸取上清液用于ICAM-1、ET-1、NO及eNOS的檢測(cè),測(cè)定方法按相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書(shū)。
采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。呈正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以x-±s表示,多組正態(tài)分布計(jì)量資料使用單因素方差分析進(jìn)行多組樣本均數(shù)的比較,采用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
與正常對(duì)照組比較,造模后(給藥前)各組大鼠的SBP和DBP明顯升高(P<0.05);與高血壓模型組比較,在治療后中劑量與高劑量治療組的SBP和DBP明顯下降(P<0.05)(表1)。
與正常對(duì)照組比較,造模后(給藥前)各組大鼠的MBP明顯升高(P<0.05);與高血壓模型組比較,在治療完成后中劑量與高劑量治療組的MBP明顯下降(P<0.05)。各組大鼠在治療前后HR的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。
與正常對(duì)照組比較,各治療組大鼠的ICAM-1和ET-1水平明顯升高,NO和eNOS水平明顯降低(P<0.05);與高血壓模型組比較,中劑量與高劑量治療組的ICAM-1和ET-1水平明顯升高,而NO和eNOS水平明顯降低(P<0.05)(表3)。
表 1 各組大鼠治療前后的SBP、DBP水平比較Table 1 The systolic blood pressure (SBP) and diastolic blood pressure (DBP) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)
表 2 各組大鼠治療前后的MBP、HR水平比較Table 2 The mean arterial pressure (MBP) and heart rate (HR) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)
表 3 各組大鼠治療后血清中ICAM-1、ET-1、NO、eNOS水平比較Table 3 The serum contents of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), endothelin-1 (ET-1), nitric oxide (NO)and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)
目前,全球高血壓患者已超10億人,中國(guó)成人高血壓患病率高達(dá)33.5%,患病人數(shù)近3.3億[7-8]。研究[9-10]表明,高血壓患者具有明顯的血管內(nèi)皮損傷情況,因此與血管內(nèi)皮損傷相關(guān)的因子表現(xiàn)出異常的表達(dá)狀態(tài)。在臨床檢測(cè)指標(biāo)中與血管內(nèi)皮功能相關(guān)的因子相對(duì)較多,例如ICAM-1、ET-1、NO和eNOS都是評(píng)估血管內(nèi)皮功能的常用指標(biāo)[11-12]。其中ICAM-1在炎性反應(yīng)介導(dǎo)過(guò)程中發(fā)揮重要作用,同樣在白細(xì)胞與血管內(nèi)皮之間的粘附過(guò)程中也發(fā)揮重要作用,另外,對(duì)病理狀態(tài)下導(dǎo)致的血管內(nèi)皮炎性損傷具有更重要的評(píng)估意義[13-14]。eNOS由血管內(nèi)皮細(xì)胞生成,eNOS過(guò)度表達(dá)后eNOS含量、NO活性和cGMP水平均上調(diào)。血管中氧自由基產(chǎn)生過(guò)多,氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷血管內(nèi)皮功能,并促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖和肥大,導(dǎo)致血管重構(gòu),從而參與高血壓病發(fā)生、發(fā)展和靶器官損害[15-16]。
目前,藥物治療加上健康的生活方式管理是針對(duì)高血壓最主要的治療方法。中藥在心血管疾病的治療中有著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。已有文獻(xiàn)[17-18]報(bào)道,加味吳茱萸湯用吳茱萸疏肝降氣、溫胃散寒,人參和大棗補(bǔ)氣健脾,石決明和天麻平肝潛陽(yáng),黃芩和夏枯草清肝郁熱,當(dāng)歸和丹參養(yǎng)血活血,甘草調(diào)和諸藥,故能起到降肝氣之上逆,健中氣以運(yùn)脾,補(bǔ)陰血以養(yǎng)肝腎的標(biāo)本兼治作用,因而具有顯著的降壓效果。基于此理論,本實(shí)驗(yàn)采用加味吳茱萸湯治療誘發(fā)的大鼠高血壓,取得了較好的療效。
本研究發(fā)現(xiàn),中劑量與高劑量的加味吳茱萸湯對(duì)高糖高脂飼料及飲酒致高血壓模型大鼠的SBP和DBP都具有一定的調(diào)節(jié)作用。與高血壓模型組比較,在治療完成后中劑量與高劑量治療組大鼠的SBP和DBP呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。通過(guò)檢測(cè)各組大鼠血液中ICAM-1、ET-1、NO和eNOS的水平,發(fā)現(xiàn)治療完成后中劑量與高劑量治療組大鼠的ICAM-1和ET-1水平明顯低于高血壓模型組,且趨近于正常組,而NO和eNOS水平明顯高于高血壓模型組。該結(jié)果為臨床高血壓患者的治療用藥提供了一定的參考。